張 婷，葉建州，唐浩然，駱始華，張 超，淤澤溥

(云南中醫(yī)學(xué)院，云南昆明 650500)

“雅解”為傣語，意譯為解藥，是在傣族地區(qū)廣為使用的民族藥物。傣醫(yī)“雅解”理論和“雅解” (解藥)是傣醫(yī)藥最具特色的理論和方藥之一。傣醫(yī)“雅解”理論強(qiáng)調(diào)疾病的發(fā)生與體內(nèi)各種毒有關(guān)。其核心內(nèi)容是“未病先解、先解后治”防治疾病思想和治療原則及方法。認(rèn)為在疾病尚未發(fā)生之前，通過采取“雅解”(解藥)的預(yù)防及治療措施，調(diào)節(jié)人體生理功能、解除人體的各種毒素，以保持體內(nèi)四塔、五蘊(yùn)功能的平衡和協(xié)調(diào)，防止疾病的發(fā)生;或當(dāng)人體發(fā)病后應(yīng)先服用“雅解”(解藥)，以解除導(dǎo)致人體發(fā)病的各種毒素;或患病日久或久治不愈者，可服用“雅解”(解藥)以解除失治、誤治或用藥不當(dāng)所造成的毒副作用，以解除人體的各種毒素，調(diào)節(jié)人體生理功能，保持體內(nèi)“四塔五蘊(yùn)”和臟腑功能的平衡和協(xié)調(diào)［1］。

“雅解沙把”是云南西雙版納傣族自治州傣醫(yī)醫(yī)院創(chuàng)制的院內(nèi)制劑，由百樣解、傣百解、定心藤、奶子藤、白花臭牡丹根等藥物組成，是傣醫(yī)解藥的代表方藥。全方具有調(diào)平四塔的功能，能解熱毒及其多種毒。根據(jù)其臨床常用于解濕疹、動(dòng)物叮咬及多種藥物、食物等引起軀體不適之毒的經(jīng)驗(yàn)，筆者認(rèn)為“雅解沙把”的解毒作用可能與其具有抗變態(tài)反應(yīng)的作用有關(guān)。

本實(shí)驗(yàn)通過建立Ⅰ、Ⅳ型變態(tài)反應(yīng)動(dòng)物模型來研究傣藥“雅解沙把”的抗變態(tài)反應(yīng)作用，為闡明傣醫(yī)的“雅解”理論的科學(xué)內(nèi)涵及“雅解沙把”的“解毒”本質(zhì)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，以期進(jìn)一步豐富、深化和完善傣醫(yī)“雅解”理論，指導(dǎo)傣醫(yī)解藥的臨床合理應(yīng)用。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 動(dòng)物

昆明種小白鼠，清潔級(jí)，雌雄各半，體重18-22g。購自四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所，許可證號(hào):SCXK(川)2008-24;合格證號(hào):0013106。Wistar大鼠，體重180～200g，雌雄各半，健康豚鼠，雌雄各半，由昆明醫(yī)學(xué)院動(dòng)物室提供，許可證號(hào):SCXK(滇)2005-0008;合格證號(hào):0021861。

1.2 藥品與試劑

“雅解沙把” (百解膠囊)，滇藥制字 (Z)20082252K，0.2g×60粒/瓶，5粒/次，每日3次;云南省西雙版納州傣醫(yī)院院內(nèi)制劑，由云南省西雙版納州傣醫(yī)院提供。將膠囊內(nèi)容物用水煎煮、濃縮成稠浸膏。置于-18℃冰箱冷藏備用，給藥前配制所需濃度;低劑量為臨床用量的等效量，即0.39g生藥/kg體重，高劑量為臨床等效量的9倍，即3.51g生藥/kg體重。氫化可的松注射液:規(guī)格:5mL∶25mg天津金耀氨基酸有限公司，批號(hào):H12020886。2，4-二硝基氟苯 (DNFB):瑞士(adamas-beta)，批號(hào):CAS號(hào):97-00-7。磷酸組胺:上海生物試劑廠生產(chǎn)，批號(hào):909035。馬來酸氯苯那敏片 (撲爾敏片):江蘇鵬鷂藥業(yè)有限公司，批號(hào):H32023645。卵白蛋白:Sigma，批號(hào):A-5378。百白破疫苗，成都生物制品研究所，批號(hào):S10970013。

