張靜 裴毅

LGT不同表達(dá)對(duì)結(jié)直腸癌術(shù)后FOLFOX方案鞏固化療的遠(yuǎn)期生存的分析

張靜①②裴毅①

目的：探討LGT不同表達(dá)對(duì)結(jié)直腸腺癌患者手術(shù)后應(yīng)用FOLFOX方案鞏固治療后遠(yuǎn)期生存的影響。方法：選取2006年1月-2009年1月首次入院并行手術(shù)治療的結(jié)直腸腺癌患者55例，手術(shù)前行SELDI檢測(cè)，留取指紋圖。術(shù)后給予標(biāo)準(zhǔn)FOLFOX方案鞏固化療4～6周期。隨訪至2011年8月。觀察2010年至今，不同年齡、性別，LGT表達(dá)與否條件下，無疾病進(jìn)展生存期和中位生存期兩組的差異。結(jié)果：年齡以65歲分組，兩者在無疾病進(jìn)展生存期和中位生存期上比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(7.85：6.50，P=0.770；15.75：13.00，P=0.517)。按性別分組，男女在無疾病進(jìn)展生存期和中位生存期上比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(8.50：4.95，P=0.152；17.00：10.00，P=0.203)。LGT陽性者，無疾病進(jìn)展中位生存期為2.8個(gè)月，LGT陰性者，無疾病進(jìn)展中位生存期為10個(gè)月，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000)。LGT陽性者，中位生存期為5.85個(gè)月，LGT陰性者，中位生存期為18.5個(gè)月，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000)。結(jié)論：手術(shù)前LGT表達(dá)組無疾病進(jìn)展及中位生存期遠(yuǎn)低于LGT陰性組。建議手術(shù)前如LGT為陽性表達(dá)，首先控制LGT，待LGT表達(dá)正常后再行手術(shù)，以確保治療后效果。

結(jié)直腸癌； 鞏固化療； 危重病人預(yù)警蛋白質(zhì)； 預(yù)后

結(jié)直腸癌是最常見的消化道惡性腫瘤，發(fā)生率僅次于胃癌和食管癌，在我國常見惡性腫瘤死亡中，結(jié)直腸癌患者在男性占第五位，女性占第六位。近20年來，結(jié)直腸癌的發(fā)病率在逐漸增加，同時(shí)，其發(fā)病年齡趨向老齡化。結(jié)直腸癌術(shù)后5～10年生存率，化療作為根治術(shù)的診時(shí)有25%的患者已經(jīng)存在轉(zhuǎn)移病變，根治術(shù)后50%的患者會(huì)發(fā)生復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移，因此絕大多數(shù)結(jié)直腸癌患者需要化學(xué)治療。多年來的臨床研究表明，根治術(shù)后輔助化療可明顯改善結(jié)直腸癌的生活質(zhì)量和存活。根據(jù)NCCN輔助治療有一定價(jià)值。根據(jù)NCCN指南，結(jié)直腸癌輔助化療首選FOLFOX方案。

影響結(jié)直腸癌患者預(yù)后的因素很多，涉及到臨床、病理特點(diǎn)、各系統(tǒng)的綜合作用等。確定有效的預(yù)后參數(shù)，能正確估計(jì)預(yù)后，有助于治療方案的制定[1]。本研究分析了55例經(jīng)手術(shù)治療，術(shù)后輔以FOLFOX方案鞏固化療的結(jié)直腸癌患者，分析LGT不同表達(dá)對(duì)其鞏固治療后遠(yuǎn)期生存的影響?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取本科2006年1月-2009年1月收治的首次入院，入院時(shí)均進(jìn)行危重病人預(yù)警蛋白(LGT)檢測(cè)，并行手術(shù)治療的結(jié)直腸腺癌患者55例，術(shù)后均進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)FOLFOX方案鞏固化療(奧沙利鉑85 mg/m2，d1；亞葉酸鈣200 mg/m2，d1、d2；氟尿嘧啶400 mg/m2，靜推，d1、d2，600 mg/m2，持續(xù)靜脈泵入22 h，d1、d2；每?jī)芍苤貜?fù))4～6周期。其中男35例，女20例，中位年齡62歲，入組時(shí)均經(jīng)病理學(xué)診斷證實(shí)，且排除影響血清蛋白質(zhì)水平的疾病。以該患者就診時(shí)間(入組時(shí)間)為生存時(shí)間起點(diǎn)，在2011年8月30日前對(duì)上述患者疾病狀態(tài)(進(jìn)展與否)及生存狀態(tài)(死亡與否)通過查閱病歷、電話隨訪的方式獲得。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法 分組：(1)年齡以65歲分組；(2)性別以男女分組；(3)以LGT表達(dá)表達(dá)與否分組。

