陳 燁，王 洋，劉忠忱，李文君，鄧晶晶，徐利鋒(遼寧大學(xué)藥學(xué)院，遼寧沈陽110036)

藤甲酰苷是由天然產(chǎn)物提取物藤黃酸(gambogic acid)經(jīng)三步反應(yīng)合成得到的藤黃酸的衍生物，為新實(shí)體化合物，目前國內(nèi)外均無相關(guān)報道。藥理實(shí)驗(yàn)研究顯示，它具有一定的細(xì)胞毒性，對白血病細(xì)胞HL-60(TB)、黑素瘤細(xì)胞LOX IMVI具有明顯抑制作用，其 IC50值分別為21.0 nmol/L和19.8 nmol/L［1］。動物實(shí)驗(yàn)研究顯示，藤甲酰苷的口服半衰期為2.2 h，代謝速度較快，如用于臨床治療則需要多次連續(xù)給藥，給患者用藥帶來不便，同時也會產(chǎn)生很大的毒性。研制藤甲酰苷緩釋片可有效地延長其代謝時間，降低毒副作用，提高患者的順應(yīng)性。筆者采用親水性高分子材料羥丙基甲基纖維素(HPMC)為主要緩釋材料、乙基纖維素(EC)為骨架材料、乳糖為致孔劑、微晶纖維素為添加劑，研制出12 h給藥1次的藤甲酰苷親水凝膠骨架型緩釋片，并對影響該緩釋片體外釋放藥物的因素進(jìn)行了研究［2］?，F(xiàn)報告如下.

1 儀器與試劑

DP30型單沖壓片機(jī)(上海天凡藥機(jī)制造廠);RZC-6C2型藥物溶出儀(上海黃海藥物儀器有限公司);Waters 1525 Brnary高效液相色譜儀/泵(美國Waters公司);Waters 2487高效液相色譜儀/檢測器(美國Waters公司);78X22片劑四用測定儀(上海黃海藥檢儀器廠);數(shù)顯式恒溫干燥箱(余姚市遠(yuǎn)東數(shù)控儀器廠);電子天平(Mettler-Toledo Group)。

藤甲酰苷原料(遼寧大學(xué)藥學(xué)院研制);羥丙基甲基纖維素K4M、羥丙基甲基纖維素K15M、乙基纖維素EC 10FP(上?？房蛋录夹g(shù)有限公司);羥丙基甲基纖維素60RT4000(山東瑞泰化工集團(tuán)有限公司);乳糖(美國FMC公司)，其余輔料均為藥用級。

2 方法與結(jié)果

2.1 緩釋片的制備及含量測定方法

2.1.1 緩釋片的制備 以HPMC為緩釋材料、EC為骨架材料、乳糖為致孔劑、微晶纖維素(MCC)為填加劑，按處方比例稱取過100目篩的藤甲酰苷與HPMC等輔料，混合均勻，無水乙醇為黏合劑制成軟材，過20目篩制粒，55℃烘干，30目篩整粒，加1%(w/w)滑石粉混勻，壓片，制成藤甲酰苷緩釋片，每片含藤甲酰苷60 mg。

2.1.2 緩釋片的含量測定方法 依照《中國藥典》2010年版二部附錄ⅤD的高效液相色譜法測定。

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn):用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以甲醇-0.05%磷酸水溶液為流動相;檢測波長為331 nm。理論板數(shù)按藤甲酰苷計(jì)算不低于2 000。

測定法:取本品20片，精密稱定，研細(xì)，精密量取適量(約相當(dāng)于藤甲酰苷25mg)，置50 ml量瓶中，加甲醇適量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液3 ml，置25 ml量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，精密量取20 μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖;另量取藤甲酰苷對照品適量，精密稱定，加甲醇溶解并定量稀釋制成每1 ml中含藤甲酰苷60 μg的溶液，同法測定。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。

2.2 釋放度方法的建立

2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 精密稱取藤甲酰苷對照品約25 mg于50 ml量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成儲備液。精密吸取儲備液2.0、2.5、3.0、3.5、4.0 ml，分別置于 25 ml量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，在331 nm處測定峰面積A，并以濃度(C)對峰面積(A)進(jìn)行線性回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程:A=13 806.6C+7 887.6，線性范圍為40.80～81.60 μg/ml，r=0.999 8。

