陳 丹 李 柯 胡薏冰 史蕾喆 李若存

1.湖南湘潭職業(yè)技術(shù)學(xué)院藥學(xué)教研組，湖南湘潭411102;2.湖南省中醫(yī)藥研究院;湖南長沙410013;3.中藥新藥研究與開發(fā)湖南省重點實驗室，湖南長沙410013

高效液相色譜法測定顯脈旋覆花藥材中麝香草酚和異丁酸百里香酯的含量

陳 丹1李 柯2，3胡薏冰2，3史蕾喆2，3李若存2，3

1.湖南湘潭職業(yè)技術(shù)學(xué)院藥學(xué)教研組，湖南湘潭411102;2.湖南省中醫(yī)藥研究院;湖南長沙410013;3.中藥新藥研究與開發(fā)湖南省重點實驗室，湖南長沙410013

目的:建立顯脈旋覆花藥材中麝香草酚和異丁酸百里香酯的含量測定方法。方法:采用高效液相色譜法，95%乙醇回流提取。色譜柱C18(Column 200×4.6mm，5μ)，流動相:乙腈－水 (65:35)，檢測波長220nm。結(jié)果:麝香草酚在0.224～1.344μg范圍呈良好的線性關(guān)系，r=0.9998;異丁酸百里香酯在0.132～0.792μg范圍呈良好的線性關(guān)系，r=0.9996;平均回收率:麝香草酚97.94%，RSD為1.28%;異丁酸百里香酯99.09%，RSD為1.34%。重復(fù)性試驗的RSD分別為麝香草酚1.0%、異丁酸百里香酯1.0%。結(jié)論:該方法可靠、便捷，可以作為控制顯脈旋覆花藥材質(zhì)量的方法。

顯脈旋覆花;云威靈;毛秀才;麝香草酚;異丁酸百里香酯;高效液相色譜法;含量測定

1 儀器、試劑與藥材

Perkin Elmer高效液相色譜儀 (美國PE公司);C18(Column 200×4.6mm，5μ)色譜柱 (大連依利特分析儀器有限公司);EC2006色譜數(shù)據(jù)處理系統(tǒng) (大連依利特分析儀器有限公司)。UV－2450型紫外可見分光光度計 (日本島津)。麝香草酚購于中國藥品生物制品檢定研究院，批號:100508－200902，異丁酸百里香酯自制，GC含量測定純度達(dá)到98%以上。甲醇、乙腈 (色譜純試劑，天津科密歐化學(xué)試劑有限公司)，水為重蒸餾水，其它試劑均為分析純 (均為湖南匯虹試劑有限公司提供)。藥材購自云南鴻翔藥業(yè)有限公司，經(jīng)湖南省中醫(yī)藥研究院中藥研究所生藥研究室鑒定為菊科植物顯脈旋覆花Inula nervosa Wall的干燥根及根莖。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以乙腈－水 (65∶35)為流動相;檢測波長為220nm。理論板數(shù)按麝香草酚峰計不低于10000。

2.2 對照品溶液的制備 精密稱取麝香草酚對照品11.2mg、異丁酸百里香酯對照品6.6mg，置100ml量瓶中，加95%乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3 供試品溶液的制備 取本品粉末 (過三號篩)約1.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入95%乙醇25ml，密塞，稱定重量，加熱回流30分鐘，放冷，再稱定重量，用95%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4 線性關(guān)系考察 精密吸取對照品混合溶液 (麝香草酚C=0.112mg/ml、異丁酸百里香酯C=0.066mg/ml)2、4、6、8、10、12μl進(jìn)樣，測定其峰面積。以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，其回歸方程:麝香草酚Y=2335.9x+17.575，r=0.9998;異丁酸百里香酯Y=1480.3x+6.5107，r=0.9996。結(jié)果表明麝香草酚在0.224～1.344μg，異丁酸百里香酯在0.132～0.792μg范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗 取顯脈旋覆花藥材按供試品溶液的制備方法制成供試品溶液。精密吸取10μl，連續(xù)進(jìn)樣6次，測定其峰面積，計算麝香草酚和異丁酸百里香酯峰面積RSD分別為0.7%和2.2%。

2.6 穩(wěn)定性試驗 取2.5項下的供試品溶液，精密吸取10μl，于0、4、8、12、24小時進(jìn)樣，測定其峰面積。計算，麝香草酚與異丁酸百里香酯RSD分別為1.4%和1.6%，說明24h內(nèi)供試液穩(wěn)定性良好。

2.7 重復(fù)性試驗 取同一批藥材制成供試品溶液6份，測定含量。結(jié)果麝香草酚與異丁酸百里香酯RSD分別為1.0% 和1.0%，說明方法重復(fù)性好。

2.8 回收率試驗 精密稱取6份已知含量的本品0.3g，每份加入麝香草酚約1mg和異丁酸百里香酯0.3mg，按供試品測定項下測定。麝香草酚平均回收率為97.94%，RSD為1.28%;異丁酸百里香酯平均回收率為99.09%，RSD為1.34%。結(jié)果見表1、表2。

2.9 樣品含量測定 取5個不同批號顯脈旋覆花藥材，按供試品溶液的制備方法制備成供試液，分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入高效液相色譜儀，測定，即得。結(jié)果見表3、圖1、圖2。

表1 麝香草酚回收率測定結(jié)果表

表2 異丁酸百里香酯回收率測定結(jié)果表

表3 樣品含量測定(n=3)

