喻茂杰 趙衍江 劉甲辰 劉曉華

ANA、抗DNP抗體及抗ENA譜聯(lián)合檢測對SLE診斷價值與臨床意義

喻茂杰①趙衍江①劉甲辰①劉曉華①

目的：探討系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）患者ANA、抗DNP、抗ENA譜聯(lián)合檢測的應用與臨床意義。方法：對100例SLE患者及80例同期就診的其他結締組織疾病患者進行ANA、抗DNP抗體、抗ds-DNA抗體及抗ENA抗體的檢測。同時對ANA檢測的兩種不同方法及傳統(tǒng)的LE細胞檢測法與抗DNP抗體檢測法進行了對比。結果：采用這四種檢測方法聯(lián)合檢測在SLE診斷中具有互補作用，可提高SLE的檢出率。快速IFA法檢測ANA優(yōu)于ELISA法，抗DNP抗體檢測優(yōu)于LE細胞法。結論：快速IFA法檢測ANA與抗DNP抗體的檢測均為目前診斷SLE患者的先進且實用的方法，值得推廣應用。

系統(tǒng)性紅斑狼瘡； 抗核抗體； 抗雙鏈DNA（ds-DNA）抗體； 抗-組蛋白復合物（DNP）抗體； 可提取核抗原（ENA）抗體； 檢測分析

系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）是一種多系統(tǒng)受累的自身免疫性疾病，伴有多種自身抗體。由于以往檢測方法的局限及檢測試劑的抗原相對不全，對自身抗體檢出率及對SLE診斷和預后判斷都造成一定困難。近年來本院采用四種檢測方法聯(lián)合檢測在SLE診斷中具有互補作用，可提高SLE的檢出率，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 SLE患者100例，其中男24例，女76例。年齡12～75歲。全部病例均系2009年1月-2011年12月本院住院及門診患者?；颊咴\斷符合美國風濕病學會1922年修訂標準，設為SLE組。對照組80例中男26例，女54例，年齡20～60歲。其中類風濕（RA）36例，干燥綜合征（SS）12例，硬皮病（PSS）4例，皮肌炎（DM）4例，其他未定型結締組織?。–TD）24例。靜脈采血，血清凍存待檢或新鮮檢測。

1.2 試劑與方法

1.2.1 ELISA法ANA檢測 試劑盒由美國Hope公司生產。利用純化核抗原包被反應孔。

1.2.2 快速IFA法ANA檢測 試劑盒由德國歐蒙實驗免疫制品有限公司生產。該試劑盒將靈長類猴肝組織和Hep-2細胞制成超微薄片，固定在同一抗原基質區(qū)，對同一份標本進行平行測定。

1.2.3 抗ENA抗體檢測 試劑由德國歐蒙實驗免疫制品有限公司生產。用經親和層析純化的天然抗原（Sm，UI-RNP/Sm，SS-A，SS-B，Scl-70，Jo-1）包被于反應膜條上。方法為免疫斑點法。

1.2.4 抗DNP抗體檢測 試劑盒由英國OMEGA公司生產。方法為膠乳凝集法。

1.2.5 LE細胞檢測 采用改良血塊法。

1.2.6 抗ds-DNA抗體檢測 試劑盒由福州藍波公司生產。方法為金標免疫斑點法。

1.3 操作嚴格按照試劑說明書操作。

2 結果

2.1 SLE組與對照組ANA、抗DNP抗體、抗ds-DNA抗體陽性檢出率見表1。SLE組ANA、抗DNP抗體、抗ds-DNA抗體與對照組陽性率差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.01）。而ANA的兩種檢測方法SLE組與對照組陽性率比較，100例SLE患者中均陽性90例；快速IFA法陽性，而ELISA陰性者2例。80例對照組中均陽性者40例；均陰性40例；快速IFA法陰性，ELISA陽性者4例。經配對檢驗，差異無統(tǒng)計學意義（=0.5，P>0.05）。

表1 SLE組與對照組ANA、抗DNP抗體、抗ds-DNA抗體陽性檢出率 例（%）

2.2 SLE組與對照組抗ENA抗體陽性檢出率見表2。SLE組抗Sm，抗RNP/Sm抗體與對照組陽性率比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01），而抗SS-A，抗SS-B，抗Scl-70及抗Jo-l抗體兩組比較差異均無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。

