亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        結(jié)晶紫-ZnS-BSA光度法測(cè)定蛋白質(zhì)的含量

        2012-12-03 05:44:48胡衛(wèi)平焦嫚董學(xué)芝王鑫
        食品研究與開發(fā) 2012年5期
        關(guān)鍵詞:緩沖溶液光度法結(jié)晶

        胡衛(wèi)平,焦嫚,董學(xué)芝,王鑫

        (河南大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院環(huán)境與分析科學(xué)研究所,河南 開封 475004)

        蛋白質(zhì)是人類生命活動(dòng)中最重要的物質(zhì)基礎(chǔ),基本組成單位是氨基酸,組成蛋白質(zhì)的氨基酸有20余種,體內(nèi)只能合成一部分,其余則由食物蛋白質(zhì)供給,準(zhǔn)確測(cè)定蛋白質(zhì)的含量是評(píng)價(jià)一種食品質(zhì)量的重要手段[1]。目前蛋白質(zhì)含量的測(cè)定方法很多,蛋白質(zhì)的測(cè)定方法主要有紫外吸收法[2]、共振瑞利散射法[3]、電感耦合等離子體法[4]、流動(dòng)注射法[5]等。

        紫外分光光度法由于操作簡(jiǎn)單、儀器使用方便、測(cè)定速度快等優(yōu)點(diǎn)應(yīng)用廣泛,目前分光光度法測(cè)定蛋白質(zhì)的研究主要是利用小分子有機(jī)染料與蛋白質(zhì)相結(jié)合的光譜探針方面。結(jié)晶紫是一種堿性三苯甲烷類染料,已有文獻(xiàn)報(bào)道,以結(jié)晶紫為顯色劑,與牛血清白蛋白(BSA)作用生成紫紅色配合物,并且吸光度較結(jié)晶紫明顯增大,從而測(cè)定蛋白質(zhì)的含量[6]。

        但是利用結(jié)晶紫與ZnS相結(jié)合并用分光光度法測(cè)定蛋白質(zhì)的含量鮮見報(bào)道?;赯nS與結(jié)晶紫作用可使結(jié)晶紫的吸光度降低,加入不同量的蛋白質(zhì),體系的吸光度逐漸增大,并且與BSA濃度在一定范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系。據(jù)此,建立了結(jié)晶紫-ZnS-BSA分光光度法測(cè)定蛋白質(zhì)含量的新方法。

        1 材料與方法

        1.1 試劑與儀器

        牛血清白蛋白(BSA):國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;B-R緩沖溶液(取濃度均為0.04 mol/L的硼酸、磷酸、醋酸混合溶液,用0.02 mol/L的NaOH調(diào)至所需pH);NaH2PO4(0.0175 mol/L)-Na2HPO4(0.0175 mol/L)緩沖溶液(pH=7.00);巰基乙酸(0.1 mol/L),Zn(Ac)2·2H2O(0.1 mol/L),Na2S(0.1 mol/L),結(jié)晶紫(10-4mol/L),濃氨水。所用試劑均為分析純,實(shí)驗(yàn)用水為二次蒸餾水。

        Labtech-1000紫外-可見分光光度計(jì):北京萊伯泰科儀器有限公司;pHS-3CT型酸度計(jì):上海大普儀器有限公司;CL-4型恒溫加熱磁力攪拌器:鄭州長城科工貿(mào)有限公司。

        1.2 ZnS量子點(diǎn)的制備

        在80mL的燒杯中,依次加入蒸餾水50mL、Zn(Ac)2·2H2O 5 mL、巰基乙酸5 mL,加熱到70℃,用濃氨水溶液調(diào)節(jié)pH到8.35。在磁力攪拌器作用下,緩慢加入Na2S 4 mL,攪拌2 h,得到一定粒徑大小的ZnS納米微粒。

        1.3 方法

        在10 mL容量瓶中,依次加入0.5 mL結(jié)晶紫溶液、3.5 mL NaH2PO4-Na2HPO4緩沖溶液、2 mL ZnS 溶液、含適量BSA的溶液,蒸餾水稀釋至刻度,搖勻。于30℃溫度下反應(yīng) 15 min,在最大吸收波長(λmax)590 nm處進(jìn)行測(cè)定。

        2 結(jié)果與討論

        2.1 體系的吸收光譜

        體系的吸收光譜示于圖1。

        圖1 紫外吸收光譜Fig.1 UV absorption spectrum

        可以看出BSA與ZnS在可見光區(qū)無吸收,結(jié)晶紫在590 nm處有最大吸收,加入ZnS溶液反應(yīng)后使結(jié)晶紫吸光度降低,隨著不同量BSA溶液的加入,體系的吸光度逐漸增大。

        2.2 酸度對(duì)體系吸光度的影響

        配制一系列不同pH的B-R緩沖溶液,按照試驗(yàn)方法,測(cè)定不同酸度下的吸光度A,以A對(duì)不同酸度(pH)作圖(見圖2)。

        圖2 酸度的影響Fig.2 Effect of Acidity

        試驗(yàn)表明,隨著pH的增大,A逐漸降低,但當(dāng)體系的酸度(pH)在6.0~8.0范圍內(nèi),體系A(chǔ)趨于穩(wěn)定,試驗(yàn)選擇pH為7.0的緩沖溶液。