2.2.2 方法重復(fù)性試驗(yàn) 取標(biāo)準(zhǔn)曲線試驗(yàn)項(xiàng)下61.2 μg/ml的樣品溶液，間隔2 h測定一次，共測定6次，計(jì)算樣品的日內(nèi)RSD值為0.18%，表明方法的重復(fù)性良好。

2.2.3 體外釋放度的測定 取本品，按釋放度測定法(《中國藥典》2010年版二部附錄X D第一法)的有關(guān)規(guī)定進(jìn)行測定［3］。轉(zhuǎn)速為 100 r/min，溫度為37℃，釋放介質(zhì)為900 ml，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5% 的十二烷基硫酸鈉(SDS)，避光操作，按規(guī)定時間點(diǎn)取樣4.5 ml，補(bǔ)加等量介質(zhì)。釋放液經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。照“2.1.2”節(jié)方法分別測定，計(jì)算累計(jì)釋放百分率。測得本品每片在2、6、12 h的釋放度分別為 10% ～35%、35%～65%和80%以上。

2.3 體外釋藥行為的考察

2.3.1 不同規(guī)格的HPMC對藥物釋放的影響 采用3種不同規(guī)格的羥丙基甲基纖維素即:HPMC 60RT4000、K4M、K15M，用量均為片劑輔料總量的30%，加入處方量的乳糖、EC和微晶纖維素，按“2.1”節(jié)的操作制備藤甲酰苷緩釋片。按“2.2.3”節(jié)的方法分別測定不同時間點(diǎn)緩釋片劑的累計(jì)釋放百分率，繪制釋藥曲線圖，結(jié)果見圖1。

圖1 HPLC的規(guī)格對藥物體外釋放的影響

結(jié)果表明，不同規(guī)格的HPMC對釋放有一定影響，其中，K4M釋放度優(yōu)于其他兩種輔料，故選擇K4M作為緩釋材料。

2.3.2 不同用量的HPMC對藥物釋放的影響 選用HPMC(K4M)作為骨架材料，使其用量占片劑輔料總量的20%、30%、40%、50%、60%左右，用微晶纖維素調(diào)節(jié)片重。按“2.1”節(jié)的操作制備藤甲酰苷緩釋片。按“2.2.3”節(jié)的方法分別測定不同時間點(diǎn)緩釋片劑的累計(jì)釋放百分率，繪制釋藥曲線圖。結(jié)果見圖2。

圖2 HPMC的用量對藥物體外釋放的影響

結(jié)果表明，不同用量的HPMC對釋放有很大影響，30%用量的釋放度優(yōu)于其他4種用量，故選擇30%用量的HPMC為宜。

2.3.3 不同致孔劑對藥物釋放的影響 選用HPMC(K4M)作為骨架材料，使其用量占片劑輔料總量的30%，用微晶纖維素代替乳糖。同上述工藝過程制備緩釋片。按2.2.3方法操作分別測定不同時間點(diǎn)緩釋片劑的累計(jì)釋放百分率，結(jié)果見圖3。結(jié)果表明，用微晶纖維素代替乳糖，藥物的釋放速度會減慢。

圖3 不同致孔劑對藥物體外釋放的影響

2.3.4 釋放條件——轉(zhuǎn)速對藥物釋放的影響 測定同一處方、同一批次緩釋片在相同的溶出介質(zhì)中，攪拌速度分別為50、75、100 r/min時藤甲酰苷緩釋片的體外釋放速度。按“2.2.3”節(jié)的方法分別測定不同時間點(diǎn)藤甲酰苷緩釋片劑的累計(jì)釋放百分率，繪制釋藥曲線圖，結(jié)果見圖4。

圖4 攪拌速度對藥物體外釋放的影響

結(jié)果表明，轉(zhuǎn)速越快藥物的釋放速率也加快，說明攪拌速度對藥物的釋放產(chǎn)生一定的影響，原因是轉(zhuǎn)速快可以加速致孔劑的的溶出，進(jìn)而加速藥物的釋放。

2.3.5 不同壓片的壓力對藥物釋放的影響 在壓片壓力為 2～4 、4～6、6～8 kg/cm2的條件下，制備不同硬度的藤甲酰苷緩釋片，按“2.2.3”節(jié)的方法分別測定壓片壓力對釋放度的影響。結(jié)果見圖5。

