李燦宇 張自森 薛長(zhǎng)年 吳 敏 陳秀芹 郭尚云

(鄭州大學(xué)第五附屬醫(yī)院腫瘤科，河南 鄭州 450052)

熱灌注順鉑治療晚期卵巢癌惡性腹腔積液的臨床療效

李燦宇1張自森 薛長(zhǎng)年 吳 敏 陳秀芹2郭尚云2

(鄭州大學(xué)第五附屬醫(yī)院腫瘤科，河南 鄭州 450052)

目的 探討熱療聯(lián)合順鉑對(duì)人卵巢癌細(xì)胞的毒性增效作用及治療卵巢癌惡性腹腔積液的療效。方法 MTT法研究常溫及42℃不同作用時(shí)間下溫?zé)崧?lián)合順鉑對(duì)卵巢癌細(xì)胞敏感株SKOV3的生長(zhǎng)抑制作用，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡。觀察腹腔熱灌注順鉑治療36例晚期卵巢癌腹腔積液的療效及不良反應(yīng)。結(jié)果 42℃熱療顯著增強(qiáng)順鉑對(duì)卵巢癌細(xì)胞敏感株SKOV3的生長(zhǎng)抑制，42℃熱療60min聯(lián)合順鉑化療顯著增加SKOV3細(xì)胞凋亡率。熱灌注順鉑治療卵巢癌腹腔積液的有效率為61.1%(22/36)，不良反應(yīng)輕微。結(jié)論 熱療能顯著增強(qiáng)順鉑的卵巢癌細(xì)胞毒性作用，熱灌注順鉑是晚期老年卵巢癌患者安全有效的治療方法。

熱療;化療;順鉑;卵巢癌;惡性腹腔積液

大多數(shù)卵巢癌患者就診時(shí)已有腹腔播散，并發(fā)惡性腹腔積液，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量，尤其是復(fù)發(fā)或耐藥的患者，全身化療療效差，且部分患者不能耐受，因此采取有效的治療可改善此類患者生存。本研究采用細(xì)胞體外研究了熱療對(duì)順鉑的增效作用，并觀察了腹腔熱灌注順鉑治療晚期卵巢癌合并惡性腹腔積液的療效與不良反應(yīng)，并對(duì)其進(jìn)行臨床分析。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 病例資料 將2005年5月至2011年10月收治的36例經(jīng)病理學(xué)或細(xì)胞學(xué)確診的老年晚期卵巢癌合并腹水患者采用熱灌注順鉑化療。年齡60～78〔平均(66.2±5.9)〕歲，漿液性囊腺癌22例，黏液性囊腺癌14例，術(shù)后復(fù)發(fā)15例，Ⅲ期病變者21例，Ⅳ期病變者15例。本組患者卡氏評(píng)分均在60分以上?；熐把Ｒ?guī)、肝、腎功能及心電圖均未發(fā)現(xiàn)異常，無(wú)化療禁忌。化療前均簽署知情同意書(shū)。

1.1.2 細(xì)胞系 人卵巢漿液性乳頭狀囊腺癌細(xì)胞株(SKOV3)，貼壁生長(zhǎng)，由河南省醫(yī)藥科學(xué)研究院提供。

1.2 方法

1.2.1 熱灌注化療 經(jīng)B超定位后常規(guī)腹腔置管，注藥前盡量排盡腹腔積液，將順鉑(25 mg/m2)溶解到42℃的0.9%生理鹽水2 000 ml，將混合液灌入腹腔，然后腹腔內(nèi)注入地塞米松5 mg、2%利多卡因2 ml減輕腹膜粘連，灌注后封管，囑患者多次變換體位，之后采用42℃條件下微波熱療1 h。每w灌注1次，連續(xù)3 w為1個(gè)療程，休息1 w，連用2個(gè)療程后評(píng)價(jià)療效。

1.2.2 療效評(píng)價(jià) 完全緩解(CR)：腹水消失并持續(xù)4 w以上;部分緩解(PR)：腹水減少50%以上并持續(xù)4 w以上;穩(wěn)定(NC)：腹水減少不足50%或增加小于25%至少以上，持續(xù)4 w;無(wú)效(PD)：腹水增加20%，癥狀加重。有效率=(CR例數(shù)+PR例數(shù))/總例數(shù) ×100%。根據(jù)美國(guó)NCI制定的毒性評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)評(píng)價(jià)不良反應(yīng)事件。

1.2.3 細(xì)胞培養(yǎng) 人卵巢癌SKOV3細(xì)胞生長(zhǎng)于含10 ml/L小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液中，置于37.0℃、5%CO2的恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

