石軍飛 閆超

五味子為木蘭科植物五味子(Schisandra)的干燥成熟果實。五味子具有消炎、保護及增強心臟機能、延緩衰老以及抗腫瘤作用。五味子含有揮發(fā)油、苯丙素、木質(zhì)素等成分，目前對其成分研究較多的是五味子多糖、五味子甲素、五味子乙素［1、2］。其中五味子乙素的抗腫瘤作用日益受到學(xué)者的重視［3］，但對其作用機制的研究卻甚少。

1 材料與方法

1.1 材料 Wistar大鼠，雌雄各半，體重200～210 g，購于北京大學(xué)實驗動物科學(xué)部。五味子乙素購于中國藥品生物制品檢定所。環(huán)磷酰胺(CTX)來源于江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司，批號20120320。大鼠肝癌細胞購于上海拜力生物科技有限公司。

1.2 方法 50只大鼠隨機分為五組，即空白對照組(A)、模型組(B)、環(huán)磷酰胺組(C)、五味子乙素組(D)、五味子乙素-環(huán)磷酰胺組(E)。將大鼠肝癌細胞復(fù)蘇并培養(yǎng)3 d，注入傳代大鼠右前肢皮下，7 d后取出實體瘤，選擇生長旺盛的組織，切成1 mm×1 mm×1 mm的小塊備用。將B、C、D、E四組大鼠用2%戊巴比妥麻醉并消毒，于腹正中切口，使肝臟暴露，在其臟面刺一深約5 mm的斜洞，置入切碎的腫瘤塊，止血后關(guān)腹［4］。

在造模成功14 d后，A組和B組給予生理鹽水10 ml，C組給予環(huán)磷酰胺20 mg/kg，D組給予五味子乙素20 mg/kg，E組給予環(huán)磷酰胺和五味子乙素(1∶1)混合液20 mg/kg。所有實驗大鼠連續(xù)給藥14 d，稱量各鼠體重后將其處死，開腹取瘤并稱瘤重，計算腫瘤生長抑制率(TIR)，TIR=(對照組平均瘤重-實驗組平均瘤重)/對照組平均瘤重。

吸取大鼠心肌血3 ml，置入EP管中，3000r/min離心15 min，采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定大鼠血清中腫瘤壞死因子(TNF-α)的濃度［5］。

2 結(jié)果

2.1 大鼠活動表現(xiàn)及體重、瘤重變化 所有大鼠在實驗前均活潑好動，飲食正常，B、C、D、E四組在接種瘤塊3 d后，飲食量開始下降，少動，反應(yīng)遲緩。給藥后，大鼠開始騷動不安，皮毛失去光澤，并有脫毛現(xiàn)象，飲食未有明顯增加，多擁擠生活，個別大鼠有嘔吐現(xiàn)象。模型組大鼠在21 d后很少進食，觸之不動。

表1 各組大鼠體重、瘤重變化情況

由于外界對空白對照組大鼠干擾因素較少，且沒有病痛折磨，所以空白對照組體重明顯高于其他四組，C、D、E組給予抗癌藥后，腫瘤生長受到抑制，瘤重小于模型組，但從藥物療效看，環(huán)磷酰胺和五味子乙素無顯著性差別，也有可能是收樣本量少的影響。

2.2 TNF-α水平比較 對五組實驗大鼠血清TNF-α水平進行測定，測定結(jié)果如下表2。

表2 各組大鼠TNF-α水平比較

B、C、D、E組 TNF-α 水平與 A 組比較 P ＜0.05，具有統(tǒng)計學(xué)意義。通過表2可以看出，大鼠在接種腫瘤后，TNF-α水平明顯升高，而藥物組TNF-α水平也高于空白對照組，但與模型組相比，TNF-α水平有所下降，可能與藥物抑制腫瘤細胞生長有關(guān)，但環(huán)磷酰胺組與五味子乙素組顯著性無差別。

3 討論

五味子乙素(Schisandrin B)屬木脂素類，是五味子中抗腫瘤的主要有效成分，由于受實驗條件所限，樣本量較少，主要采用療效對比的方法對其抗腫瘤作用進行研究，發(fā)現(xiàn)其與抗癌藥環(huán)磷酰胺無顯著性差異，進一步驗證了五味子乙素具有較好的抗腫瘤作用。有研究表明，在腫瘤組織中，氧自由基發(fā)生脂質(zhì)過氧化反應(yīng)增強，自由基產(chǎn)生增多，而自由基又可與蛋白質(zhì)交聯(lián)，影響腫瘤細胞的增殖和分裂，而五味子乙素具很強的抗氧化和清除自由基作用［6、7］。另據(jù)報道，其抗腫瘤可通過免疫增強作用，抑制腫瘤細胞增殖、誘導(dǎo)分化，誘導(dǎo)細胞凋亡，直接殺傷癌細胞等多途徑、多環(huán)節(jié)的產(chǎn)生作用［8］。在本研究中，其對腫瘤細胞壞死因子(TNF-α)水平的影響，也間接地抑制了腫瘤細胞的增殖。對E組大鼠而言，同時給予環(huán)磷酰胺和五味子乙素后，瘤重要比單獨給予其中一種藥物略輕，抑瘤率比其他兩組稍高，可能是五味子乙素抑制了腫瘤化療藥物耐藥性的產(chǎn)生［9］。所以，當五味子乙素與其他抗癌藥合用時抗癌效果更佳。

五味子乙素目前對其研究報道較少，為了開發(fā)和尋找療效好、毒副作用小的抗腫瘤藥物，相信學(xué)者們會對其越來越重視，對其作用機制、合理劑量以及毒副作用等的研究也會更加完善，為其單方制劑的開發(fā)奠定良好基礎(chǔ)。

［1］任佳麗，李林.五味子抗腫瘤活性成分及作用機制研究進展.中國藥理學(xué)通報，2012，28(1):140-142.

［2］Yu J，Liu PX，Long W，et al.Experimental study on isolation and purification of total lignans from Schisandra Chinensis and theantitumor activity in vitro .China Pharmacist，2009，12(12):1718-1719.

［3］吳海星，侯曉節(jié).五味子乙素抗腫瘤的多種作用機制.吉林醫(yī)藥學(xué)院學(xué)報，2012，4(33):107-110.

［4］曾承，王珊.對活體狀態(tài)下大鼠肝癌模型早期診斷的研究.重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2010，04:18-20.

［5］Kondo W，Lago EA，et al.Effect of anti-TNF-α on peritoneal endometrial implants of rats.Rev Col Bras Cir，2011，38(4):266-73.

［6］Zhu S，Wang Yl.Protective effect of schisandrin B against cyclosporine A-induced nephrotoxicity in vitro and in vivo.Am J Chin Med，2012，40(3):551-566.

［7］Luo X，Shi YM.Schilancitrilactones A-C:three unique nortriterpenoids from Schisandralancifolia.OrgLett，2012，14(5):1286-1289.

［8］Bartoli A，Chouraqui G.Collective domino approach toward the core of molecules isolated from the genus Schisandra.Org Lett，2012，14(1):122-125.

［9］Hwang D，Shin SY.A compound isolated from Schisandra chinensis induces apoptosis.Bioorg Med Chem Lett，2011，21(20):6054-6057.