實(shí)驗(yàn)設(shè)備：PBS-Ⅱc表面增強(qiáng)飛行時(shí)間質(zhì)譜儀(SELDITOF-MS)、能量吸收分子EMA，CM10型蛋白質(zhì)芯片及相應(yīng)分析軟件ProteinChip 3.2.0、Biomarker Wizard (美國Ciphergen公司)，HFPFS緩沖鹽(Sigma公司)，CHAPS緩沖鹽(Sigma公司)。

實(shí)驗(yàn)步驟：(1)血清樣本處理：血清標(biāo)本冰浴解凍，10 000 r/min離心2 min。取血清樣品5 μl，加10 μl 9 M尿素。振蕩30 min，加180 μl緩沖液稀釋(100 mmol/L NaOAc pH 4.0)，4 ℃ 10 000 r/min離心2 min，取上清液待用。(2) 芯片處理：將芯片放入盛有100 mmol/L鹽酸的試管中，振蕩4～5 min，HPLC水沖洗，將芯片安裝到Bioprocessor上，每孔加200 μl結(jié)合緩沖液，室溫振蕩5 min，棄掉液體，重復(fù)一次。每孔上樣100 μl已處理好的血清樣品，室溫振蕩1 h。棄掉液體，用200 μl結(jié)合緩沖液(100 mmol/L NaOAc pH4.0)洗2次，每次5 min，拆下芯片，待芯片自然干燥，然后每點(diǎn)加SPA 0.5 μl ， 兩次。干燥，用CM10蛋白芯片閱讀儀讀芯片。 SPA=Sinapinic acid為CAN(乙腈)50 %和TFA(三氟乙酸)0.5 %的飽和溶液。(3)數(shù)據(jù)收集：設(shè)定檢樣激光強(qiáng)度195，檢測(cè)靈敏度8，收集數(shù)據(jù)質(zhì)荷比(M/Z)范圍1.0～2.0 KD。收集位置20～80。平均每點(diǎn)收集20次，收集總點(diǎn)數(shù)是140次。在每次實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)收集前，用All-in-one蛋白芯片校正儀器，使之誤差<0.1 %。以質(zhì)量控制蛋白質(zhì)芯片做重復(fù)性檢測(cè)，其峰值的大小及其強(qiáng)度的變異系數(shù)(CVS)均控制在0.05 %和15 %以下，具有良好的重復(fù)性。

危重病人預(yù)警蛋白(LGT)檢測(cè)：即SELDI檢測(cè)方法(全稱是[SELDI-TOF-MS]，即表面增強(qiáng)激光解析離子飛行時(shí)間(time of flight)質(zhì)譜技術(shù))。出現(xiàn)在質(zhì)核比(M/Z)11 000+H至12 000+H之間的蛋白質(zhì)指紋即為L(zhǎng)GT指紋，以出現(xiàn)單峰或以上質(zhì)譜峰簇(cluster)且豐度值≥5%為L(zhǎng)GT陽性[2]。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 觀察無疾病進(jìn)展生存期的中位生存期。所有數(shù)據(jù)均采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理。統(tǒng)計(jì)學(xué)方法選擇Kaplan-Meier法。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 影響術(shù)后結(jié)直腸癌患者無疾病進(jìn)展生存時(shí)間的單因素分析見表1。

