譚文波 盧義紅 譚 剛 (湖北民族學院醫(yī)學院，湖北 恩施 445000)

木瓜黃酮的抗皮膚衰老作用

譚文波 盧義紅1譚 剛 (湖北民族學院醫(yī)學院，湖北 恩施 445000)

目的 研究木瓜黃酮的抗皮膚衰老作用。方法 將12月齡雌性KM小鼠40只隨機分成對照組和實驗組，另將20只3月齡雌性KM小鼠作為青年組。實驗組用木瓜提取液外涂，對照組和青年組用等量生理鹽水外涂。6 w后，測定皮膚指數(shù)及皮膚組織中的羥脯氨酸(HYP)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)及脂褐質(zhì)(LF)的含量。結(jié)果 與對照組比較，木瓜提取液增加了老年小鼠的皮膚指數(shù)及皮膚組織中HYP和SOD的含量，使老年小鼠皮膚組織中MDA和LF含量下降。結(jié)論 木瓜提取液具有較明顯的抗皮膚衰老作用。

木瓜黃酮;皮膚;抗衰老

木瓜為薔薇科植物貼梗海棠干燥近成熟果實，主產(chǎn)于我國安徽、浙江、河南、湖北和四川等地〔1〕，其性溫、味酸，具有平肝和胃，舒經(jīng)絡(luò)，降血壓等功效。臨床上用于預(yù)防和治療風濕病、霍亂、痢疾、腸炎、腳氣病及維生素C缺乏癥等〔2〕。研究證明其果實富含皂甙、黃酮類、木瓜酚、還原糖、蔗糖、多種氨基酸、維生素C、過氧化酶、過氧化物酶以及多酚氧化酶等多種成分。近年來已利用木瓜果實開發(fā)出多種保健食品和美容護膚化妝品〔3〕。目前有關(guān)木瓜養(yǎng)顏護膚作用的研究很少。為此，我們以本地區(qū)木瓜提取液涂抹小鼠皮膚，來探討其抗皮膚衰老的作用，旨在為木瓜的深度開發(fā)利用提供實驗數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

3月齡雌性KM種小鼠20只，12月齡雌性KM小鼠40只，體重(22.5±2.1)g，由華中科技大學同濟醫(yī)學院提供。木瓜黃酮提取液的制備，選取新鮮木瓜切片后曬干，用粉碎機將木瓜片粉碎，過篩，70%乙醇浸提，過濾，乙醚脫脂，經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮即得木瓜黃酮提取液，羥脯氨酸(HYP)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和脂褐質(zhì)(LF)測定試劑盒為南京建成生物工程研究所產(chǎn)品。GL-20GⅡ型高速低溫離心機，UV-2450分光光度儀，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，水浴箱，中藥粉碎機，內(nèi)切式組織勻漿機，電子分析天平。

1.2 方法

1.2.1 分組及給藥 選用自然老齡12月齡雌性KM小鼠40只，隨機分成對照組和實驗組，每組各20只，另將20只3月齡雌性KM小鼠作為青年組。小鼠按組別分籠飼養(yǎng)在相同的自然條件下，常規(guī)喂養(yǎng)，待適應(yīng)后開始進行實驗。實驗前用脫毛霜給小鼠背部脫毛3 cm×3 cm，實驗組用木瓜提取液外涂，對照組年和青年組用等量生理鹽水外涂，保鮮膜保護1 h。每天1次，每次1 g，連續(xù)涂抹42 d。

1.2.2 皮膚指數(shù)的測定 稱重后處死小鼠，將小鼠受試部位皮膚邊緣剪開，自然剝離，去除皮下組織后稱重。計算皮膚指數(shù)，即皮膚指數(shù)=皮膚質(zhì)量(mg)/鼠體質(zhì)量(g)。

1.2.3 10%皮膚勻漿的制備及HYP、SOD、MDA、LF的測定

取稱重后的皮膚在冷生理鹽水中漂洗，濾紙拭干，將皮膚剪碎，放入玻璃勻漿器中，加入冷的生理鹽水(生理鹽水的體積總量是皮膚重量的9倍)，用內(nèi)切式組織勻漿機進行勻漿(勻漿時間10 s/次，間隙30 s，連續(xù)5～6次，在冰水中進行)，將制備好的10%勻漿用冷凍離心機3 000 r/min離心10～15 min，取適量離心好的勻漿上清液，按試劑盒說明測定并計算皮膚組織中HYP、SOD、MDA、LF 的含量。

1.3 統(tǒng)計學方法

所有結(jié)果用SPSS16.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計

2 結(jié)果

2.1 木瓜提取液對小鼠皮膚指數(shù)的影響

與青年組比，對照組皮膚指數(shù)明顯減小〔(2.96±0.37)vs(3.82±0.43)mg/g，P＜0.01〕;與對照組比，實驗組提升了老年小鼠皮膚指數(shù)〔(3.66±0.45)mg/g，P ＜0.01〕，說明木瓜提取液在一定程度上可增加老年小鼠皮膚的質(zhì)量，具有延遲皮膚萎縮的作用。

