亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        應(yīng)用固相支撐液液萃取-平行蒸發(fā)前處理技術(shù)檢測飼料中四種硝基呋喃類藥物

        2012-11-23 05:56:44王彩娟祝偉霞楊冀州孫轉(zhuǎn)蓮張巨洲張書勝
        中國獸藥雜志 2012年12期
        關(guān)鍵詞:液液呋喃原藥

        王彩娟,祝偉霞,楊冀州,孫轉(zhuǎn)蓮,張巨洲,張書勝

        (1.河南出入境檢驗檢疫局,鄭州 450003;2.鄭州大學化學與分子工程學院,鄭州 450042)

        硝基呋喃是人工合成的抗菌類藥物,主要用于預防和治療沙門氏菌和大腸桿菌引起的胃腸道疾病。經(jīng)毒理學評價證明硝基呋喃類藥物具有很強“三致”效應(yīng),長期使用易危害動物及人類的身體健康,目前國內(nèi)外已全面禁止硝基呋喃類原藥作為飼料添加劑使用[1-2]。為貫徹食品安全源頭控制的監(jiān)管要求,建立一種快速、靈敏的分析方法監(jiān)督飼料中硝基呋喃類原藥的含量已勢在必行。

        國內(nèi)外有關(guān)飼料中硝基呋喃原藥的檢測報道主要采用分光光度法[3]、酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)[4]、高效液相色譜法(HPLC)[5]、液相色譜質(zhì)譜法(LC-MS)[6-8]等。飼料中硝基呋喃原藥的前處理方法主要采用有機溶劑提取和固相萃取(SPE)凈化方法,文獻報道了混合陰離子交換SPE柱[5]、親水 - 親脂平衡填料[6]、石墨化碳黑/氨基混合柱[7]、反相C18填料[3]等 SPE 方法凈化飼料中四種硝基呋喃原藥,農(nóng)業(yè)部1486號公告采用乙腈提取,混合型陽離子交換柱凈化[9]的前處理方法。已報道的方法需要多步溶劑轉(zhuǎn)移步驟,閆曉東等[1]測定飼料時采用乙腈提取后直接測定,但提取液中干擾物質(zhì)較多。2011年,本實驗室采用固相支撐液液萃取-全自動平行蒸發(fā)前處理技術(shù)建立了動物源性食品中硝基呋喃代謝物的分析方法[10],凈化效果理想。在此研究基礎(chǔ)上,本文采用該前處理凈化技術(shù)建立了飼料中四種硝基呋喃原藥的快速分析方法。

        1 實驗部分

        1.1 儀器、藥品與試劑 Agilent 1200高效液相色譜儀(配二極管陣列檢測器,美國Agilent公司);8210超聲波提取儀(日本Yamato公司);IKA T18渦旋混勻器(德國IKA公司);CT6E離心機(日本Hitachi公司);Synore Q101平行蒸發(fā)-固相萃取儀(配真空泵、冷凝器,瑞士BüCHI公司);Chem Elut萃取柱(20 mL,美國Varian公司)。呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃西林和呋喃妥因標準物質(zhì)(純度≥97%,德國Dr.Ehrenstrofer公司)。乙酸乙酯、甲醇和乙腈(色譜純,美國Fisher公司);實驗用水均由Milli-Q超純水系統(tǒng)制備;其他試劑均為市售分析純。

        1.2 分析條件 色譜柱為ZORBAX SB C 18(4.6 mm×250 mm,5 μm);流動相:A相為乙腈,B相為10 mmol/L乙酸銨溶液(pH=4),梯度洗脫程序見表1;柱溫30℃;檢測波長365 nm;進樣量20 μL。

        表1 液相色譜梯度洗脫程序

        1.3 實驗步驟 稱取(2.00±0.02)g樣品,加入20 mL甲醇-1 mol/L(pH=7)磷酸鹽緩沖溶液(30 ∶70,V/V),渦旋混合 3 min,超聲提取 10 min,4000 r/min離心5 min,轉(zhuǎn)移上清液于固相萃取-平行蒸發(fā)儀的Chem Elut柱,待樣液全部通過柱體后,靜置等待反應(yīng)30 min,加入20 mL乙酸乙酯以1.0 mL/min流速洗脫待測物,流出液至平行蒸發(fā)試管中,再加入20 mL乙酸乙酯重復洗脫步驟,洗脫液全部收集于平行蒸發(fā)管,以振蕩速度185 r/min、冷卻溫度-4℃,加熱溫度60℃,真空下將洗脫液濃縮至干,2 mL乙腈-10 mmol/L乙酸銨(10 ∶90,V/V)溶解殘渣,過0.22 μm 濾膜,待測定。

