支 爽, 鄭 幗, 劉冰妮, 王景陽, 劉登科

(1. 天津工業(yè)大學(xué) a. 環(huán)境與化學(xué)工程學(xué)院; b. 天津市紡織纖維界面處理技術(shù)工程中心,天津 300160; 2. 天津藥物研究院 天津市新藥設(shè)計與發(fā)現(xiàn)重點實驗室,天津 300193)

血栓形成或栓塞是導(dǎo)致心、腦和外周血管疾病的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，是心、腦血管疾病的病理基礎(chǔ)，而血小板激活和聚集在血栓形成過程中起核心作用[1]。針對血栓形成及栓塞,目前開發(fā)成功的一類藥物是噻吩并吡啶類ADP受體拮抗劑,主要包括法國賽諾菲公司開發(fā)的氯吡格雷和第一三共和Eli-Lilly共同開發(fā)的普拉格雷。兩者都是前藥,需要經(jīng)過細(xì)胞色素P450酶代謝轉(zhuǎn)化成活性代謝物,才能與P2Y12受體不可逆結(jié)合,從而阻止血小板活化[2]。氯吡格雷具有療效強(qiáng)、費用低、副作用小等優(yōu)點;但個體差異大,對血小板抑制延遲,且易產(chǎn)生氯吡格雷抵抗[3]。普拉格雷比氯吡格雷的體內(nèi)抗血小板作用強(qiáng)約10倍[4],起效時間更快、個體差異更小,但出血危險性增加[5，6]。

為了找到優(yōu)良的候選藥物,本文通過對已上市的ADP受體拮抗劑和文獻(xiàn)報道2-(2-取代-4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶-5-基)乙酰胺類化合物結(jié)構(gòu)的分析研究[7]，以4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-c]吡啶鹽酸鹽(5·HCl)和2-氧代-2,4,5,6,7,7a-六氫噻吩并[3,2-c]吡啶鹽酸鹽(6·HCl)為原料,設(shè)計并合成了9個未見文獻(xiàn)報道的ADP受體拮抗劑——N-取代-2-{6,7-二氫噻吩并[3,2-c]吡啶-5(4H)-基}乙酰胺(1a～1e)和N-取代-2-{6,7-二氫(2-乙酰氧基)噻吩并[3,2-c]吡啶-5(4H)-基}乙酰胺(2a～2d, Scheme 1),其結(jié)構(gòu)經(jīng)1H NMR和HR-MS表征。并對其抗血小板聚集活性進(jìn)行了研究。

1 實驗部分

1．1 儀器與試劑

YRT-3型熔點儀(溫度計未校正);Bruker AV400型核磁共振儀(TMS為內(nèi)標(biāo));VG ZAB-HS型質(zhì)譜儀；COMBI FLASH Rf200型分離純化制備色譜；PAM-3型雙通道血小板聚集儀。

所用試劑均為分析純。

1.2 1和2的合成

(1)4的合成(以4a為例)

在反應(yīng)瓶中加入3-氨基-5-甲基異噁唑(3a) 9.8 g(100 mmol)的DMF(100 mL)溶液和Et3N 15.17 g,攪拌下于-5 ℃～-10 ℃滴加氯乙酰氯(1 h),反應(yīng)3 h。于室溫攪拌30 min,加冷水200 mL(析出固體),過濾,濾餅真空干燥得褐色固體3-(N-氯乙?；被?-5-甲基異噁唑(4a) 15.03 g,收率86%,Rf=0.71[展開劑：A=V(石油醚) ∶V(乙酸乙酯)=2 ∶1](無需純化，直接用于下一步反應(yīng))。

用類似方法合成4b～4e。

(2)1的合成(以1a為例)

在反應(yīng)瓶中加入5·HCl 17.57 g(100 mmol)的水(100 mL)溶液,冰水浴冷卻,攪拌下用NaOH水溶液調(diào)至pH 9,反應(yīng)1 h。用乙酸乙酯(3×100 mL)萃取,合并有機(jī)相,用無水硫酸鈉干燥,減壓蒸除溶劑，得黃色油狀液體5 13.2 g(96 mmol)(無需純化，直接用于下一步反應(yīng))。