1.2.4 噻唑藍(lán)(MTT)檢測(cè)細(xì)胞增殖 觀察內(nèi)容分兩種設(shè)計(jì)：(1)固定熱療時(shí)間，溫度為42℃，加熱60 min，觀察順鉑不同濃度時(shí)SKOV3細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制率，順鉑濃度分別為0、1、10、20、40、80 μg/ml;(2)固定熱療溫度為42℃，熱療時(shí)間依次設(shè)定為0，30，60，90 和 120 min，共 5 個(gè)時(shí)間點(diǎn)，觀察熱療不同時(shí)間時(shí)SKOV3細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制率。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期SKOV3細(xì)胞，經(jīng)胰蛋白酶消化，計(jì)數(shù)以7×104/ml的細(xì)胞濃度接種到96孔板中，每孔100 μl，37.0℃、5%CO2的恒溫培養(yǎng)24 h。設(shè)單純細(xì)胞對(duì)照組、單純熱療組、單純化療組、熱化療聯(lián)合組4組，每組設(shè)4個(gè)重復(fù)孔。順鉑給藥后，培養(yǎng)48 h，收集細(xì)胞，用MTT法檢測(cè)順鉑不同濃度及作用不同時(shí)間對(duì)卵巢癌SKOV3細(xì)胞增殖的影響，用酶標(biāo)儀在570 nm處測(cè)定吸光值(A)。計(jì)算順鉑對(duì)SKOV3細(xì)胞的抑制率。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3遍，取平均值。

1.2.5 流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡 收集各組經(jīng)過(guò)處理的細(xì)胞，離心后棄去上清液，磷酸鹽緩沖液(PBS)洗2次。按照雙色細(xì)胞凋亡檢測(cè)(Annexin/PI)試劑盒操作說(shuō)明，流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡百分率。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件分析，計(jì)量資料比較采用t檢驗(yàn)，率的比較采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05認(rèn)為差異具有顯著性。

2 結(jié)果

2.1 不同濃度順鉑對(duì)SKOV3細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用 在同一作用時(shí)間條件下，SKOV3細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用隨順鉑藥物濃度的增加而增強(qiáng)。42℃ 熱療60 min處理后，順鉑對(duì)SKOV3細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用顯著增加(P＜0.05)。見(jiàn)表1。

表1 42℃熱療時(shí)不同順鉑濃度時(shí)SKOV3細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制率(%)

2.2 熱化療不同作用時(shí)間對(duì)SKOV3細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用

在 42℃ 條件下順鉑作用 0、30、60、90、120 min，分別檢測(cè) SKOV3細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制率。42℃下作用不同時(shí)間對(duì)SKOV3細(xì)胞的抑制作用差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，隨熱療時(shí)間的延長(zhǎng)，SKOV3細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率逐漸增加。42℃下作用60 min和30 min相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。作用 60 min、90 min和120 min相比，差異無(wú)顯著性。見(jiàn)表2。

表2 42℃熱療不同時(shí)間時(shí)順鉑對(duì)SKOV3細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用(%)

2.3 熱療聯(lián)合順鉑化療對(duì)SKOV3細(xì)胞凋亡的影響 順鉑處理SKOV3細(xì)胞后，42℃下作用60 min后，37℃下繼續(xù)培養(yǎng)48 h。收集活細(xì)胞行Annexin V-FITC/PI檢測(cè)，結(jié)果顯示熱療聯(lián)合順鉑化療組細(xì)胞凋亡率(早期和晚期之和)為69.39%，單純順鉑化療組細(xì)胞凋亡率為47.94%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。熱療作用下，凋亡早期SKOV3細(xì)胞比率顯著增加(P＜0.05)。見(jiàn)表3。

表3 熱療聯(lián)合順鉑作用48 h后SKOV3細(xì)胞凋亡情況(%)

2.4 熱灌注順鉑治療卵巢癌惡性腹腔積液的臨床療效 36例患者經(jīng)熱灌注順鉑治療后，22例患者腹水量得到控制，其中CR 3例，PR 19例，SD9例，PD 5例，有效率 61.1%(22/36)。副作用有輕微腹痛者4例，低熱5例，輕微腹痛及低熱患者未做特殊處理，自行緩解。副反應(yīng)以消化道癥狀為主，發(fā)生率為66.7%(24/36)，其中Ⅰ～Ⅱ級(jí)者18例，Ⅲ～Ⅳ級(jí)者6例，處理后癥狀均緩解。血液系統(tǒng)副反應(yīng)發(fā)生率為47.2(17/36)，多表現(xiàn)為輕度白細(xì)胞減少和貧血。全組患者均未出現(xiàn)腹腔感染、腸黏連等并發(fā)癥，腸梗阻發(fā)生2例，為腫瘤進(jìn)展壓迫腸道所致。

2.5 熱灌注順鉑對(duì)卵巢癌患者血清CA125水平的影響 監(jiān)測(cè)記錄記錄治療前、治療第4周、治療第8周CA125表達(dá)水平。根據(jù)臨床療效分組，有效組患者血清CA125水平較熱灌注順鉑化療前顯著下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。無(wú)效組患者血清CA125水平雖有下降，但差異無(wú)顯著性。見(jiàn)表4。

表4 熱灌注順鉑對(duì)卵巢癌患者血清CA125水平的影響(±s)

表4 熱灌注順鉑對(duì)卵巢癌患者血清CA125水平的影響(±s)