表1 影響術(shù)后結(jié)直腸癌患者無疾病進(jìn)展生存時(shí)間的單因素分析

從表中可以看出，LGT陽性患者無疾病進(jìn)展生存時(shí)間僅為2.80個(gè)月，而LGT陰性患者的無疾病進(jìn)展生存時(shí)間為10.00個(gè)月，其無疾病進(jìn)展生存時(shí)間曲線如圖1。

圖1 不同LGT表達(dá)無疾病進(jìn)展生存時(shí)間曲線圖

結(jié)腸癌與直腸癌患者的中位無疾病進(jìn)展生存時(shí)間分別為7.2個(gè)月和6個(gè)月；男性和女性結(jié)直腸癌患者的中位無疾病進(jìn)展生存時(shí)間分別為8.50個(gè)月和4.95個(gè)月；<65歲與≥65歲結(jié)直腸癌患者的中位無疾病進(jìn)展生存時(shí)間分別為7.85個(gè)月和6.50個(gè)月，以上各組比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

手術(shù)前LGT為陽性者中位無疾病進(jìn)展生存時(shí)間為2.8個(gè)月，陰性者為10個(gè)月(字2=14.205，P<0.01)，說明LGT陽性與陰性術(shù)后結(jié)直腸癌患者無疾病進(jìn)展生存時(shí)間不同。

2.2 影響術(shù)后結(jié)直腸癌患者生存期的單因素分析見表2。

表2 影響術(shù)后結(jié)直腸癌患者生存期的單因素分析

結(jié)腸癌與直腸癌患者的中位生存時(shí)間分別為14.5個(gè)月和12個(gè)月；男性和女性結(jié)直腸癌患者的中位生存時(shí)間分別為17個(gè)月和10個(gè)月；<65歲與≥65歲結(jié)直腸癌患者的中位生存時(shí)間分別為15.75個(gè)月和13個(gè)月，以上各組比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

LGT為陽性者中位生存時(shí)間為5.85個(gè)月，陰性者為18.50個(gè)月(見圖2)，LGT陽性與陰性術(shù)后結(jié)直腸癌患者生存期不同(字2=14.287，P<0.05)。

圖2 不同LGT表達(dá)結(jié)直腸癌患者的生存曲線圖

3 討論

LGT(危重病人預(yù)警蛋白質(zhì)組指紋)是筆者于2005從一組瀕臨死亡的晚期腫瘤患者的血清中捕獲到的一組促進(jìn)腫瘤患者病情惡化的異常蛋白質(zhì)組，其指紋標(biāo)志是：m/z：11 100+H～11 900+H，豐度>10%，后經(jīng)過數(shù)年的臨床觀察，發(fā)現(xiàn)“LGT”的確可作為預(yù)示腫瘤進(jìn)展的重要指標(biāo)，且LGT蛋白質(zhì)組指紋的出現(xiàn)與死亡有明顯的相關(guān)性[3-4]。

大家對(duì)結(jié)直腸癌輔助化療的有效性才達(dá)成共識(shí)。十多年來，眾多學(xué)者致力于結(jié)直腸癌輔助化療的新藥開發(fā)和新方案設(shè)計(jì)，并開展了一系列大規(guī)模臨床研究，結(jié)直腸癌輔助化療目前FOLFOX4方案為結(jié)直腸癌的標(biāo)準(zhǔn)輔助化療方案[5-6]。本研究比較分析了LGT不同表達(dá)對(duì)結(jié)直腸癌術(shù)后FOLFOX方案鞏固化療后中位生存和無疾病生存的差異。表1從性別、年齡和治療前是否存在LGT表達(dá)對(duì)無疾病進(jìn)展生存期進(jìn)行比較分析，結(jié)果表明：性別和年齡對(duì)無疾病進(jìn)展生存期沒有影響，而LGT表達(dá)與否，其無疾病進(jìn)展生存期有顯著差異。LGT表達(dá)陽性患者，手術(shù)和FOLFOX方案標(biāo)準(zhǔn)化療后，無疾病進(jìn)展生存期遠(yuǎn)低于LGT表達(dá)陰性患者。表2選用上述三個(gè)因素，對(duì)中位生存期進(jìn)行比較分析，結(jié)果表明：年齡、性別與中位生存期無關(guān)，LGT表達(dá)陽性患者，中位生存期明顯較LGT表達(dá)陰性患者低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