        2 結(jié)果與討論

        2.1 提取條件的優(yōu)化 飼料中富含灰分、蛋白和碳水化合物等物質(zhì),文獻報道硝基呋喃類藥物的提取主要采用乙腈、甲醇、乙酸乙酯及其鹽溶液。本研究分別考察了乙腈、甲醇、乙酸乙酯、乙腈-磷酸鹽、甲醇-磷酸鹽作為提取劑時的提取效率,結(jié)果表明5種提取溶劑提取四種硝基呋喃原藥回收率均≥70%,甲醇-磷酸鹽混合液提取干擾物質(zhì)少,同時該提取液與凈化方法匹配,因此實驗選擇甲醇-磷酸鹽(30∶70,V/V)作為飼料提取溶劑。

        2.2 凈化方法的選擇 飼料樣品基質(zhì)復雜,提取液中存在的干擾物質(zhì)易影響色譜儀器分離。聚苯乙烯-二乙烯基苯柱、親水-親脂平衡填料SPE凈化方法用于硝基呋喃代謝物凈化時可獲得較高的回收率,但這些凈化方法包括多步溶劑轉(zhuǎn)移步驟,操作繁瑣耗時。本方法試驗了固相支撐液液萃取技術(shù)用于硝基呋喃原藥分析時的效果,該方法基于樣液與硅藻土填料柱作用形成特有的“支撐骨架”萃取模式,乙酸乙酯類有機溶劑通過該柱時,目標物被萃取至有機相,液液萃取步驟在固相萃取-平行蒸發(fā)系統(tǒng)完成,減少了有機溶劑消耗和溶劑轉(zhuǎn)移步驟,樣品的凈化和富集過程在全自動的條件下完成,四種硝基呋喃萃取回收率≥90%,因此本實驗選用固相支撐液液萃取作為凈化方法。

        2.3 固相支撐液液萃取條件的優(yōu)化 樣液在硅藻土柱中的平衡時間是影響固相支撐液液萃取回收率的重要參數(shù),本研究分別考察了 10、20、30、40、50、60 min平衡時間對萃取效率的影響。結(jié)果表明,溶液與硅藻土填料可在30 min時間內(nèi)形成牢固的支撐作用。同時試驗了不同體積乙酸乙酯(5、10、15、20和25 mL)的萃取效率,實驗結(jié)果表明5、10、15 mL的回收率約為45%,20和25 mL的回收率72%,四種硝基呋喃原藥回收率隨乙酸乙酯體積逐漸增加。試驗選用20 mL乙酸乙酯在重力作用下分兩次萃取,四種硝基呋喃萃取回收率≥98%。

        2.4 色譜條件的優(yōu)化 硝基呋喃類化合物結(jié)構(gòu)中含有多個雜環(huán)共軛結(jié)構(gòu),在紫外波長下具有特征吸收。實驗在200~800 nm波長范圍內(nèi)對待測物進行掃描,結(jié)果表明四種待測物在260、365 nm處均有較強特征吸收,其中365 nm處樣品干擾峰少,方法最終選用365 nm作為檢測波長。比較了多種商品化液相色譜柱CAPCELL PAK MGⅡC18、ZORBAX SB C18、ZORBAX Extend C18、Symmetry C18、Gemini-NX C18和YMC-ODS-AQ等的分離效果,發(fā)現(xiàn)未封端ZORBAX SB C18柱分離度好、靈敏度高。實驗選用ZORBAX SB C18柱作為分離柱,標準溶液的色譜圖如圖1所示。

        圖1 四種硝基呋喃原藥標準溶液的色譜圖(1 μg/mL)

        2.5 線性范圍和方法定量限 取一系列標準工作溶液進行測定,以峰面積(Y)對相應(yīng)的濃度(X,μg/mL)作標準曲線,在0.05~10 μg/mL的濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,線性方程分別為:呋喃它酮Y=109.47X-0.9327(r=0.9998),呋喃西林Y=101.32X+0.7439(r=0.9997), 呋 喃 妥 因Y=92.653X+0.0633(r=0.9999),呋 喃 唑 酮Y=76.347X-0.9633(r=0.9999)。 以 信 噪 比S/N≥10為依據(jù),四種硝基呋喃原藥的方法定量限(LOQ)為0.1 mg/kg。

        2.6 方法回收率與精密度 稱取空白飼料樣品,在0.1、0.2、1.0 mg/kg三個濃度水平作加標回收試驗,按照本方法所述步驟每個濃度重復測定10次,空白樣品的加標色譜圖如圖2所示,獲得方法回收率在78.4% ~105.3%,RSD為1.8% ~7.2%(表2)。

        表2 方法回收率和精密度

        圖2 空白飼料樣品中添加四種硝基呋喃原藥的回收色譜圖

        3 結(jié)論

        首次采用硅藻土固相支撐液液萃取-平行蒸發(fā)建立了濃縮飼料、預混合飼料和功能性飼料中四種硝基呋喃原藥的檢測方法,方法技術(shù)參數(shù)均滿足禁用藥物限量要求。樣品前處理集濃縮與凈化于一體,自動化程度高,操作簡單,通過分析送檢飼料樣品,并將本方法與農(nóng)業(yè)部1486號公告中的現(xiàn)行方法進行比較,樣品測定結(jié)果與標準方法的測定結(jié)果一致,相對偏差小于10%,可作為飼料中4種硝基呋喃原藥分析測定的高通量常規(guī)檢測方法。

        [1]閆曉東,王克寧,張會彩,等.檢測飼料中4種硝基呋喃類藥物的簡易高效液相色譜法[J].畜牧和獸醫(yī),2010,42(3):86-89.