在反應(yīng)瓶中加入4a17.4 g(100 mmol)的乙腈(100 mL)溶液，Et3N 15.17 g和515.31 g(110 mmol),攪拌下回流反應(yīng)5 h。加冷水100 mL，用乙酸乙酯(3×50 mL)萃取，合并有機(jī)相，用無水硫酸鈉干燥，減壓蒸除溶劑,殘余物經(jīng)硅膠柱層析(洗脫劑：A=2 ∶1)分離得N-(5-甲基異噁唑-3-基)-2-{6,7-二氫噻吩并[3,2-c]吡啶-5(4H)-基}-乙酰胺(1a) 19.68 g。

用類似方法合成1b～1e。

(3)2的合成(以2a為例)

在反應(yīng)瓶中加入6·HCl 19.17 g(100 mmol),乙腈100 mL和Et3N 15.17 g，氮氣保護(hù),攪拌下加入4a17.4 g(100 mmol),回流反應(yīng)3 h。冷卻至室溫，加水100 mL,用乙酸乙酯(3×50 mL)萃取,合并有機(jī)相，用無水硫酸鈉干燥，減壓蒸除溶劑,殘余物經(jīng)硅膠柱層析(洗脫劑：A=1 ∶1)分離得黃色液體N-(5-甲基異惡唑-3-基)-2-{6,7-二氫噻吩并[3,2-c]吡啶-5(4H)-基}乙酰胺(7a) 25.4 g, 86.9%,Rf=0.43(展開劑:A=1 ∶1)。

用類似方法制備7b～7d。

表 1 1和2的1H NMR數(shù)據(jù)*Table 1 1H NMR data of 1 and 2

*1b～1e以DMSO-d6為溶劑,其余以CDCl3為溶劑

在反應(yīng)瓶中加入7a29.3 g(100 mmol)的乙腈(150 mL)溶液,乙酸酐13 g及少量Et3N,攪拌下于30 ℃反應(yīng)2 h。冷卻至室溫,加蒸餾水100 mL，用乙酸乙酯(3×50 mL)萃取，合并有機(jī)相，用無水硫酸鈉干燥，蒸干溶劑，殘余物用無水甲醇重結(jié)晶得N-(5-甲基異噁唑-3-基)-2-{6,7-二氫(2-乙酰氧基)噻吩并[3,2-c]吡啶-5(4H)-基}乙酰胺(2a)。

用類似方法合成2b～2d。1與2的1H NMR數(shù)據(jù)見表1,實驗結(jié)果見表2。

表 2 合成1和2的實驗結(jié)果Table 2 Experimental results of synthesizing 1 and 2

表 3 1和2的抗血小板聚集活性Table 3 Anti-platelet aggregation activities of 1 and 2

*與正常對照組比較，P<0.01

1.3 1和2的抗血小板聚集活性測試

選用健康雄性Wistar大鼠，體重200 g～250 g，隨機(jī)分組。設(shè)正常及噻氯匹定對照組，灌胃給藥，劑量30 mg·kg-1。正常對照組給予等量0.5% CMC-Na。給藥后2 h，腹腔注射40 mg·kg-1戊巴比妥鈉(1 mL·kg-1)麻醉，腹主動脈采血，用3.8%枸櫞酸鈉抗凝，分別制備富血小板血漿(PRP)和貧血小板血漿(PPP)，測定ADP(終濃度：1.08 μmol·L-1)誘導(dǎo)的血小板最大聚集率及抑制率。

2 結(jié)果與討論

1和2的抗血小板聚集活性測試結(jié)果見表3。由表3可見，1和2在大鼠體內(nèi)均有一定的抗血小板聚集作用,其中1d和2d的作用較強(qiáng),抑制率分別為50.0%和58.9%,尤其是2d的抑制作用優(yōu)于陽性對照藥噻氯匹定，值得深入探究。

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