綜上所述，LGT做預(yù)后的判斷，有較明確的臨床意義。手術(shù)前LGT表達(dá)陽性者，無論術(shù)后是否進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化療，其無疾病進(jìn)展生存期的中位生存期均低于LGT表達(dá)陰性者。因此，手術(shù)前行LGT檢測(cè)是必要的，而且建議：手術(shù)前對(duì)LGT表達(dá)陽性的患者行LGT消除治療，以確保術(shù)后有較長(zhǎng)的生存時(shí)間和生存質(zhì)量。

[1] Enblad P， Adami H O， Bergstrom R. Improved survival of patients with cancer of the colon and rectum[J]. Natl Cancer Inst， 1988，80(16): 586-590.

[2] 裴毅， 郭素堂， 王清馨， 等. 一組新發(fā)現(xiàn)的腫瘤功能性蛋白質(zhì)組的指紋圖譜[J]. 腫瘤研究與臨床， 2005， 17(3): 153-155.

[3] Buyse M， Zeleniuch J A， Chalmers T C.Adjuvant therapy of colorectal eancer: Why we still don’t know[J]. JAMA，1988，259(89): 3571.

[4] 裴毅， 郭素堂， 王清馨， 等. LGT蛋白質(zhì)組對(duì)腫瘤患者臨床意義的首次觀察[J]. 腫瘤研究與臨床， 2005， 17(3): 156-158.

[5] Zahid H S. Cisplatin: mode of cytotoxic action and molecular basis of resistance[J]. Oncogene， 2003， 22(47): 7265-7279.

[6] 王麗娜， 李邦華， 魏春燕， 等. ERCC1表達(dá)與Ⅱ、Ⅲ期結(jié)腸癌術(shù)后輔助化療預(yù)后的關(guān)系[J]. 實(shí)用臨床醫(yī)學(xué)， 2010， 11(4): 4-6.

Analysis of LGT Different Expression and Long-term Survival Using FOLFOX Chemotherapy after Colorectal Cancer Surgery

ZHANG Jing，PEI Yi.

Objective: To study the different expression of LGT and Long-term survival of FOLFOX chemotherapy after colorectal cancer surgery. Method: Choose 55 patients use surgical treatment of parallel colorectal，between January 2006 to January 2009.All the patient detect SELDI to get the map of fingerprint ，use four to six cycles of FOLFOX chemotherapy，follow-up to August 2011. A different age， gender， LGT express or not， under the conditions of disease progression of survival and without a median of two groups of the differences. Result:In the absence of survival and disease progression median survival were no significant difference (7.85， 6.50，P=0.770;15.75:13.00，P=0.517)between ≥65 years old group and< 65 years old group;There is no significant difference among the men and women group (8.50，4.95，P=2.057;17.00:10.00，P=1.622).No disease progress for a median is 2.8 months in LGT positive patient， 10 months in LGT negative patient(P=0.000).Progress for a median is 5.85 months in LGT positive patient， 18.5 months in LGT negative patient(P=0.000).Conclusion:Both the no disease progress for a median and progress for a median in LGT positive group is far lower than the LGT negative group.Before the operation such as LGT positive for express， first control LGT， LGT expression to normal after poste operation， to ensure that the treatment effect.

Colorectal cancer; Consolidate chemotherapy; LGT; Prognosis

Shanxi Medical University，Taiyuan 030001，China

Medical Innovation of China，2012，9(23):006-008

10.3969/j.issn.1674-4985.2012.23.003

①山西醫(yī)科大學(xué) 山西 太原 030001

②山西省腫瘤醫(yī)院

裴毅

2012-04-16) (本文編輯：陳丹云)