圖5 不同的壓片壓力對藥物體外釋放的影響

結(jié)果表明，當(dāng)壓片壓力很小時，緩釋片釋放較慢;當(dāng)壓力增加大到一定值后，釋放度隨壓力的增加變化不大。

2.4 緩釋片劑的質(zhì)量考察

2.4.1 釋放均一性 取優(yōu)化處方制得的同批次藤甲酰苷緩釋片(批號:090408)4片，按“2.2.3”節(jié)的方法測定不同時間累計(jì)釋藥百分率，結(jié)果見圖6。

由圖6可知，藥物釋放均一性良好。

圖6 均一性對藥物體外釋放的影響

2.4.2 工藝重現(xiàn)性 按優(yōu)化處方制備二批次藤甲酰苷緩釋片(批號:090408;090410)，按“2.2.3”節(jié)的方法分別測定不同時間點(diǎn)緩釋片劑的累計(jì)釋放百分率，繪制釋藥曲線圖，結(jié)果見圖7。由圖7可知，制備方法的工藝重現(xiàn)性良好。

圖7 工藝重現(xiàn)性對藥物體外釋放的影響

2.4.3 釋放度-時間-pH值三維圖 對于口服緩控釋制劑，藥物在體內(nèi)的釋藥過程較長，要經(jīng)過多個器官，如:從pH接近1.0的胃部到達(dá)pH值約為7.4的結(jié)腸，這期間藥物釋放環(huán)境的pH值變化跨度較大，為了使藥物的釋放更符合人體消化道環(huán)境，進(jìn)一步考查了隨著時間的變化，釋放介質(zhì)pH值的變化對釋放度的影響，得到了釋放度-時間-pH值三維圖，見圖8。結(jié)果顯示，隨著釋放介質(zhì)pH的變化，藥物的釋放速度變化不大。說明藤甲酰苷從緩釋片中的釋放過程受釋放介質(zhì)pH值的影響不大，但在中性或弱酸性、弱堿性條件下釋放速度在后期略微降低。釋放度-時間-pH值三維圖能為制劑的質(zhì)量控制提供更全面、更廣泛的釋藥行為方面的依據(jù)，幫助評價、判斷產(chǎn)品質(zhì)量并為體內(nèi)生物利用度的預(yù)測提供依據(jù)。

圖8 pH值對藥物體外釋放的影響

3 討論

根據(jù)文獻(xiàn)報道，HPMC在高黏度范圍內(nèi)，黏度對難溶性藥物釋放有顯著的影響，而對水溶性藥物的釋放影響不大。本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明，隨HPMC黏度的增加，藥物的釋放變緩，藥物的釋放隨著HPMC黏度的不同而表現(xiàn)出不同的釋藥特征。骨架材料的用量是影響釋藥速率的重要因素，理論上講，HPMC用量增加，凝膠層厚度和強(qiáng)度增大，釋藥速率減慢［4］，本試驗(yàn)結(jié)果也證實(shí)了這一點(diǎn)。微晶纖維素為水不溶性物質(zhì)，但遇水易膨脹，在片劑中具有促進(jìn)和阻滯藥物釋放的雙重作用，對能抵制其膨脹性的骨架，它主要表現(xiàn)為阻塞水通道的阻滯釋放作用。由本研究的結(jié)果可以看出，微晶纖維素對藥物的釋放有較大的影響，導(dǎo)致藥物釋放緩慢，表明在此處方中，微晶纖維素作用是阻止水分滲入藥片、阻滯藥物釋放，因而藥物釋放速度減慢。

當(dāng)制片壓力很小時，可能會使片劑的骨架疏松，空隙率增大，水會迅速地進(jìn)入緩釋片，在片劑的表面形成很厚的水凝膠層，不利于藥物的釋放。藤甲酰苷在0.5%(w/v)十二烷基硫酸鈉水溶液中的溶解度相對較小，當(dāng)壓片壓力過小時，凝膠溶脹時藤甲酰苷停留在了凝膠層，從而阻礙了藥物的釋放;而壓力增加至一定值后，骨架緊密、孔隙率隨壓力改變變化不大，由于片厚降低，藥物在水凝膠層停留的時間減少，故釋放速度加快

［1］徐利鋒.藤黃酸苷衍生物和類似物及其制備方法和用途［P］.中國專利，101289482A，2008-10-22.

［2］Zong L，Chen LL，Zhang Y.Studies on nitrendipine sustained-release tablets and in vitro release se characteristics［J］.J China Pharm Univ，2004 ，35(6):503.

［3］中國藥典2010版.二部［S］.2010:附錄，87.

［4］顏耀東.緩釋控釋制劑的設(shè)計(jì)與開發(fā)［M］.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2006:68.