王淑慧 王桂琴

變應(yīng)性鼻炎(allergic rhinitis，AR)是發(fā)生在鼻黏膜的變態(tài)反應(yīng)性疾病，以鼻癢、噴嚏、鼻分泌亢進(jìn)，鼻黏膜腫脹為主要特點(diǎn)，是嚴(yán)重影響人類生活質(zhì)量的變態(tài)反應(yīng)性疾病。在上個(gè)世紀(jì)九十年代中期，由Sakaguchi等首先證實(shí)了天然CD4+CD25+Treg為一類具有免疫抑制作用的T細(xì)胞，約占外周CD4+T細(xì)胞的5% ～10%［1］。這群細(xì)胞具有免疫耐受和免疫抑制兩大特性，對維持機(jī)體免疫的穩(wěn)定性起著重要的調(diào)節(jié)作用。Treg細(xì)胞常用的分子標(biāo)記有CD25、Foxp3(叉頭/翼狀螺旋轉(zhuǎn)錄因子)等，其中Foxp3是CD4+CD25+Treg的特異性標(biāo)志，是調(diào)節(jié)性T細(xì)胞發(fā)育的一個(gè)重要開關(guān)［2］。目前調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的研究已受到學(xué)術(shù)界的廣泛關(guān)注，但是其在變應(yīng)性鼻炎發(fā)病中的作用還不是很明確。本文采用流式細(xì)胞術(shù)分析變應(yīng)性鼻炎患者外周血PBMC中CD4+CD25+Treg、CD4+CD25highTreg及Foxp3占外周血T細(xì)胞的百分比，以進(jìn)一步探討其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2011年1月至2011年12月在山西省汾陽醫(yī)院就診的30例AR患者(男16例，女14例，年齡16～53歲，平均30.1歲)，15例健康者作對為照組，來自本院體檢的健康人群，均取得本人同意(男8例，女7例，年齡 25～45歲，平均31歲)。以上所有受試對象均排除其他急慢性疾病，8周內(nèi)未用抗組胺、糖皮質(zhì)激素。

1.2 主要試劑和儀器 FITC標(biāo)記的CD25、PC5標(biāo)記的CD4均購自美國BD公司;PE標(biāo)記的Foxp3，固定劑，破膜劑，稀釋液以及淋巴細(xì)胞分離液均購自eBiosciense公司，EPICS XL流式細(xì)胞儀為美國Beckman-Coulter公司。

1.3 檢測方法 所有檢測對象均于清晨空腹采集靜脈血2 ml加入EDTA抗凝管制備單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)懸液，加入PC5-CD4、FITC-CD25單克隆抗體20μl，室溫避光孵育 30 min，并PBS洗滌1次，棄上清。加入新鮮配制的固定/破膜液1 ml，4℃避光 30～60 min，用固定/破膜緩沖液2 ml洗滌2 次，加入 Foxp3-PE20μl，4℃ 避光 30 min，用固定/破膜緩沖液2 ml洗滌2次，棄上清，加入 0.5 mlPBS，4 h內(nèi)上流式細(xì)胞儀檢測。流式細(xì)胞檢測采用 EPICS XL流式細(xì)胞儀，應(yīng)用Cell Quest軟件進(jìn)行結(jié)果分析，在 FSC-SSC散點(diǎn)圖上選定淋巴細(xì)胞群，以CD4細(xì)胞群和 SSC設(shè)門，選擇 CD4+細(xì)胞分析CD25和Foxp3表達(dá)，將 CD4 CD25細(xì)胞群平均熒光強(qiáng)度＞7.0的亞型細(xì)胞群定義為CD4 CD25highT細(xì)胞，結(jié)果以CD4+CD25+T細(xì)胞、CD4+CD25highT細(xì)胞和Foxp3占CD4+T細(xì)胞的百分率表示。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 16.0軟件處理資料，結(jié)果均采用±s表示。組間比較采用t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

