姚亞敏，沐 俊，孫 驥，馬 芳，盧洪洲，張麗軍(.上海市公共衛(wèi)生臨床中心，上海0508;.蘇州大學(xué)醫(yī)學(xué)部，江蘇蘇州53)

洛匹那韋(LPV，結(jié)構(gòu)式如圖1)是一種新的抗HIV的蛋白酶類抑制劑藥物，主要通過(guò)細(xì)胞色素P450 3A(CYP3A，主要是CYP3A4)得以快速代謝，與少量的利托那韋(RTV)組成一種復(fù)合制劑(克力芝)，利托那韋是CYP3A抑制劑，競(jìng)爭(zhēng)性抑制洛匹那韋的代謝，可以增強(qiáng)洛匹那韋的吸收利用，增強(qiáng)藥物治療效果［1］。最近的研究表明監(jiān)測(cè)洛匹那韋的血藥濃度與療效、毒副作用密切相關(guān);由于艾滋病患者常常進(jìn)行長(zhǎng)期的聯(lián)合用藥，藥物與藥物之間相互作用所導(dǎo)致的療效降低或者毒副作用增強(qiáng)成為臨床研究不容忽視的領(lǐng)域;此外，藥物代謝酶的個(gè)體差異所導(dǎo)致血藥濃度差異較大［2～4］。因而，準(zhǔn)確、簡(jiǎn)單易行的監(jiān)測(cè)抗病毒藥物洛匹那韋的血藥濃度具有非常重要的意義。本研究就洛匹那韋在各種生物體液中的濃度檢測(cè)方法，藥代動(dòng)力學(xué)研究進(jìn)展作一個(gè)系統(tǒng)性的綜述。

圖1 洛匹那韋的化學(xué)結(jié)構(gòu)

1 洛匹那韋濃度分析方法

1.1 生物樣品處理方法 文獻(xiàn)報(bào)道的樣品前處理方法有蛋白沉淀法［5］，液液萃取法［6～11］，固相萃取法［1～12］，干血點(diǎn)法［13］，以及蛋白沉淀聯(lián)合液液萃取提取法［14］。這5種方法各有優(yōu)缺點(diǎn)，蛋白沉淀法處理過(guò)程簡(jiǎn)單，成本低，但是樣品被稀釋，檢測(cè)限低，要求儀器具有足夠的靈敏度，而且蛋白沉淀法往往處理不干凈，會(huì)有蛋白進(jìn)入待分析的樣品中，污染儀器和色譜柱;液液萃取法萃取溶劑量大，容易造成環(huán)境污染，而且只適合于極性小的化合物的提取，其優(yōu)點(diǎn)是對(duì)脂溶性化合物提取效率高，樣品比較干凈;固相萃取法可以對(duì)樣品分離、純化和濃縮，與傳統(tǒng)的液液萃取法相比較可以提高分析物的回收率，更有效的將分析物與干擾組分分離，但是目前其成本比較高;干血點(diǎn)法(dried blood spot，DBS)，即將全血樣品收集在卡紙上，在血樣采集方法上比傳統(tǒng)方法有一定的優(yōu)勢(shì)。它需求較少的血量，可減少動(dòng)物和人的痛苦，方便血樣采集、存儲(chǔ)運(yùn)輸，簡(jiǎn)化樣品前處理，特別適用于采血體積較少的藥物實(shí)驗(yàn)的研究，其缺點(diǎn)是采集時(shí)血樣必須均勻，對(duì)點(diǎn)樣工具、點(diǎn)樣溫度、點(diǎn)樣體積要求比較高;蛋白沉淀聯(lián)合液液萃取提取法雖然提取的樣本比單獨(dú)的蛋白沉淀法要干凈，但是適用于脂溶性化合物，而且為兩步提取，操作復(fù)雜。筆者對(duì)洛匹那韋生物樣品的樣品處理過(guò)程做了一個(gè)整理，具體見(jiàn)表1。每個(gè)實(shí)驗(yàn)室可根據(jù)自身實(shí)驗(yàn)條件選擇合適的樣品處理方法。

表1 文獻(xiàn)報(bào)道的處理洛匹那韋樣品的方法

1.2 生物樣品的分析方法 生物樣品中的洛匹那韋大多以μg/ml或ng/ml濃度水平存在，其檢測(cè)不僅受同時(shí)存在的多種結(jié)構(gòu)相似的內(nèi)源性物質(zhì)干擾，還受和原型藥僅有微小差別的代謝物干擾，因此其檢測(cè)方法必須靈敏度高，專屬選擇性強(qiáng)。目前文獻(xiàn)報(bào)道的有高效液相色譜(HPLC)、液質(zhì)聯(lián)用法(LCMS/MS)等方法來(lái)分析檢測(cè)洛匹那韋的。高效液相色譜只能檢測(cè)在紫外可見(jiàn)光光譜內(nèi)有吸收的化合物，要求分析物與干擾的內(nèi)源性物質(zhì)必須達(dá)到完全分離，靈敏度不及液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀;液質(zhì)聯(lián)用法目前普遍采用多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(Multiple reaction monitor，MRM)，其原理是每個(gè)化合物有特定的母子離子對(duì)，對(duì)其進(jìn)行定量分析，專屬性好，靈敏度高。表2例舉了血漿、腦脊液、全血、超濾液、PBMC等生物樣本中洛匹那韋的線性檢測(cè)范圍，流動(dòng)相、色譜柱規(guī)格、檢測(cè)波長(zhǎng)、檢測(cè)離子對(duì)等詳細(xì)內(nèi)容，可以為分析研究者提供參考。