        試驗(yàn)對(duì) Na2HPO4·12H2O-NaH2PO4、Na2HPO4-檸檬酸、檸檬酸-檸檬酸鈉、NaH2PO4-NaOH及B-R緩沖溶液進(jìn)行選擇,表明pH為7.0的Na2HPO4·12H2O-NaH2PO4緩沖溶液使體系的吸光度增加顯著。

        進(jìn)一步對(duì)緩沖溶液的用量進(jìn)行選擇,見圖3。

        圖3 緩沖溶液用量的影響Fig.3 Effect of the volume of buffer

        試驗(yàn)表明,隨著緩沖溶液用量的增加,A逐漸增大,在3.5 mL時(shí)體系吸光度達(dá)到最大。試驗(yàn)選擇pH7.0的 Na2HPO4·12H2O-NaH2PO4緩沖溶液 3.5 mL。

        2.3 結(jié)晶紫的用量對(duì)體系吸光度的影響

        按照試驗(yàn)方法,固定其他條件不變,取不同體積的結(jié)晶紫溶液(10-4mol/L),并測(cè)定體系的吸光度,見圖4。

        圖4 結(jié)晶紫溶液用量的影響Fig.4 Effect of the volume of methyl violet

        試驗(yàn)表明,隨著結(jié)晶紫用量的增加,吸光度逐漸增大,在0.5 mL后吸光度增加緩慢,因此選擇10-4mol/L的結(jié)晶紫溶液0.5 mL。

        2.4 ZnS的用量對(duì)體系吸光度的影響

        固定其他條件不變,改變ZnS的用量,測(cè)定體系的吸光度,以吸光度A對(duì)ZnS的用量作圖,見圖5。

        試驗(yàn)表明,隨著ZnS用量的增多,體系的吸光度逐漸降低,當(dāng)用量達(dá)到2.0 mL~3.0 mL時(shí),體系吸光度趨于穩(wěn)定。選擇ZnS溶液用量為2.0 mL。

        圖5 ZnS用量的影響Fig.5 Effect of the volume of ZnS

        2.5 反應(yīng)溫度和時(shí)間的影響

        用溫度控制儀調(diào)節(jié)水溫,在20℃~70℃溫度范圍內(nèi)分別測(cè)定溫度對(duì)體系吸光度的影響,結(jié)果表明,20℃~40℃體系較為穩(wěn)定,隨著溫度的升高,體系的吸光度逐漸升高,試驗(yàn)選擇溫度為30℃。

        在30℃的溫度下,測(cè)定反應(yīng)時(shí)間對(duì)體系的影響,見圖6。

        圖6 時(shí)間的影響Fig.6 Effect of the reaction time

        試驗(yàn)表明,隨反應(yīng)時(shí)間的增加,體系的吸光度逐漸升高,而反應(yīng)20 min后,吸光度增加緩慢,因此選定反應(yīng)時(shí)間為20 min。

        2.6 標(biāo)準(zhǔn)曲線

        按照試驗(yàn)方法,加入不同量的BSA,測(cè)定體系的吸光度,以吸光度A對(duì)BSA濃度C作圖,見7所示。

        試驗(yàn)表明,A與BSA濃度在0.0100mg/mL~4.400mg/mL范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系,回歸方程為A=2.0406+0.46050 C(mg/mL),相關(guān)系數(shù)R=0.9962,檢出限為0.009152 mg/mL。

        2.7 共存離子的干擾

        考察了常見的金屬離子及多種氨基酸對(duì)含有5μg/mL BSA體系的影響,結(jié)果表明,在±5%誤差允許范圍內(nèi),100倍的檸檬酸三鈉、淀粉、甘氨酸、蔗糖、葡萄糖、尿素、安賽蜜、三聚氰胺,50倍的L-谷氨酸,DL-蘋果酸、NaCl、NH4Cl、KCl,25 倍的 FeCl3、FeSO4、AlCl3,同倍的 BaCl2、Mg(NO3)2、Pb(NO3)2對(duì)試驗(yàn)均沒有影響。

        圖7 標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.7 The calibration curve

        2.8 樣品測(cè)定及與標(biāo)準(zhǔn)方法對(duì)照

        取肉松 6.5160 g、牛奶 1.9949 g、雞精 5.0050 g,分別稀釋定容至100 mL,振蕩5 h,使樣品中蛋白質(zhì)充分溶解。再取少量乙醚萃取3次除去樣品中的脂肪,棄去溶有脂肪的乙醚層,過濾,濾液即為待測(cè)液。按照試驗(yàn)方法,測(cè)定樣品中BSA的含量,且與考馬斯亮藍(lán)法做對(duì)照,結(jié)果見表1。

        2.9 加標(biāo)回收試驗(yàn)