流式細(xì)胞技術(shù)檢測結(jié)果顯示，AR組 CD4+CD25+/CD4+、CD4+CD25high/CD4+T細(xì)胞百分比及Foxp3表達(dá)與正常對照組相比明顯減少，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見表1。

表1

3 討論

流行病學(xué)的研究證實(shí)，近年來，變應(yīng)性鼻炎的發(fā)病率在全球范圍內(nèi)逐漸升高，除了環(huán)境因素以外，越來越多的研究證實(shí)變應(yīng)性鼻炎是一種多基因疾病，且具有明顯個(gè)體差異和地域性，這都為變應(yīng)性疾病的研究帶來一定困難。過去較為認(rèn)同的是T細(xì)胞分化調(diào)節(jié)假說，一直以來認(rèn)為Th1/Th2免疫失衡是變應(yīng)性鼻炎發(fā)病機(jī)制中的主要環(huán)節(jié)，然而，進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn)，Th1細(xì)胞是前炎性細(xì)胞，其促炎癥作用超過了抗炎作用，與Th1相關(guān)的炎癥反應(yīng)并不下調(diào)變應(yīng)性鼻炎。而在Th2細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)疾病中，變應(yīng)性鼻炎的發(fā)病率也并未增高［3-4］。說明單純的Th1/Th2失衡理論不足以解釋變應(yīng)性鼻炎的發(fā)病機(jī)制。最近，一種在過敏性炎癥反應(yīng)中發(fā)揮較強(qiáng)免疫抑制功能的T細(xì)胞受到廣泛關(guān)注，這一細(xì)胞群被稱為調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)。Treg細(xì)胞對Th1反應(yīng)和Th2反應(yīng)均表現(xiàn)為抑制作用，以起到維持機(jī)體自身穩(wěn)態(tài)的作用。其中CD4+CD25+Treg細(xì)胞作用最強(qiáng)，研究它的免疫調(diào)節(jié)作用及其機(jī)制是近年來的研究熱點(diǎn)。CD4+CD25+Treg表達(dá)多種表面分子，F(xiàn)oxp3是目前公認(rèn)的CD4+CD25+Treg細(xì)胞的特異性標(biāo)志［5］。除作為分子標(biāo)記外，F(xiàn)oxp3介導(dǎo) CD4+CD25+Treg在胸腺的發(fā)育、外周的表達(dá)及功能的維持，可反映CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的活性水平［6］。CD4+CD25+Treg的這種調(diào)節(jié)作用可能在AR中存在缺失或缺陷，導(dǎo)致CD4+CD25+Treg對樹突狀細(xì)胞活化的抑制作用減弱，以及對Th2細(xì)胞的增殖作用降低，進(jìn)而不能夠阻止針對變應(yīng)原的Th2型反應(yīng)。有研究表明，變應(yīng)性鼻炎患者外周血PBMC中CD4+CD25+Treg的比率低于正常人，同時(shí)鼻黏膜中Foxp3的表達(dá)降低［7］。但也有研究表明CD4+CD25+Treg細(xì)胞數(shù)量無明顯差別甚至增加，但 Treg細(xì)胞不能發(fā)揮正常的免疫抑制功能［8］。

本研究結(jié)果顯示，變應(yīng)性鼻炎患者外周血PBMC中的CD4+CD25+Treg細(xì)胞及Foxp3比例明顯低于正常人，進(jìn)一步證實(shí)了Treg細(xì)胞數(shù)量不足和(或)功能缺失在變應(yīng)性鼻炎發(fā)生發(fā)展中的意義。雖然目前直接將Treg細(xì)胞用于治療AR的報(bào)道較少，但是，隨著變應(yīng)性鼻炎發(fā)病機(jī)制的深入研究，升高Treg細(xì)胞數(shù)量或增強(qiáng)其活性有利于Treg細(xì)胞調(diào)節(jié)作用的發(fā)揮，可能在AR的免疫治療中獲得廣泛的應(yīng)用前景。

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