表2 SLE組與對照組抗ENA抗體陽性檢出率 例（%）

2.3 LE細胞和抗DNP抗體測定陽性例數(shù)和百分率見表3。

表3 LE細胞與抗 DNP抗體檢測結果 例（%）

3 討論

隨著免疫學檢驗的發(fā)展對SLE的研究進一步深入。在患者血清中陸續(xù)發(fā)現(xiàn)多種自身抗體。以抗DNP抗體、抗ds-DNA抗體及抗Sm抗體為主。據本文統(tǒng)計，其陽性率分別為80%、64%、68%。ANA陽性率為92%。ANA檢測中有4例陰性，而抗ENA抗體陽性。2例ANA陰性，而抗DNP抗體陽性。原因可能與這些患者處于非活動期或已經治療，ANA度下降有關。故快速IFA法及ELISA法檢測ANA陰性時，不能排除自身抗體的存在。因此，ANA陰性時不能否認SLE的診斷[1-2]。通過ELISA法與快速IFA法對ANA同時檢測，統(tǒng)計學結果表明，兩者具有較好的符合率（92.2%）。ELISA法由于其操作簡便較適合于大批量標本檢測。但由于細胞內多種抗原成分人工復制較困難，且受到細胞靶抗原的抗原性濃度、結構等方面的制約。相對而言，快速IFA法因其快速、可靠、重復性好、便于標準化和質控等優(yōu)點，日益成為ANA檢測的“金標準”。運用快速IFA檢測ANA，有兩種抗原基質同時檢測，核型更為清楚，且可測定抗體滴度。從而為臨床診斷提供更詳細的信息[3-4]。從表1中可見，對照組中ANA陽性率也較高。故ANA在SLE患者中敏感度雖很高，特異性卻不高。袁學蓉等[5-6]提出對ANA陽性患者應進一步查抗ds-DNA、抗Sm抗體等。

抗ds-DNA是SLE的特異性抗體。本文SLE組陽性率為64%，對照組為10%。據報道抗ds-DNA與疾病的活動性有關。活動期SLE患者陽性率一般在80%以上。本組SLE患者陽性率偏低，可能與試驗方法及部分患者處于非活動期有關。本組患者中，有4例處于活動期的患者查不出抗ds-DNA抗體，可能是血清中有過多游離DNA抗原與相應的DNA抗體結合的緣故。因此，抗ds-DNA陰性不能排除SLE的存在[7]。另外，SLE患者出現(xiàn)此抗體常提示有腎臟損害。本組SLE患者抗ds-DNA抗體陽性64例，其中伴狼瘡腎炎（LN）38例。表1資料中對照組8例陽性。其中RA 3例，DM 1例，均為SLE重疊綜合征患者。

在抗ENA抗體中，抗Sm抗體被認為是SLE的標志抗體，且與病程無關。對早期、不典型的SLE或經治療后回顧性診斷有極大幫助[8-9]。表2資料中，抗Sm抗體陽性率68%，抗UI-RNP/Sm抗體陽性率42%，與對照組比較差異有統(tǒng)計學意義。抗UI-RNP抗體是混合性結締組織病的特征指標，但在SLE中有約40%陽性率且常伴有抗Sm抗體陽性。分子生物學研究表明，Sm與UI-RNP是同一分子復合物中不同的抗原位點，兩者具有關聯(lián)性[10]。歐蒙公司將Sm與UIRNP包被于同一膜條上，進一步提高了陽性檢出率。同時，本文資料顯示抗SS-A、抗SS-B、抗Jo-l、抗Scl-70抗體與SLE及其他自身免疫性疾病無鑒別診斷意義。

抗DNP抗體（也稱LE因子）是IgG類的抗脫氧核糖核蛋白抗體。它是一種與SLE密切相關的抗體。80%以上的SLE患者可檢出此抗體。相對于干擾因素多且陽性率低的傳統(tǒng)的LE細胞檢查，抗DNP抗體檢測快速、簡便、特異性高，直接檢測形成LE細胞的LE因子。在1994年美國臨床病理學家協(xié)會（ASCP）已明確提出LE細胞是一項已過時廢棄的試驗，應被更確定性的免疫學方法取代。表3資料也顯示，抗DNP抗體陽性檢出率顯著高于LE細胞法。LE細胞法在本文對照組檢測中有5%陽性率，提示LE細胞法檢測有假陽性存在。另據報道服用腆苯噠嗓，甲基多巴等患者可找到LE細胞?？梢娍笵NP抗體的檢測以其特異性和可靠性己成為可取代LE細胞法的試驗。

由上述統(tǒng)計學數(shù)據可知，用單一方法檢測ANA陽性率為92%，其余三項試驗陽性率為62%～84%。而用四種方法聯(lián)合檢測陽性率可達96%。綜上所述，四種方法聯(lián)合檢測有明顯互補性，排除了干擾因素，提高了SLE的診斷率，又有助于與其他伴有ANA陽性的自身免疫性疾病相鑒別。經本文試驗統(tǒng)計證實，快速IFA法檢測ANA與抗DNP抗體的檢測均為目前診斷SLE患者較先進且實用的方法，值得推廣應用。

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10.3969/j.issn.1674-4985.2012.34.058

①中國醫(yī)科大學遼陽中心醫(yī)院 遼寧 遼陽 111000

喻茂杰

2012-08-07） （本文編輯：連勝利）