        [2]魏晉梅.飼料中三種硝基呋喃類獸藥超高效液相色譜同步檢測方法[D].蘭州:甘肅農(nóng)業(yè)大學,2007.

        [3]Galeano Díaz T,Guiberteau Cabanillas A,Acedo Valenzuela M I,et al.Determination of nitrofurantoin,furazolidone and furaltadone in milk by high-performance liquid chromatography with electrochemical detection[J].Journal of Chromatography A,1997,764:243-248.

        [4]Diblikova I,Cooper K M,Kennedy D G,et al.Monoclonal antibody-based ELISA for the quantification of nitrofuran metabolite 3-amino-2-oxazolidinone in tissues using a simplified sample preparation[J].Analytica Chimica Acta,2005,540(1/2):285-292.

        [5]Conneely A,Nugent A,Keeffe M O,et al.Isolation of bound residues of nitrofuran drugs from tissue by solid-phase extraction with determination by liquid chromatography with UV and tandem mass spectrometric detection[J].Analytica Chimica Acta,2003,483:91-98.

        [6]Xia X,Li X W,Zhang S X,et al.Simultaneous determination of 5-nitroimidazoles and nitrofurans in pork by high-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry[J].Journal of Chromatography A,2008,1208(1/2):101-108.

        [7]Barbosa J,Moura S,Barbosa R,et al.Determination of nitrofurans in animal feeds by liquid chromatography-UV photodiode array detection and liquid chromatography-ionspray tandem mass spectrometry[J].Analytica Chimica Acta,2007,586:359-365.

        [8]Klein J,Alder L.Applicability of gradient liquid chromatography with tandem mass spectrometry the simultaneou screening for about 100 pesticides in crops[J].Journal of AOAC International,2003,86(5):1015-1037.

        [9]農(nóng)業(yè)部1486號公告-8-2010.飼料中硝基呋喃類藥物的測定,高效液相色譜法[S].

        [10]祝偉霞,袁 萍,楊冀州,等.固相支撐液液萃取-平行蒸發(fā)前處理技術(shù)測定動物源性食品中4種硝基呋喃類代謝物[J].食品科技,2011,36(2):300-303.

        猜你喜歡
        液液呋喃原藥
        農(nóng)藥原藥價格市場分析 整體呈現(xiàn)微小變化
        原藥全線止跌
        價格漲跌互現(xiàn)
        本周原藥基本維穩(wěn)
        超聲輔助分散液液微萃取與分光光度法聯(lián)用測定痕量銅的研究
        分散液液微萃取技術(shù)在食品分析中的應(yīng)用進展
        原位生成離子液體分散液液萃取-高效液相色譜法測定水樣中的莠去津
        巖礦測試(2015年3期)2015-12-21 03:57:04
        1-O-[3-(2-呋喃基)丙烯?;鵠-β-D-吡喃果糖的合成及應(yīng)用
        煙草科技(2015年8期)2015-12-20 08:27:14
        一個含呋喃環(huán)順磁性碳硼烷衍生物的合成及其生成機理
        分散液液微萃取-高效液相色譜法測定白酒中的酞酸酯
        食品科學(2013年24期)2013-03-11 18:30:46
        日韩女同一区二区三区久久| 最近中文字幕mv在线资源| 精品国产一区二区三区19| 无码一区二区三区久久精品| 草青青在线视频免费观看| 无码喷潮a片无码高潮| 国产白浆一区二区在线| 国内精品久久久久影院薰衣草| 亚洲 自拍 另类 欧美 综合| 美女爽好多水快进来视频| 久久精品伊人久久精品伊人| 最新欧美精品一区二区三区| 国产福利一区二区三区在线观看| аⅴ天堂国产最新版在线中文 | 亚洲不卡中文字幕无码| 亚洲人成电影在线无码| 日韩女优中文字幕在线| 精品国产自在现线看久久| 四虎国产精品永久在线国在线| 国产另类综合区| 久久夜色精品国产九色| 国产偷国产偷亚洲高清视频| 国产精品无码午夜福利| 精品亚洲午夜久久久久| 久久99国产精品久久99密桃| 国产av一区二区亚洲精品| 国产日产综合| 日韩免费小视频| 久久青青草原亚洲av| 免费a级毛片无码免费视频首页| 国产在线精品欧美日韩电影| 午夜亚洲国产精品福利| 少妇又紧又爽丰满在线视频| 色www永久免费视频| 99国产超薄丝袜足j在线观看| 色视频日本一区二区三区| 十八禁视频在线观看免费无码无遮挡骂过 | 成人免费一区二区三区| 亚洲黄色性生活一级片| 亚洲无毛成人在线视频| 亚洲综合欧美色五月俺也去|