焦華琛，張?zhí)N慧，李運倫，郭 麗，姜月華，孟凡波，楊金果，杜雪翠

房顫的發(fā)生與炎癥關(guān)系密切。青蒿是傳統(tǒng)抗瘧疾中藥，現(xiàn)代藥理研究證實，青蒿提取物具有明確的抗心律失常作用。為探討青蒿抗心律失常的作用機制，本實驗觀察了青蒿提取物青蒿總酯對房顫大鼠心肌炎癥相關(guān)因子腫瘤壞死因子-α（TNF-α）及細(xì)胞間黏附分子-1（ICAM-1）的影響。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器 清潔級SD雄性大鼠購自山東中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心，體重250g±20g，遵循國家實驗動物管理條例及國家實驗動物管理實施細(xì)則，合格證號3CX1＜魯＞2009001；青蒿總酯由西安小草植物科技有限責(zé)任公司生產(chǎn)，批號SC101213；卡托普利由廣州白云山制藥廠生產(chǎn)，批號110754。戊巴比妥鈉由上海華藍(lán)化學(xué)科技有限公司進(jìn)口分裝，批號57330。

1.2 方法

1.2.1 房顫模型建立及分組 SD大鼠60只，分為對照組（15只）、模型組（15只）、青蒿組（15只）、卡托普利組（15只）。模型組、青蒿組、卡托普利組大鼠采用氯化鈣、乙酰膽堿混合液以舌下靜脈給藥的方式建立房顫動物模型。用1%的戊巴比妥鈉進(jìn)行腹腔注射麻醉，先描記大鼠正常心電圖。舌下靜脈注射氯化鈣、乙酰膽堿混合液1mL／kg，描記心電圖，待出現(xiàn)典型房顫f波。以上程序隔日重復(fù)1次，連續(xù)4周，停藥后心電圖仍有典型房顫改變?yōu)樵炷３晒Α?/p>

模型組、青蒿組、卡托普利組大鼠均按此方法每日給藥，常規(guī)喂養(yǎng)。實驗前2周青蒿組以1.25g／kg灌胃?？ㄍ衅绽M以3.25mg／kg灌胃。

1.2.2 TNF-α與ICAM-1測定 實驗當(dāng)日，取動物靜脈血，盡快注入硅化玻璃試管內(nèi)，4℃、3 000r／min離心10min，吸取上清液，保存待測。采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測定，TNF-α及ICAM-1試劑盒由上海寶特生命科學(xué)發(fā)展有限公司進(jìn)口分裝。酶標(biāo)儀測OD值，計算樣品中TNF-α、ICAM-1濃度。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件分析，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示。多組間均數(shù)比較采用方差分析（比較采用t檢驗）。

2 結(jié) 果

模型組血清TNF-α、ICAM-1水平較對照組有顯著提高（P＜0.05）。在降低TNF-α、ICAM-1表達(dá)方面，卡托普利組的作用最為顯著，青蒿組的作用略差于卡托普利組（P＞0.05）。詳見表1。