2.2 木瓜提取液對小鼠皮膚組織中HYP、SOD、MDA、LF含量的影響

見表1。與青年組比，對照組降低了老年小鼠皮膚組織中HYP和SOD的含量(P＜0.01)，增加了老年小鼠皮膚組織中MDA和LF含量(P＜0.01);與對照組比，實驗組增加了老年小鼠皮膚組織中HYP和SOD的含量(P＜0.01)，降低了老年小鼠皮膚組織中MDA和LF含量(P＜0.01)。

表1 木瓜提取液對小鼠皮膚組織中HYP、SOD、MDA、LF含量的影響(± s，n=20)

表1 木瓜提取液對小鼠皮膚組織中HYP、SOD、MDA、LF含量的影響(± s，n=20)

與青年組比較：1)P＜0.01;與對照組比較：2)P＜0.01

組別HYP(μg/mg)SOD(U/ml)MDA(mmol/g)LF(μg/g)青年組32.46±2.61 22.38±0.75 5.32±1.26 4.58±0.97對照組 20.16±2.131)17.91±0.621)9.77±1.311)7.48±1.351)實驗組 26.68±2.372)20.42±0.722)7.02±1.142)6.28±1.062)

3 討論

皮膚是機體衰老過程中最易察覺的器官，隨著年齡的增長，皮膚會變薄、萎縮、起皺，含水量減少，彈性消退，色斑沉著，其發(fā)生的主要原因目前認為是自由基過量堆積，與氨基酸或直接與蛋白質(zhì)反應(yīng)使肽鍵斷裂，導(dǎo)致皮膚中蛋白發(fā)生交聯(lián)變性，使皮膚變薄、起皺，彈性降低，細胞生長變緩。同時活性氧會攻擊生物膜上的不飽和脂肪酸，引起跨膜物質(zhì)交換障礙，破壞內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)，形成多種脂質(zhì)過氧化物及其代謝產(chǎn)物MDA。MDA是強效交聯(lián)劑，會引起蛋白質(zhì)、核酸等生命大分子的交聯(lián)聚合，形成溶酶體無法消化的LF，累積在皮膚結(jié)締組織中形成老年斑〔4〕。由此可見，衰老是由自由基引起的對細胞成分的進攻而造成的結(jié)果，維持體內(nèi)適當?shù)淖杂苫宄齽┧?，可以延長壽命和推遲衰老。SOD是生物活性氧的重要清除劑酶類之一，能有效地清除并阻止超氧自由基連鎖反應(yīng)，保護皮膚免受自由基的損害，從而起到延緩皮膚衰老的作用?，F(xiàn)代醫(yī)學研究表明，膠原蛋白是皮膚的主要組成部分，而HYP又是膠原蛋白中的一種主要且相對恒定的氨基酸，HYP的含量會隨著皮膚的衰老而降低，是衡量皮膚衰老可靠的生化指標〔5〕。

本實驗發(fā)現(xiàn)，說明木瓜提取液可提高皮膚清除氧自由基的能力，阻止脂質(zhì)過氧化物對細胞結(jié)構(gòu)和功能的破壞，減少皮膚蛋白因交聯(lián)聚合而發(fā)生的變性和破壞，避免細胞間質(zhì)膠原纖維交聯(lián)增多，皮膚角質(zhì)化而出現(xiàn)真性皺紋或假性皺紋，使老年小鼠皮膚不會因膠原蛋白含量減少和LF的含量的增加而出現(xiàn)退行性變，從而維持皮膚正常的形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能，延緩衰老。

1 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)〔S〕.北京：化學工業(yè)出版社，2005：41.

2 江蘇新醫(yī)學院.中藥大辭典〔M〕.上海：上?？萍汲霭嫔?2006：3.

3 吳 虹，魏 偉，吳成義.木瓜化學成分及藥理活性的研究〔J〕.安徽中醫(yī)學院學報，2004;23(2)：62-4.

4 王春霖，郭 芳，王永利.自由基與衰老〔J〕.河北醫(yī)科大學學報，2005;4(26)：308-10.

5 李 震，李 祝，房秋寒，等.中藥抗皮膚衰老劑對小鼠皮膚羥脯氨酸含量的影響〔J〕.山東中醫(yī)藥大學學報，1997;21(2)：142-3.

R285.5

A

1005-9202(2012)23-5218-02;

10.3969/j.issn.1005-9202.2012.23.053

1 恩施市中心醫(yī)院

譚文波(1974-)，男，講師，主要從事延緩衰老的基礎(chǔ)研究。

〔2011-12-06收稿 2012-01-12修回〕

(編輯 曹夢園)