1.3 儀器

XS125A電子分析天平:瑞士 Precisa公司;Infinite M200 PRO酶標(biāo)儀:瑞士Tecan公司。

2 方法與結(jié)果

2.1 “雅解沙把”對(duì)小鼠耳異種被動(dòng)皮膚過敏反應(yīng) (PCA)的影響

參照文獻(xiàn)［2-3］制備大鼠抗卵白蛋白血清:取大鼠6只，雌雄各半，肌肉注射卵白蛋白25mg∕kg，同時(shí)腹腔注射免疫佐劑百日咳疫苗2×1 010∕只，12d后處死動(dòng)物采血，血液低速離心，分離血清并混合置低溫冰箱備用，用時(shí)按1∶10(抗血清:生理鹽水)稀釋。

另取小鼠40只，雌雄各半，隨機(jī)分為4組，各組小鼠按表1劑量連續(xù)灌胃給藥或蒸餾水4d后，小鼠兩只耳廓各注射大鼠抗血清20μl，48h后抗原攻擊，尾靜脈注射0.5%伊文思藍(lán)溶液0.25mL內(nèi)含卵白蛋白0.25mg，30min后，將小鼠頸椎脫臼處死，剪下耳廓 (藍(lán)染部位均剪下)。兩只耳廓置于試管中，加入0.75mL、1mol/L的氫氧化鉀溶液浸泡，37℃恒溫過夜消化，次日加 3.5mL(0.6mol/L)的磷酸與丙酮混合液 (5∶13，v/v)，經(jīng)漩渦振蕩混勻，再以2 500r/min離心15min，取上清液在Infinite M200 PRO酶標(biāo)儀610nm處測(cè)定光密度 (OD)［4］。結(jié)果見表1。

表1 “雅解沙把”小鼠異種被動(dòng)皮膚過敏反應(yīng)的影響 (±s)

表1 “雅解沙把”小鼠異種被動(dòng)皮膚過敏反應(yīng)的影響 (±s)

注:與模型組對(duì)比＊＊P＜0.01.

組別 劑量(g/kg) 例數(shù) OD值 抑制率(%)模型組 —— 14 0.0998±0.0074——撲爾敏組 0.004 14 0.0244 ±0.0029＊＊ 75.60高劑量組 3.51 13 0.0313 ±0.0267＊＊ 68.60低劑量組 0.39 14 0.0537 ±0.0045＊＊46.20

從表1可看出:撲爾敏組、“雅解沙把”高、低劑量組對(duì)小鼠異種被動(dòng)皮膚過敏反應(yīng)均有顯著抑制作用。

2.2 “雅解沙把”對(duì)磷酸組織胺致癢作用的影響

參照文獻(xiàn)［5］，取豚鼠40只，雌雄各半，隨機(jī)分組同前。每天灌胃一次，連續(xù)5d;第4天，給各組豚鼠右后足背剃毛;第5天，末次給藥1h后，用砂紙擦傷右后足背剃毛處，面積約1cm2，并在創(chuàng)面處滴0.01%磷酸組織胺0.05mL/只，此后每隔3min依0.02%，0.03%，0.04%……，遞增濃度，每次均為0.05mL/只，直至出現(xiàn)豚鼠回頭舔右后足，以最后出現(xiàn)豚鼠回頭舔右后足時(shí)所給予的磷酸組織胺總量微克 (μg)為致癢閾，結(jié)果見表2。

表2 “雅解沙把”磷酸組織胺累計(jì)用量 (致癢閾)±s)

表2 “雅解沙把”磷酸組織胺累計(jì)用量 (致癢閾)±s)

注:與模型組對(duì)比，＊＊P＜0.01.

組別 劑量(g/kg)給藥途徑 例數(shù) 癢閾值(μg)模型組 ——Ig 10 6.15±2.53撲爾敏組 0.004 Ig 10 58.30±25.21＊＊高劑量組 2.097 Ig 10 54.00±34.28＊＊低劑量組 0.232 Ig 10 35.61±23.49＊＊

從表2可看出，撲爾敏組、“雅解沙把”高、低劑量組均能夠增加組織胺涂抹次數(shù)及組織胺累計(jì)用量。

2.3 “雅解沙把”對(duì)DNFB誘發(fā)小鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)的影響