表1 各組血清TNF-α及ICAM-1水平比較（x±s） μg／L

3 討 論

TNF-α主要由單核巨噬細(xì)胞產(chǎn)生，中性粒細(xì)胞、星狀細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞亦可產(chǎn)生TNF-α。它能夠損傷內(nèi)皮細(xì)胞，促進(jìn)凝血，抑制纖溶，促進(jìn)單核細(xì)胞對內(nèi)皮細(xì)胞黏附以及促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞遷移、增殖。TNF-α不僅可以作為宿主的防御、免疫以及內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定等生理過程的介質(zhì)，還是感染、炎癥及損傷的病理因子，因此除腫瘤疾病之外的許多損傷性疾病中，血漿中TNF-α的升高也有意義。TNF-α持續(xù)灌注大鼠心臟可致大鼠心腔擴大［1］，TNF-α過度表達(dá)的轉(zhuǎn)基因小鼠存在顯著的心房纖維化及較高的房性心律失常發(fā)生率［2］，而抗TNF-α治療可阻止心腔擴大改善間質(zhì)膠原重構(gòu)，減輕心肌纖維化［3］。研究顯示TNF-α與心肌重構(gòu)密切相關(guān)。風(fēng)濕性心臟病持續(xù)性房顫組心房組織中TNF-α基因轉(zhuǎn)錄水平和蛋白表達(dá)水平較竇性心律組、陣發(fā)性房顫組均顯著增加［4］，TNF-α的蛋白水平與左房內(nèi)徑、房顫持續(xù)時間呈明顯正相關(guān)。持續(xù)性房顫患者TNF-α的高表達(dá)可能是影響膠原代謝，參與心房間質(zhì)纖維化的重要因素之一，與房顫的發(fā)生和維持有關(guān)。

細(xì)胞黏附分子（cell adhesion molecule，CAM）是存在于細(xì)胞表面的一類糖蛋白受體，主要功能為促進(jìn)細(xì)胞與細(xì)胞及組織基質(zhì)間的黏附，對循環(huán)血液中的白細(xì)胞黏附、游出及浸潤起主要作用。它在維護正常組織的穩(wěn)定，介導(dǎo)炎癥反應(yīng)，血栓形成，損傷修復(fù)及免疫調(diào)節(jié)中起重要作用。CAM的種類繁多，作用非常廣泛，可以分為以下4類：免疫球蛋白超家族（Immunoglobulin super family）、整聯(lián)蛋白（Intergrin）、選擇素 （Selectin）及其他。血管細(xì)胞黏附分子-1（VCAM-1）屬于免疫球蛋白超家族。當(dāng)內(nèi)皮功能不全時，VCAM-1等黏附分子使單核細(xì)胞和中性粒細(xì)胞活化并黏附到內(nèi)皮細(xì)胞表面?；罨膯魏思?xì)胞和中性粒細(xì)胞通過釋放某些毒性產(chǎn)物，可導(dǎo)致局部炎癥反應(yīng)。這些黏附分子通過促進(jìn)炎癥細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞相互作用而介導(dǎo)組織損傷，因此對房顫的發(fā)生發(fā)展可能起到一定作用。

TNF-α與ICAM-1都屬于炎癥相關(guān)因子。在本實驗中，模型組TNF-α、ICAM-1的表達(dá)均較對照組高，證明在房顫過程中，這兩項指標(biāo)是升高的。青蒿提取物與卡托普利一樣，能明確降低模型大鼠的TNF-α與ICAM-1水平，通過這一途徑改善心律失常。由此推測中藥青蒿抗心律失常的機制可能有以下幾方面：心肌細(xì)胞和間質(zhì)的炎癥反應(yīng)可直接導(dǎo)致膜電位變化；TNF-α、ICAM-1可導(dǎo)致心肌結(jié)構(gòu)重構(gòu)和電重構(gòu)，導(dǎo)致交感神經(jīng)密度增高，損傷細(xì)胞膜，誘發(fā)心律失常；通過抑制炎癥因子TNF-α抑制心臟結(jié)構(gòu)重構(gòu)和電重構(gòu)，減少心律失常的發(fā)生；通過抑制ICAM-1表達(dá)，減少動脈粥樣斑塊形成，穩(wěn)定斑塊，減少心律失常的發(fā)生。

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［2］ Saba S，Janczewski AM，Baker LC，et al.Atrial contractile dysfunction，fibrosis and arrhythmias in a mouse model of cardiomyopathy secondary to cardiac-specific overexpression of tumor necrosis factor-α［J］.Am J Physiol Heart Circ Physiol，2005，289：H1456-H1457.

［3］ Gurantz D，Yndestad A，Halvorsen B，et al.Etanercept or intravenous immunoglobulin attenuates expression of genes involved in postmyocardial infarction remodeling［J］.Cardiovasc Res，2005，67：106-108.

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