張萬強，楊麗平，宋慶慧，朱 嘉，王 震，馬 淵△

(1.中國中醫(yī)科學院望京醫(yī)院藥理室，北京 100102;2.中國中醫(yī)科學院中醫(yī)基礎(chǔ)理論研究所，北京 100700)

白脈軟膏是藏醫(yī)臨床常用的消腫、止痛、干黃水的傳統(tǒng)藏藥配方，是藏醫(yī)治療骨關(guān)節(jié)疾病的代表方劑［6、7］。依據(jù)傳統(tǒng)藏醫(yī)學骨傷治療理論，結(jié)合現(xiàn)代醫(yī)學的研究技術(shù)方法和指標，對藏藥中治療骨關(guān)節(jié)病的經(jīng)典方劑如白脈軟膏等所含有效成分的作用及其機制的研究，不僅能夠充實和豐富藏醫(yī)學理論，更能夠為骨關(guān)節(jié)疾病的治療尋找新的更安全有效的治療藥物。本研究以機械法建立家兔橈骨骨折模型，觀察白脈軟膏對骨折愈合過程的影響，并與傳統(tǒng)骨傷治療藥物傷科接骨片進行比較。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物 清潔級新西蘭大白兔60只，體重 2.5kg～3.0kg，雌雄各半，單籠飼養(yǎng)，由中國中醫(yī)科學院實驗動物中心提供，飼養(yǎng)于中國中醫(yī)科學院基礎(chǔ)理論研究所實驗動物室。

1.1.2 儀器 自主研制實驗動物步態(tài)測試系統(tǒng)及分析軟件，自主研制實驗動物軟組織張力測試儀，WDT電子萬能試驗機(深圳市凱強利試驗儀器有限公司)，東方紅F30-IIF200 max X線攝片機(北京醫(yī)用射線機廠)，AO-820組織切片機(美國)，400倍奧林巴斯光學顯微鏡(日本)。

1.1.3 藥品及試劑 白脈軟膏由奇正(北京)傳統(tǒng)藏醫(yī)藥外治研究院有限公司提供，傷科接骨片為大連美羅中藥廠有限公司產(chǎn)品(批號國藥準字221021461)，烏拉坦、慶大霉素均購自中國中醫(yī)科學院實驗動物中心。

1.2 方法

1.2.1 動物分組 按照隨機分組法，將實驗動物隨機分為6組，每組10只，分別為正常對照組、骨折模型組、傷科接骨片給藥組(0.35g/kg)、白脈軟膏低、中、高劑量組(0.33、0.67、1.34g/kg，以 5cm/g計外敷)。

1.2.2 骨折模型制備 主要實驗流程參考侯筱魁等研究報道［8］，具體如下:各組動物麻醉后，右前腿剪毛后消毒皮膚，切開皮膚暴露橈骨，采用電子萬能材料實驗機造成骨折模型，形成家兔橈骨骨折模型，骨折不固定，縫合皮膚，包扎傷口。術(shù)后用慶大霉素4 mg/kg肌注3 d預防感染，造模后拍攝X光片以確認骨折模型是否成功，正常組動物不進行骨折造模。

1.2.3 給藥處理 各實驗組術(shù)后每天按劑量分別給予相應(yīng)藥物，傷科接骨片組動物灌胃給予傷科接骨片，白脈軟膏組動物于骨折處外敷相應(yīng)劑量白脈軟膏，每日給藥1次。

1.2.4 觀察 骨折7d基本著地后，通過采集家兔行走時雙前肢的步態(tài)曲線，測量患側(cè)與健側(cè)肢著地最大力值，3d測試1次，以后每周1次 ，共計10次。通過對正常皮膚與腫脹皮膚表面張力的測試，確定骨折動物皮膚表面張力的恢復情況。.

外骨痂與骨折線評分及標本采集參考已有報道［9］，分別于骨折后第 7、14、60 天拍攝患肢 X 線片，采用盲法X線讀片，評價兩項參數(shù)根據(jù)骨折愈合過程中外骨痂和骨折線的變化規(guī)律，將外骨痂和骨折線按文獻報道進行X線評分分析。給藥60d處死各組實驗動物，后取骨折局部組織，10%福爾馬林固定，乙酸脫鈣，常規(guī)制成脫鈣石蠟切片，HE染色觀察。

1.3 統(tǒng)計學處理方法

采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件包進行統(tǒng)計分析，各組數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差表示，組間比較用 One-way ANOVA，兩兩顯著性比較采用LSD法，顯著性標準為 P＜0.05。

2 結(jié)果

2.1 外用白脈軟膏對兔橈骨骨折愈合過程中傷腿著地力的影響

外用白脈軟膏高劑量組動物骨折13d后患肢著地力明顯高于骨折模型組，外用白脈軟膏中低劑量及口服傷科接骨片可明顯升高骨折16d后動物的患肢著地力，骨折47d后各組動物患肢著地力均恢復至生理水平，各組間無顯著性差異。