參照文獻(xiàn)［6］方法，健康昆明種小鼠50只，雌雄各半，隨機(jī)分成5組，見表3。致敏期灌藥自第一次涂藥前2h開始，連續(xù)用藥5d(第0，1，2，3，4天)。誘發(fā)期灌藥時(shí)間為誘發(fā)前2h及誘發(fā)后6h。實(shí)驗(yàn)前一天在腹部固定部位3cm×3cm用剪刀及剃須刀去毛。實(shí)驗(yàn)第1、2天致敏期于去毛部位涂0.5%DNFB，每天1次，每次25μl，第3，4，5天不涂藥。第6天 (誘發(fā)期)在小鼠左耳背涂0.2%DNFB20μl，誘發(fā)皮炎，右耳背涂4:1丙酮橄欖油20μl作對(duì)照。于誘發(fā)后24h，用直徑0.9cm的金屬打孔器在耳中部打孔，取下相同大小的耳片，稱取其重量。用分析天平稱得每個(gè)耳片的重量。計(jì)算誘發(fā)后左右耳腫脹度。結(jié)果見表3。

表3 雅解沙把DNFB所致小鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)的影響 ?±s)

表3 雅解沙把DNFB所致小鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)的影響 ?±s)

注:與正常組比較，*P＜0.05，與模型組比較，△P＜0.05.

組別 劑量 (g/kg) 例數(shù) 耳片重量差值 (g)正常組 ——10 0.0013±0.0009模型組 —— 10 0.0050±0.0043*氫化可的松 0.024 10 0.0008±0.0005△高劑量組 3.51 10 0.0012±0.0014△低劑量組0.39 10 0.0025±0.0019

從表3可看出:模型組與正常組比較，兩組耳片重量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＜0.05);雅解沙把高劑量組、陽性藥組耳片重量與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＜0.05)。

2.4 統(tǒng)計(jì)方法

計(jì)量資料數(shù)據(jù)以均數(shù)x±標(biāo)準(zhǔn)差 (s)表示，數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布、方差齊的數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析;計(jì)量資料不符合正態(tài)分布，則用秩和檢驗(yàn)。

3 討論

傣醫(yī)學(xué)認(rèn)為，疾病的發(fā)生與體內(nèi)各種毒素有關(guān)。機(jī)體內(nèi)的臟腑功能代謝失調(diào)而內(nèi)生毒素，導(dǎo)致體內(nèi)“四塔五蘊(yùn)”功能失調(diào)，風(fēng)塔、火塔過剩，水塔不足，不能制火滋潤肌膚，風(fēng)熱濕邪藴積于肌膚、皮下而發(fā)?。?］。傣醫(yī)“解藥”產(chǎn)生的理論基礎(chǔ)是“毒”害人體論［8］。傣藥“雅解沙把”是以傣醫(yī)“雅解”理論為指導(dǎo)，以解藥為主配伍，方中百樣解，傣百解，定心藤，具有調(diào)平四塔，除風(fēng)止癢，消疔瘡之功，用于各種皮膚瘙癢、疔癤瘡癰。白花臭牡丹根，奶子藤，性涼具有清火解毒，補(bǔ)氣活血，養(yǎng)容顏之功，助主藥增強(qiáng)療效［9］。

小鼠異種被動(dòng)皮膚過敏 (PCA)是由IgE類抗體介導(dǎo)引起的I型變態(tài)反應(yīng)。IgE類抗體與肥大細(xì)胞表面特異受體結(jié)合形成IgE復(fù)合物，當(dāng)受同種或異種抗原攻擊時(shí)，引起肥大細(xì)胞脫顆粒，釋放過敏介質(zhì) (組胺、慢反應(yīng)物質(zhì)等)，使局部皮膚血管通透性增加［10］。表明“雅解沙把”對(duì)I型變態(tài)反應(yīng)有抑制作用，其作用主要與抗I型變態(tài)反應(yīng)介質(zhì)有關(guān)，其對(duì)IgE生成的影響值得進(jìn)一步探索。

組胺為一種重要的炎癥介質(zhì)，并參與I型變態(tài)反應(yīng)等引起皮膚瘙癢［11］?？赡芤种瓶乖cIgE結(jié)合，抑制肥大細(xì)胞釋放組胺等炎癥介質(zhì)，減少機(jī)體瘙癢，具有抗瘙癢、抗過敏的作用。遲發(fā)型超敏反應(yīng)為Ⅳ型變態(tài)反應(yīng)，由T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明“雅解沙把”對(duì)DNFB誘發(fā)的小鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)引起的耳腫脹具有抑制作用，提示“雅解沙把”能抑制細(xì)胞免疫功能，具有抗IV型變態(tài)反應(yīng)的作用。

綜上所述，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明“雅解沙把”具有抗I、Ⅳ型變態(tài)反應(yīng)及止癢的作用，為傣醫(yī)解藥治療過敏性疾病提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

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