        吸取一定量的樣品測(cè)試液,分別加入一定量的BSA標(biāo)準(zhǔn)溶液,按照實(shí)驗(yàn)方法做加標(biāo)回收試驗(yàn),結(jié)果見表2,可以看出樣品平均回收率較好,說明該方法較準(zhǔn)確。

        表1 樣品中BSA的測(cè)定結(jié)果Table1 Determination results of BSA samples

        表2 加標(biāo)回收試驗(yàn)Table 2 Recovery test

        3 結(jié)論

        利用ZnS與結(jié)晶紫作用,生成復(fù)合物,該復(fù)合物與蛋白質(zhì)作用,使體系吸光度顯著增大,采用分光光度法法測(cè)定樣品中蛋白質(zhì)的含量。該方法準(zhǔn)確、簡(jiǎn)單、快速、線性范圍寬,通過測(cè)定樣品并與標(biāo)準(zhǔn)方法做對(duì)照,結(jié)果滿意,可用于食品中蛋白質(zhì)含量的測(cè)定。

        [1]張紅英,王麗,郭愛靜.應(yīng)用Primacs SN總氮/蛋白質(zhì)分析儀測(cè)定食品中的蛋白質(zhì)[J].理化檢驗(yàn)-化學(xué)分冊(cè),2007,43(12):976-978

        [2]楊睿,劉紹璞.某些分子光譜法測(cè)定蛋白質(zhì)的進(jìn)展[J].分析化學(xué),2001,29(2):232-241

        [3]Long X F,Liu S P,Kong L,et al.A study on the interaction of proteins with some heteropoly compounds and their analytical application by resonance Rayleigh scattering method[J].Talanta,2004,3(63):279-286

        [4]Lamer-Déchamps S L,Poucheret P,Pérez J L.Validation of an inductively coupled plasma-mass spectrometry method to quantify tungsten in human plasma.Determination of percentage binding to plasma proteins[J].Clinica chimica acta,2003,327(23):39-46

        [5]Ying Li,Lijun Dong,Weiping Wang.Flow injection analysis-Rayleigh light scattering detection for online determination of protein in human serum sample[J].Analytical biochemistry,2006,354(4):64-69

        [6]杜鵑.結(jié)晶紫分光光度法測(cè)定蛋白質(zhì)的含量[J].化學(xué)分析計(jì)量,2006,15(4):46-47

        猜你喜歡
        緩沖溶液光度法結(jié)晶
        “長大”的結(jié)晶
        過氧化氫光度法快速測(cè)定新型合金包芯鈦線中的鈦
        山東冶金(2022年3期)2022-07-19 03:25:36
        紫外分光光度法測(cè)定水中總氮的關(guān)鍵環(huán)節(jié)
        幾種緩沖溶液簡(jiǎn)介及應(yīng)用*
        紫外分光光度法測(cè)定紅棗中Vc的含量
        基礎(chǔ)化學(xué)緩沖溶液教學(xué)難點(diǎn)總結(jié)
        科技視界(2017年25期)2017-12-11 20:30:32
        共聚甲醛的自成核結(jié)晶行為
        中國塑料(2016年9期)2016-06-13 03:18:50
        sPS/PBA-aPS共混物的結(jié)晶與熔融行為
        中國塑料(2015年7期)2015-10-14 01:02:40
        BAMO-THF共聚醚原位結(jié)晶包覆HMX
        緩沖溶液法回收置換崗位中二氧化硫尾氣
        河南科技(2014年15期)2014-02-27 14:12:29
        99久久精品日本一区二区免费| 福利视频偷拍一区二区| 国产农村妇女精品一区| 欧美成人在线视频| 亚洲肥老熟妇四十五十路在线| 性无码国产一区在线观看| 国产精品亚洲一区二区三区在线看| 真人抽搐一进一出视频| 越南女子杂交内射bbwxz| 日韩在线观看网址| 日本亚洲视频免费在线看 | 亚洲日韩∨a无码中文字幕| 尤物AV无码色AV无码麻豆| 视频一区视频二区自拍偷拍| 国产精品久久久久9999无码| 十八岁以下禁止观看黄下载链接| 日本一区免费喷水| 午夜男女靠比视频免费| 日韩av无码精品一二三区| 五月天激情综合网| 永久免费中文字幕av| 色综合久久中文综合网亚洲| 亚洲毛片αv无线播放一区| 久久无码高潮喷水免费看| 日本高清一区二区三区不卡| 国产成人无码a区在线观看导航| 亚洲av无码国产剧情| 国产精品久久无码免费看| 少妇被爽到高潮喷水免费福利| 被三个男人绑着躁我好爽视频| 国产激情电影综合在线看| 国产99视频一区二区三区| 伊人久久综合无码成人网| 性xxxx视频播放免费| 在线a人片免费观看高清| 国产激情视频在线观看大全| 一区二区三区国产| 国产AV无码专区亚洲AV桃花庵 | a午夜国产一级黄片| 亚洲av乱码一区二区三区人人| 亚洲av无码成人网站在线观看|