2.2 外用白脈軟膏對兔橈骨骨折愈合過程中傷腿肌張力的影響

骨折模型動物傷腿肌張力明顯升高，口服傷科接骨片可進一步升高模型動物骨折后1d至9d的患肢肌張力，表現(xiàn)為下陷深度降低。白脈軟膏低、中劑量外用可升高患肢肌張力，高劑量則表現(xiàn)出降低肌張力的作用。

2.3 外用白脈軟膏對兔橈骨骨折愈合過程中骨痂X射線掃描評分的影響

骨折模型動物骨折后第7、14天及第60天骨痂X射線掃描評分明顯低于正常對照組?？诜平庸瞧瑢钦勰Ｐ蛣游锕丘杼嶺射線評分沒有影響。外用白脈軟膏低及高劑量可分別升高模型動物第14天及第60天骨痂處X射線掃描評分。

2.4 外用白脈軟膏對兔橈骨骨折60d后骨痂形成的影響

正常對照組鏡下骨組織形態(tài)、結(jié)構(gòu)正常，可見密質(zhì)骨呈板層狀，骨陷窩排列整齊有序，結(jié)構(gòu)完整，未見骨組織缺損及其他病理改變。

骨折模型組、傷科接骨片組及白脈軟膏低、中劑量組鏡下可見，骨痂處有新生骨小梁和間斷的新生骨板。白脈軟膏高劑量組鏡下可見新骨生長，新生骨組織為骨小梁和新生骨板，并有較多的骨小梁間隙(見圖1)。

圖1 外用白脈軟膏對兔橈骨骨折60d后骨痂形成處骨組織結(jié)構(gòu)的影響

3 討論

從以上數(shù)據(jù)可知，采用電子萬能材料實驗機造成家兔橈骨骨折動物模型，其表現(xiàn)出多方面與臨床骨折相似的功能學及病理結(jié)構(gòu)等方面的損傷性改變，傳統(tǒng)骨傷治療藥物傷科接骨片可以升高患肢著地力和肌張力，表現(xiàn)出促進患肢功能改善，促進其骨傷愈合的作用，說明該骨折模型動物可以比較客觀地反映骨折及愈合過程中的功能、生理及病理學改變，并可用于相關(guān)干預藥物的研究。該實驗動物模型數(shù)據(jù)與以往報道相符［10～12］，相關(guān)藥物研究數(shù)據(jù)可靠。

我國傳統(tǒng)醫(yī)學中有許多治療骨關(guān)節(jié)疾病的藥物長久在民間流傳，其中以藏族傳統(tǒng)醫(yī)學最具有鮮明特色。傳統(tǒng)藏醫(yī)骨傷科治療方法是藏醫(yī)學的重要組成部分，它是藏族人民在特有的生產(chǎn)生活習俗及地理環(huán)境中，同自然尤其是同傷病長期斗爭的經(jīng)驗結(jié)晶。藏醫(yī)學把骨、關(guān)節(jié)及其周圍軟組織的疾病，統(tǒng)稱為“關(guān)節(jié)黃水病”。白脈和干黃水方劑是藏醫(yī)中治療骨傷疾病的主要藥物，白脈軟膏是藏醫(yī)臨床上常用的消腫、止痛、干黃水的傳統(tǒng)藏藥經(jīng)典復方，是藏醫(yī)治療骨關(guān)節(jié)疾病的代表方劑［13］。

本研究表明，外用白脈軟膏及口服傷科接骨片均可明顯增加骨折模型動物患肢著地力，外用白脈軟膏低、中劑量及口服傷科接骨片可以增加患肢肌張力，白脈軟膏高劑量給藥組則表現(xiàn)出降低患肢肌張力的作用，提示外用白脈軟膏對肌張力具有雙相調(diào)節(jié)的特點。研究中還發(fā)現(xiàn)，外用白脈軟膏可分別升高模型動物骨折后第14天及第60天骨痂處X射線掃描評分，對骨痂形成處骨小梁和骨板新生具有明顯的促進作用，提示白脈軟膏可加速骨痂的愈合過程以及骨痂處骨小梁的成熟過程［14］，對骨痂形成局部的骨代謝具有調(diào)節(jié)作用。

依據(jù)傳統(tǒng)藏醫(yī)學骨傷治療理論，結(jié)合現(xiàn)代醫(yī)學的研究技術(shù)方法和指標，對藏藥中治療骨關(guān)節(jié)病的經(jīng)典方劑所含有效成分的作用及其機制進行研究，不僅能夠充實和豐富藏醫(yī)學理論，更能夠為慢性骨關(guān)節(jié)病的治療尋找新的更安全的治療藥物。我們的研究結(jié)果表明，外用白脈軟膏對骨折模型動物骨傷愈合過程具有明顯的促進作用，其促進骨傷愈合作用與傳統(tǒng)骨傷治療藥物傷科接骨片相近，其對肌張力具有雙相調(diào)節(jié)的作用特點，并對骨痂形成過程中骨小梁和骨板的新生和骨痂成熟具有明顯的促進作用。而白脈軟膏治療骨傷的藥效學特點及物質(zhì)基礎(chǔ)有待于進一步深入研究。

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