馬金霞，魏旭明，任明芬

隨著社會的老齡化，老年冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病的發(fā)病率逐漸升高。血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）是一種強(qiáng)烈的特異血管內(nèi)皮細(xì)胞促有絲分裂劑和促血管生成因子，有刺激血管形成、內(nèi)皮再生和調(diào)節(jié)血管通透性的作用。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)VEGF在治療缺血性心臟病方面有廣闊前景［1］。丹紅注射液可明顯減少患者心絞痛發(fā)作次數(shù)和硝酸甘油用量，顯著增加患者的運(yùn)動(dòng)耐量和生活質(zhì)量，其遠(yuǎn)期療效優(yōu)于硝酸異山梨酯，且不良反應(yīng)較少。本研究采用雙抗夾心法檢測老年冠心病患者用丹紅注射液治療前后外周血中VEGF含量，并探討其對心絞痛癥狀的緩解程度。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 2006年7月—2009年12月南陽市第一人民醫(yī)院及新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院心內(nèi)科住院的老年冠心病患者102例，均有心絞痛發(fā)作。隨機(jī)分為兩組，試驗(yàn)組51例，男34例，女17例，年齡63歲～82歲（66.3歲±7.8歲）。對照組51例，男36例，女15例，年齡62歲～81歲（67.3歲±6.9歲）。兩組患者均行冠狀動(dòng)脈造影檢查示至少1支血管狹窄程度＞50%。所有病例均排除腫瘤、感染等。兩組患者性別、年齡等差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.2 方法

1.2.1 VEGF檢測方法 兩組患者均采靜脈血5mL，乙二胺四乙酸抗凝，5min內(nèi)分離血漿，置-80℃冰箱保存。VEGF試劑盒購于晶美生物工程有限公司，采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附測定法。主要步驟：鼠抗人VEGF單克隆抗體包被96孔聚乙烯酶標(biāo)板后，每孔加入100μL樣本稀釋液，再分別加入標(biāo)準(zhǔn)品和待測血清100μL，標(biāo)準(zhǔn)品VEGF 1 6 5濃度分別為2 0 0 0 ng／L、1 000ng／L、500ng／L、250ng／L、125ng／L、62.5ng／L、31.25ng／L，以稀釋液作空白對照，所有標(biāo)本均設(shè)雙孔檢驗(yàn)。余具體操作步驟按說明書進(jìn)行。然后用酶標(biāo)儀450nm波長測定各孔光密度值，以VEGF標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，相應(yīng)的光密度值為縱坐標(biāo)作圖，根據(jù)待測標(biāo)本的光密度值在直線上查出相應(yīng)的VEGF含量。

1.2.2 治療方法 兩組患者均給予阿司匹林、硝酸異山梨酯、血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑等常規(guī)治療。試驗(yàn)組給予丹紅注射液20mL加入5%葡萄糖注射液或生理鹽水250mL靜脈注射，每天1次，療程14d。

1.3 臨床療效標(biāo)準(zhǔn) 顯效：心絞痛癥狀完全或基本消失；有效：心絞痛發(fā)作明顯減少（每周發(fā)作次數(shù)減少50%）；無效：心絞痛發(fā)作無改善或加重。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1 兩組患者血漿VEGF含量比較 治療前兩組患者血清VEGF含量比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），治療后試驗(yàn)組VEGF含量較治療前顯著升高，與治療前比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．01），且兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。詳見表1。

表1 兩組患者血漿VEGF含量比較（x±s） ng／L

2.2 臨床療效 試驗(yàn)組顯效31例，有效19例，無效1例；總有效率98.0%。對照組顯效18例，有效22例，無效11例，總有效率78.4%，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=9．44，P＜0.01）。

3 討 論

VEGF是一個(gè)富含半胱氨酸的糖蛋白家族，以二聚體作為活性形式存在，是一類特異性促內(nèi)皮細(xì)胞增殖并增加血管通透性的細(xì)胞因子。VEGF是反映冠狀動(dòng)脈病變程度的敏感指標(biāo)，在正常心肌含量極低，心肌缺血、缺氧可刺激其表達(dá)。急性心肌梗死患者由于冠狀動(dòng)脈堵塞，導(dǎo)致心肌缺血缺氧，隨著缺氧時(shí)間的延長，心肌產(chǎn)生VEGF增加，缺血時(shí)間與VEGF產(chǎn)生量成正比［2］。本研究結(jié)果顯示，狹窄血管的支數(shù)愈多，血漿VEGF含量愈高。Ray等［3］試驗(yàn)證實(shí)，當(dāng)冠狀動(dòng)脈明顯狹窄時(shí)，VEGF的生物反應(yīng)會加速產(chǎn)生，經(jīng)過一段時(shí)間逐漸減弱，這說明可能存在一種天然反饋機(jī)制，保持著血管生成和抗血管生成的微妙平衡，以防止不當(dāng)?shù)倪^度血管生成。本研究結(jié)果顯示，試驗(yàn)組患者給予丹紅注射液治療后血清VEGF含量明顯升高，與治療前比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），且兩組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。提示丹紅注射液可提高患者血清VEGF含量，促進(jìn)新生血管的形成。丹紅注射液中丹參改善缺血區(qū)心肌的側(cè)支循環(huán)及局部供血，改善缺氧心肌的代謝紊亂，增加心肌耐缺氧的能力，抑制血小板聚集和抗血栓形成；紅花具有擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈，增加冠脈脈血流量，能降低血液黏度，改善血液循環(huán)，能清除自由基，抑制細(xì)胞膜脂質(zhì)過氧化作用。實(shí)驗(yàn)顯示［4］，用VEGF轉(zhuǎn)染到慢性缺血的小型豬的心肌內(nèi)，可在缺血局部顯著促進(jìn)側(cè)支循環(huán)形成，將VEGF轉(zhuǎn)染到培養(yǎng)鼠心肌細(xì)胞中，結(jié)果測定被轉(zhuǎn)染的心肌細(xì)胞中VEGF蛋白水平較高［5］。而人類心肌生成新生血管的能力與心肌缺氧狀態(tài)下生成VEGF的量明顯相關(guān)。故丹紅注射液可能促進(jìn)有冠狀動(dòng)脈狹窄的老年冠心病患者側(cè)支循環(huán)的形成，從而很好地緩解了臨床癥狀。

［1］ Sato K，Wu T，Laham RJ，et al.Efficacy of intracoronary or intravenous VEGF 165in a pig model of chronic myocardial ischemia［J］.J Am Coll Cardiol，2001，37（2）：616-623.

［2］ 晉軍，黃嵐，祝善俊，等.VEGF在大鼠心肌梗死急性期表達(dá)的意義及蛻皮甾酮的促側(cè)枝循環(huán)作用［J］.中國介入心臟病學(xué)雜志，2002，10（3）：158-161.

［3］ Ray PS，Estrada HT，Sasaki H，et al.Early effect of hypoxia／reoxygenation on VEGF，Ang-1，Ang-2and their receptor in the rat myocardium：Implications for myocardial angiogenesis［J］.Mol Cell Biochem，2000，213（1-2）：145-153.

［4］ 施冰，鄧曉麗，吳曉兵，等.直接心肌注射血管內(nèi)皮生長因子對慢性缺血心肌側(cè)枝循環(huán)生成的影響［J］.中國臨床保健雜志，2006，9（1）：56-60.

［5］ 郝亞榮，李建軍，李庚山.血管內(nèi)皮生長因子真核表達(dá)載體的構(gòu)建及其在培養(yǎng)鼠心肌細(xì)胞中的表達(dá)［J］.中華老年心血管病雜志，2005，7（1）：46-49.