顏春華

（丹東市食品藥品檢驗(yàn)所，遼寧 丹東 118002）

舒筋定痛片具有活血散瘀，消腫止痛的功效，主治跌打損傷，慢性腰腿疼，風(fēng)濕痹痛，由大黃、當(dāng)歸、紅花、骨碎補(bǔ)等九味藥材組成。該中成藥收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥成方制劑第十五冊(cè)[1]，標(biāo)準(zhǔn)中無(wú)定量指標(biāo)，不能有效控制其質(zhì)量，我們采用了HPLC法[2]對(duì)方中大黃的主要有效成分之一的大黃酚進(jìn)行含量測(cè)定。方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

日本Shimadzu公司LC-10ATVP高效液相色譜儀；檢測(cè)器：SPDM10AVP；Class-vp工作站。

1.2 試藥

大黃酚對(duì)照品：由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)為110796-200309（供含量測(cè)定用）；甲醇為色譜純；水為二次蒸餾水；其他試劑均為分析純；舒筋定痛片為市售品（批號(hào)為061202，061203，061204）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱為Diamonsil?（鉆石）C18（5μm，250×4.6mm）；流動(dòng)相：甲醇-0.1%磷酸溶液（85∶15）；檢測(cè)波長(zhǎng)：430nm；柱溫：室溫；流速：1.0mL/min；理論板數(shù)按大黃酚峰計(jì)算不低于2000。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取大黃酚對(duì)照品10.30mg，置25mL量瓶中，加無(wú)水乙醇-乙酸乙酯（2∶1）混合溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液。精密吸取此液5mL，置100mL量瓶中，加無(wú)水乙醇-乙酸乙酯（2∶1）混合溶液至刻度，搖勻，即得（每1mL含大黃酚20.6μg）。

2.3 供試品溶液的制備

取本品20片，除去包衣，精密稱定，研細(xì)，取約1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50mL，密塞，稱定重量，置水浴上加熱回流1h，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液25mL，加鹽酸2mL，搖勻，置水浴中加熱回流1h，立即冷卻，用三氯甲烷強(qiáng)力振搖提取4次，每次15mL，合并三氯甲烷液，置水浴上蒸干，殘?jiān)脽o(wú)水乙醇-乙酸乙酯（2∶1）混合溶液溶解，移置50mL量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

測(cè)定法：分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，按上述色譜條件測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)圖1A、B。

2.4 線性關(guān)系考察

精密吸取對(duì)照品儲(chǔ)備液1、3、5、7、9mL，分別置10mL量瓶中，加無(wú)水乙醇-乙酸乙酯（2∶1）混合溶液至刻度，搖勻。分別吸取各濃度溶液10μL注入液相色譜儀中，測(cè)定峰面積，以大黃酚進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸。得回歸方程為：Y=57076.75+1140308.131X，r=0.99997，表明大黃酚在0.412～3.708μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.5 陰性對(duì)照試驗(yàn)

按處方比例配制不含大黃的陰性對(duì)照樣品，按供試品溶液的制備方法制備，測(cè)定，結(jié)果在大黃酚對(duì)照品吸收峰位置處無(wú)干擾（見(jiàn)圖1C）。

2.6 精密度試驗(yàn)

分別精密吸取20.6μg/mL的大黃酚對(duì)照品溶液10μL，按正文含量測(cè)定項(xiàng)下色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣5次，測(cè)定峰面積，結(jié)果平均峰面積為4802857，RSD=1.07%。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一份供試品溶液分別放置2、4、8、12、16、20、24h測(cè)定供試品中大黃酚的峰面積，測(cè)得其峰面積的平均值為4882147，RSD為1.12%，表明供試品溶液至少在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 重現(xiàn)性試驗(yàn)

圖1 HPLC色譜圖

表1 大黃酚回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

取同一批號(hào)的供試品適量，精密稱定6份，按含量測(cè)定項(xiàng)下的方法操作，制備供試品溶液，測(cè)定供試品中大黃酚的含量，結(jié)果平均含量為0.53mg/片，RSD=1.26%。

2.9 回收率試驗(yàn)

取已知大黃酚含量的舒筋定痛片樣品（批號(hào)為061204，大黃酚含量為0.52mg/片，平均片重為0.2566g）約1g，精密稱定，共計(jì)6份，分別精密加入大黃酚對(duì)照品溶液（0.4132mg/mL）5mL，按含量測(cè)定項(xiàng)下方法操作，制備供試品溶液，測(cè)定舒筋定痛片中大黃酚的含量，計(jì)算回收率，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。

2.10 樣品含量測(cè)定

按本質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)含量測(cè)定項(xiàng)下方法操作，制備供試品溶液，測(cè)定三批舒筋定痛片中大黃酚的含量，測(cè)定結(jié)果分別為0.56、0.53、0.52mg/片。

3 討 論

3.1 本實(shí)驗(yàn)以甲醇與乙醇為溶媒對(duì)供試品進(jìn)行提取，并加以考察，測(cè)定結(jié)果表明，兩種溶媒提取效率基本相同，由于乙醇提取供試液中其他組分較多，易污染色譜柱，所以選用甲醇為提取溶劑。

3.2 在供試品提取方法的考察過(guò)程中，曾將酸水解后的供試品，濾過(guò)后直接進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果測(cè)定效果不理想，故采用酸水解后再用三氯甲烷進(jìn)行提取，蒸干后，殘?jiān)脽o(wú)水乙醇-乙酸乙酯（2∶1）混合溶液溶解定容，濾過(guò)后進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果雜質(zhì)峰較少，且分離效果良好，故確定為供試品的提取方法。

[1]中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn).中藥.中藥成方制劑[S].第十五冊(cè).1997.

[2]中華人民共和國(guó)國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典:一部[S].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005.