圖1 麝香草酚與異丁酸百里香酯HPLC色譜圖3－麝香草酚 4－異丁酸百里香酯

圖2 顯脈旋覆花藥材HPLC色譜圖5－麝香草酚 6－異丁酸百里香酯

3 討論

3.1 含量測定指標(biāo)成分的選擇 顯脈旋覆花的功能為祛風(fēng)濕、通絡(luò)止痛、健胃消食。經(jīng)研究抗炎鎮(zhèn)痛主要有效部位為揮發(fā)油，我們將其開發(fā)成5類中藥新藥 (云威靈油軟膠囊)治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者［7－9］。麝香草酚、異丁酸百里香酯二者之和占揮發(fā)油總量的70%以上，并且為抗炎鎮(zhèn)痛的主要有效成分，所以我們選擇了麝香草酚和異丁酸百里香酯作為顯脈旋覆花藥材含量控制指標(biāo)，經(jīng)方法學(xué)考察和5個不同批號樣品的測定表明該方法可靠、便捷，可以作為控制顯脈旋覆花藥材的質(zhì)量方法。

3.2 波長的選擇 選擇色譜條件時，曾試用274nm的波長進(jìn)行檢測，結(jié)果異丁酸百酯含量很低，后經(jīng)紫外檢測，發(fā)現(xiàn)220nm波長下麝香草酚與異丁酸百里香酯都有較大的吸收，所以選擇220nm做為檢測波長。

3.3 麝香草酚和異丁酸百里香酯在藥材中的含量 實驗結(jié)果表明不同批號的顯脈旋覆花中麝香草酚和異丁酸百里香酯含量差異較大，可能與生長環(huán)境、采收季節(jié)有關(guān)，所以本研究采用同時測定2個成分的含量作為質(zhì)量控制方法。顯脈旋覆花中麝香草酚和異丁酸百里香酯含量與產(chǎn)地、采收季節(jié)的相關(guān)性正在研究中。

3.4 藥用部位 《云南省中藥飲片標(biāo)準(zhǔn)，2005年版》第一冊收載的云威靈為顯脈旋覆花的干燥根及根莖，《湖南省中藥材標(biāo)準(zhǔn)，2009年版》收載的毛秀才為顯脈旋覆花的干燥全草，而記載的功能都是祛風(fēng)除濕、通絡(luò)止痛、健胃消食。顯脈旋覆花的莖與葉與根莖是否有相同的化學(xué)成分，需要進(jìn)一步研究。

［1］朱亞，賀安娜.毛秀才的本草考證及現(xiàn)代研究進(jìn)展［J］.中國民族醫(yī)藥藥雜志，2011，10:36～38.

［2］蔣向輝，佘朝文.侗藥毛秀才生物學(xué)特性及引種栽培研究［J］.懷化學(xué)院學(xué)報，2011，30(8):20～22.

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Determination of thymol and thymyl isobutyrate in Inula nervosa Wall by HPLC

CHEN Dan1，LI Ke2，3，HU Yi－ bing2，3，SHI Lei－ zhe2，3，LI Ruo － cun2，3
1.Xiangtan Vocational and Technical College，Pharmic Research，Hunan Province Xiangtan 411102，China;2.Hunan Academy of TCM;3.Key Laboratory of Research and Exploiture of Traditional Chinese Medicine in Hunan Province，Changsha 410013，China

Objective:To establish a quantitative method for determining the content of thymol and thymyl isobutyrate in Inula nervosa Wall.Method:The sample was extracted with 95%ethanol，then analyzed on a C18 column using acetonitrile － water(65:35)as mobile phase.The detection wavelength was set at 220nm.Results:The linearities of thymol and thymyl isobutyrate were respectively in the range of 0.224 ～1.344μg(r=0.9998)and 0.132 ～0.792μg(r=0.9996);the average recoveries were 97.94%(RSD 1.28%)and 99.09%(RSD 1.34%);the RSD of repeatability were 1.0%and 1.0%.Conclusion:The method is reliable and rapid for quality control of Inula nervosa wall.

Inula nervosa Wall;Yunweiling;Maoxiucai;thymol;thymyl isobutyrate;HPLC

R927.2

A

1007－8517(2012)21－0045－03

顯脈旋覆花是菊科植物顯脈旋覆花lnula nervosa Wall.ex DC.的干燥根及根莖，具有祛風(fēng)除濕、通絡(luò)止痛、健胃消食的功能，為民間治療風(fēng)濕和跌打損傷的常用藥物［1］［2］。麝香草酚與異丁酸百里香酯為顯脈旋覆花抗炎、鎮(zhèn)痛、抑制機(jī)體免疫反應(yīng)的主要有效成分［3］。據(jù)報道麝香草酚與異丁酸百里香酯含量測定采用氣相色譜法測定，麝香草酚用高效液相色譜法測定［4－6］，未見有高效液相色譜法麝香草酚與異丁酸百里香酯的報道，為有效地控制顯脈旋覆花藥材的質(zhì)量，本文建立了用高效液相色譜法測定顯脈旋覆花藥材中麝香草酚與異丁酸百里香酯的含量，同時，測定了不同批號的顯脈旋覆花藥材。

陳丹，講師，研究方向:中藥制劑工藝與質(zhì)量制。E－mail:chend0915@163.com。

李若存，研究員，碩導(dǎo)。E－mail:ruocun2003@yahoo.com.cn。

2012.09.20)