分組 n 治療前 第4周 第8周有效22 80.25±14.23 52.58±11.22 40.45±12.42無(wú)效14 102.51±24.33 99.64±21.86 86.50±19.36

3 討論

卵巢癌是老年女性患者中最常見(jiàn)的惡性腫瘤，其腹腔轉(zhuǎn)移后極易形成腹腔積液。順鉑腹腔灌注是卵巢癌常見(jiàn)且有效的治療方法，能有效控制腹水產(chǎn)生。順鉑為劑量依賴性藥物，但是大劑量的順鉑常導(dǎo)致嚴(yán)重副反應(yīng)，嚴(yán)重限制了順鉑對(duì)腫瘤的殺傷效果。因此，增強(qiáng)卵巢癌細(xì)胞對(duì)順鉑化療的敏感性成為重要臨床課題。

熱療近年來(lái)逐漸成為繼放化療、生物治療之后的又一腫瘤治療手段，腹腔熱灌注治療成為腹腔腫瘤控制的有效方法，不良反應(yīng)相對(duì)較少，安全性好〔1〕。有研究證實(shí)，溫?zé)釋?duì)腫瘤細(xì)胞有直接的殺傷作用。熱療聯(lián)合化療可以提高抗腫瘤作用，順鉑是最早被發(fā)現(xiàn)與熱療有協(xié)同作用的化療藥物，腹腔熱灌注順鉑可有效控制腹水生成〔2〕。熱療可以增加腫瘤細(xì)胞膜的通透性，提供細(xì)胞內(nèi)的藥物濃度，促進(jìn)DNA與鉑類藥物結(jié)合，抑制DNA的修復(fù)，從而提高化療藥物的殺傷作用，還有助于逆轉(zhuǎn)順鉑耐藥的發(fā)生〔3〕。本研究通過(guò)體外研究證實(shí)，熱療能顯著增強(qiáng)順鉑對(duì)卵巢癌SKOV3細(xì)胞的毒性作用，誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生凋亡，這為卵巢癌熱化療的臨床應(yīng)用提供了理論參考依據(jù)。本研究在42℃熱療條件下觀察了順鉑對(duì)卵巢癌SKOV3細(xì)胞的毒性作用，結(jié)果表明熱療時(shí)間為60 min是最佳作用時(shí)間，繼續(xù)延長(zhǎng)作用時(shí)間并不能進(jìn)一步顯著提高療效。在臨床實(shí)踐的過(guò)程中，60 min也是患者能夠耐受且副作用小的常用時(shí)間期限〔4〕。過(guò)度延長(zhǎng)熱療時(shí)間可能帶來(lái)其他副反應(yīng)且使患者不易耐受。

本研究通過(guò)采用腹腔熱灌注順鉑聯(lián)合微波熱療對(duì)晚期老年卵巢癌合并腹腔積液的患者進(jìn)行治療觀察，通過(guò)化療和熱療的結(jié)合，取得了較好的臨床療效，與文獻(xiàn)報(bào)道一致〔5〕。本研究對(duì)象為老年患者，采用了熱灌注單藥治療，不良反應(yīng)低于同時(shí)靜脈聯(lián)合用藥的報(bào)道，僅表現(xiàn)為輕度胃腸道反應(yīng)和骨髓抑制，有較好的安全性。雖然腹腔多藥聯(lián)合灌注也能取得較好的腹水控制效果，但其Ⅲ～Ⅳ級(jí)不良反應(yīng)也顯著增加〔6〕，降低患者生存質(zhì)量。順鉑耐藥是常見(jiàn)的臨床難題，耐藥機(jī)制復(fù)雜〔7〕。近來(lái)有報(bào)道免疫增強(qiáng)劑可逆轉(zhuǎn)卵巢癌細(xì)胞對(duì)順鉑的耐藥〔8〕，結(jié)果提示熱灌注順鉑聯(lián)合免疫增強(qiáng)劑治療卵巢癌可能取得更好的療效。

綜上所述，本研究通過(guò)對(duì)熱灌注順鉑治療卵巢癌惡性腹腔積液的體外研究和臨床觀察，證實(shí)熱療能顯著增強(qiáng)順鉑的卵巢癌細(xì)胞毒性作用，熱灌注順鉑能有效控制卵巢癌惡性腹腔積液，不良反應(yīng)較少，安全性好。因此，熱灌注順鉑是晚期老年卵巢癌患者有效的治療方法，臨床上適宜推廣。

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R735

A

1005-9202(2012)17-3656-03;

10.3969/j.issn.1005-9202.2012.17.017

鄭州市科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(No.2010SFXM345)

1 鄭州大學(xué)第三附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科 2 鄭州大學(xué)第五附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科通訊作者：吳 敏(1957-)，女，主任醫(yī)師，主要從事腫瘤個(gè)體化治療研究。

李燦宇(1977-)，女，碩士，主治醫(yī)師，主要從事婦科腫瘤的基礎(chǔ)與臨床研究。

〔2012-04-10收稿 2012-05-18修回〕

(編輯 袁左鳴)