2 藥代動(dòng)力學(xué)研究進(jìn)展

洛匹那韋作為一個(gè)重要的一線蛋白酶類抑制藥物，在艾滋病的治療中扮演重要角色。為了更好的指導(dǎo)臨床用藥，近年來(lái)有較多的上市后再評(píng)估研究，包括藥物相互作用、不同劑量藥代動(dòng)力學(xué)、藥物濃度與藥物基因組學(xué)關(guān)系、時(shí)辰藥代動(dòng)力學(xué)、PK-PD、群體藥動(dòng)學(xué)等研究，獲得了一些具有臨床指導(dǎo)意義的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)(表3)。在藥物相互作用研究方面，Eric等研究了洛匹奈韋與奈韋拉平的相互作用，發(fā)現(xiàn)奈韋拉平能誘導(dǎo)洛匹那韋的代謝，增加其清除速度，降低其體內(nèi)濃度［3］。Jackson等從復(fù)方制劑中利托那韋(RTV)能提高洛匹那韋(LPV)的生物利用度角度出發(fā)，比較了克力芝 LPV/RTV 400/100 mg、200/150 mg、200/50 mg的藥代動(dòng)力學(xué)，發(fā)現(xiàn) LPV/RTV 200/150 mg可以與LPV/RTV 400/100 mg達(dá)到相同的生物利用度［18］。在PK-PD研究方面，Ann等人進(jìn)行洛匹那韋PK-PD研究，發(fā)現(xiàn)當(dāng)克力芝合用依非韋倫時(shí)LPV/RTV劑量為400/100 mg與不合用依非韋倫但LPV/RTV劑量為533/133 mg的PK-PD相當(dāng)，說(shuō)明依非韋倫可以提高洛匹那韋的生物利用度［19］。在藥物基因組學(xué)研究上，Matthias等研究了洛匹那韋藥物濃度與基因的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)在一部分CYP2B6超強(qiáng)代謝者LPV濃度偏低，治療失敗，究其原因是LPV主要通過(guò)CYP3A4代謝，而RTV能抑制3A4從而提高 LPV的濃度，但是 RTV又是通過(guò)CYP2B6代謝，CYP2B6超強(qiáng)代謝型能快速代謝RTV，從而導(dǎo)致體內(nèi)LPV的濃度降低，這部分人由于基因差異LPV達(dá)不到有效治療濃度從而治療失?。?］。另外Van等學(xué)者對(duì)洛匹那韋進(jìn)行了時(shí)辰藥代動(dòng)力學(xué)研究，發(fā)現(xiàn)無(wú)論是早上服藥還是下午服藥其藥代動(dòng)力學(xué)過(guò)程均無(wú)影響，食物也不會(huì)影響其在體內(nèi)的代謝過(guò)程［16］。Natella等則對(duì)LPV進(jìn)行了群體藥代動(dòng)力學(xué)研究，成功建立了PPK模型應(yīng)用于治療效果不佳的HIV患者療效的研究實(shí)現(xiàn)個(gè)體化用藥［20］。以上各種研究均為洛匹那韋的合理安全用藥提供了依據(jù)。

表2 文獻(xiàn)報(bào)道的檢測(cè)洛匹那韋的方法

表3 洛匹那韋藥動(dòng)學(xué)參數(shù)

3 結(jié)論

蛋白酶抑制劑洛匹那韋在AIDS的治療中扮演重要角色，其藥物濃度不足或過(guò)大均會(huì)影響療效或發(fā)生毒副作用。本文對(duì)近年來(lái)洛匹那韋生物樣品檢測(cè)方法及洛匹那韋的藥代動(dòng)力學(xué)研究進(jìn)行了全面的歸納總結(jié)。就樣品提取方法而言，液液萃取法以其能同時(shí)滿足提取效率高、成本低，內(nèi)源性物質(zhì)干擾小、操作簡(jiǎn)單易行等優(yōu)勢(shì)而被廣泛采用。對(duì)于定量分析方法，液質(zhì)聯(lián)用法(LC-MS/MS)由于具有較好的選擇性和定量準(zhǔn)確性。縱觀研究進(jìn)展，在相同的給藥劑量(400 mg，一天2次)下，各研究實(shí)驗(yàn)中tmax，Cmax，AUC，CL/F，V/F，Cssmin等參數(shù)都相近。當(dāng)劑量減為200 mg時(shí)，Cmax，AUC相應(yīng)變小(不成相應(yīng)比例)，但是tmax、半衰期不改變。這些藥動(dòng)學(xué)參數(shù)(半衰期、達(dá)峰時(shí)間、峰濃度和谷濃度)為L(zhǎng)PV的合理使用提供了理論基礎(chǔ)。

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