周洪合 張小平

HPLC法測定健脾化瘀片中黃芪甲苷的含量

周洪合①張小平②

目的：建立高效液相色譜法（HPLC）測定健脾化瘀片中黃芪甲苷的含量。方法：采用高效液相色譜法，十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱，流動相：乙腈-水（35:65）；蒸發(fā)光檢測器檢測。結(jié)果：在1.00~10.05 μg范圍內(nèi)黃芪甲苷峰面積與進(jìn)樣量線性關(guān)系良好，r=0.9997；樣品加樣回收率為99.67%（n=6）。RSD為0.43。結(jié)論：所建立的方法準(zhǔn)確可行，重復(fù)性好，可有效控制健脾化瘀片的質(zhì)量。

健脾化瘀片； 黃芪甲苷； 高效液相色譜法

健脾化瘀片是由人參、黃芪、地黃、玄參、制何首烏、鬼箭羽、天花粉等中藥經(jīng)加工而制成的中藥制劑，具有健脾益氣、滋腎活血、化瘀清熱功能，用于糖尿病、高粘、高脂血癥等[1-3]。為控制本制劑的質(zhì)量，實(shí)驗(yàn)以黃芪甲苷為指標(biāo)，用高效液相色譜法測定其黃芪的含量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent1100series高效液相色譜儀；Alltech2000型蒸發(fā)光散射檢測器；SL-250超聲波清洗器（220V/50HZ）；AUV120D電子分析天平。

1.2 試藥 高效液相色譜用試劑均為色譜純；對照品由中國藥品生物制品檢定所提供。健脾化瘀片為自制，批號：20120309、20120312、20120315。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱（KromosiIC18，150×4.6 mm 5μm）。流動相：乙腈-水（35∶65）；理論塔板數(shù)以黃芪甲苷計算應(yīng)不低于4000；蒸發(fā)光檢測器檢測：漂移管溫度103 ℃，載氣為氮?dú)猓髁繛?.3 L/min。

2.2 對照品溶液的制備 精密稱取黃芪甲苷對照品適量，加甲醇制成每1 ml含0.5 mg的溶液，作為對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備 取樣品1 g，研細(xì)，精密稱定，置索氏提取器中，加入甲醇適量，加熱回流提取5 h，提取液回收甲醇至干，殘渣加水30 ml使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取4次，每次30 ml，合并正丁醇提取液，用氨試液洗滌4次，每次30 ml，分取正丁醇液，蒸干，殘渣用甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至5 ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得[4]。

2.4 陰性對照溶液的制備 取按處方量及制法工藝，同法制成全方缺黃芪的陰性對照，按樣品供試液的制備方法制備，作為陰性對照溶液。

2.5 空白對照實(shí)驗(yàn) 分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液各10 μl注入液相色譜儀，按上述色譜條件進(jìn)行分析，記錄色譜圖，黃芪甲苷與其他組分完全分離，陰性對照溶液圖譜在黃芪甲苷峰位置處無吸收峰，符合測定要求。見圖1、圖2、圖3。

圖1 黃芪甲苷對照品色譜圖

圖2 健脾化瘀片樣品色譜圖

圖3 缺黃芪陰性樣品色譜圖

2.6 線性關(guān)系考察 精密稱定80 ℃減壓干燥至恒重的黃芪甲苷對照品10.05 mg，置10 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，分別精密吸取上述溶液1.0、2.0、4.0、6.0、10.0 ml，置10 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，各精密吸取10 μl進(jìn)樣，注入液相色譜儀中，按上述色譜條件分別測定其峰面積，以峰面積為縱坐標(biāo)（Y），以黃芪甲苷進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)（X），進(jìn)行線性回歸，其回歸方程為：Y=919312 X-462607，r=0.9997（n=5）；結(jié)果表明黃芪甲苷在1.00~10.05 μg范圍內(nèi)進(jìn)樣量與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.7 精密度試驗(yàn) 每次精密吸取黃芪甲苷對照品溶液10 μl，共5次，進(jìn)樣，計算測得峰面積，RSD＝0.39%，證明儀器有良好的精密度[5]。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取同一供試品溶液，分別在0、2、4、6、8、10、12、24 h進(jìn)樣，測定樣品中黃芪甲苷含量，RSD為0.42%，證明樣品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.9 重復(fù)性試驗(yàn) 取5份樣品（為同一批號）按“2.3”方法操作，進(jìn)樣，記錄峰面積，結(jié)果黃芪甲苷RSD=1.086%，表明具良好的重復(fù)性[6]。

2.10 回收率試驗(yàn) 采用加樣回收法，取樣品6份（同一批號），精密稱定，分別加入黃芪甲苷一定量，按“2.3”方法操作，進(jìn)樣，記錄峰面積，計算回收率。結(jié)果見表1。

表1 樣品加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.11 樣品的測定 取樣品3批，按“2.3”方法操作，與對照品溶液分別進(jìn)樣，記錄峰面積（n=5），并對樣品中黃芪甲苷含量進(jìn)行計算，結(jié)果見表2。

表2 樣品中黃芪甲苷含量

3 討論

本文參考《中國藥典》2010版一部中黃芪的含量測定方法測定健脾化瘀片中黃芪的含量，測定方法重復(fù)性好，結(jié)果可靠、準(zhǔn)確，且操作簡便，可有效控制該制劑的質(zhì)量。

[1] 國家藥典委員會.中國藥典（一部）[S].北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010：283.

[2] 朱克旭，李永宏，劉冰冰.HPLC-ELSD法測定芪心合劑中黃芪甲苷的含量[J].安徽醫(yī)藥，2011，15（11）:1364.

[3] 涂興明，余賜恩，吳康郁.高效液相色譜-蒸發(fā)光散射法測定傷骨健膠囊中黃芪甲苷的含量[J].中藥材，2010，33（6）：999

[4] 姚琰，宋金春.HPLC-ELSD法測定復(fù)方黃芪心通顆粒中黃芪甲苷的含量[J].中國藥師，2009，12（12）：1768

[5] 譚春梅，張文婷，趙維良.高效液相色譜-蒸發(fā)光散射法測定歸脾丸中黃芪甲苷的含量[J].中國藥業(yè)，2009，18（19）：31

[6] 王鵬，趙承孝，李青山，張淑秋.高效液相色譜-蒸發(fā)光散射測定蒙古黃中黃芪甲苷的含量及其提取工藝的優(yōu)化[J].中國藥物與臨床，2010，10（2）：134

Determinasion of Astragaloside in Jianpihuayu Tablets by HPLC

ZHOU Hong-he，ZHANG Xiao-ping.

Objictive：To establish a method tk deternation of astragaloside in Jianpihuayu Tablets by HPLC.Method：High performance liquid chromatography.Octadecyl silane bonded silica gel chromatography column.Mobile phase:acetonitrile-water（35:65）;Evaporation light spread detector.Result：Astragalus A glycoside peak area and injection volume was 1.00~10.05 μg range a good linear relationship and correlateion coefficient was 0.9997.The average recorery of the added sample was 99.67%（n=6），RSD was 0.43%.Conclusion：The method is stable，accurate and precise for the quality control of Jianpihuayu Tablets.

Jianpihuayu Tablets; Astragaloside; HPLC

The Third People’s Hospital of Jinan City，Jinan 250101，China

Medical Innovation of China，2012，9（34）:156-157

10.3969/j.issn.1674-4985.2012.34.104

①濟(jì)南市第三人民醫(yī)院 山東 濟(jì)南 250101

②濟(jì)南市中醫(yī)醫(yī)院

2012-09-13） （本文編輯：連勝利）