劉淑梅 李夢陽 陽建軍

湖南省郴州市第一人民醫(yī)院，湖南 郴州 423000

采收期和加工方法對馬齒莧中槲皮素含量的影響

劉淑梅 李夢陽 陽建軍

湖南省郴州市第一人民醫(yī)院，湖南 郴州 423000

目的:比較不同采收期和不同產(chǎn)地加工方法對馬齒莧藥材槲皮素含量的影響。方法:90%乙醇—25%鹽酸 (4∶1)為混合溶劑提取槲皮素;用高效液相色譜法測定馬齒莧中槲皮素含量。色譜柱:kromasil C18(4.6mm ×250mm，5um);流動相:甲醇－0.2%磷酸 (46∶54);流速:1.0ml/min;柱溫:32℃;檢測波長:360nm。結(jié)果:不同采收期和不同加工方法的馬齒莧藥材中槲皮素含量存在差異。結(jié)論:采收期和加工方法對馬齒莧藥材質(zhì)量存在一定影響。

馬齒莧;HPLC;槲皮素;加工方法;含量測定

馬齒莧為馬齒莧科植物馬齒莧 (Portulaca oleracea L.)的干燥全草，馬齒莧為一年生肉質(zhì)草本植物，應(yīng)用歷史悠久，是一種傳統(tǒng)的藥食兼用植物，具有清熱解毒、涼血止血的功效。全草含甲基腎上腺素、香豆精、黃酮、強(qiáng)心苷等［1］，有降血糖、抗衰老、提高機(jī)體免疫功能、抗動脈粥樣硬化等作用［2］?，F(xiàn)代臨床藥理認(rèn)為，馬齒莧中黃酮類化合物是有效成分之一。所含的黃酮類化合物包括槲皮素、山奈酚、芹菜素和木犀草素［3］。槲皮素具有降低血壓、增強(qiáng)毛細(xì)血管抵抗力、減少毛細(xì)血管脆性、降血脂、擴(kuò)張冠狀動脈、增加冠脈血流量等作用。近年研究表明，槲皮素在癌癥防治上具有重要的作用［4］。本文作者已在以往課題中研究了產(chǎn)地加工方法對馬齒莧藥材的質(zhì)量存在影響［5］，為了進(jìn)一步探究對其他成分的影響，本實(shí)驗(yàn)遂采用HPLC法測定馬齒莧中黃酮類成分之一的槲皮素含量，為馬齒莧藥材的質(zhì)量控制提供一定依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 島津LC28A高效液相色譜儀，島津SPD26AV紫外－可見檢測器。AUW220D型電子天平 (日本島津公司)。

1.2 試藥 槲皮素對照品:購于中國藥品生物制品檢定所，批號1000812200406，供含量測定用。馬齒莧樣品:采摘于郴州市附近郊區(qū)。甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純，流動相采用色譜純?nèi)軇?，水為樂百氏純凈水?/p>

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 kromasil C18色譜柱 (4.6mm×250mm，5u);甲醇:0.2%磷酸溶液 (46∶54)流動相;檢測波長:360nm;進(jìn)樣量:20ul;流速:1.0mL/min;柱溫:33℃。結(jié)果槲皮素峰與樣品中其它成分峰能較好分離。理論塔板數(shù)以槲皮素計(jì)不低于3000。在此條件下，對照品溶液與供試品溶液色譜圖見圖1。

2.2 溶液配制

2.2.1 對照品溶液的配制 精密稱取120℃干燥4h的槲皮素對照品10.05mg，置50ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為儲備液，取5ml置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，0.45um微孔濾膜過濾后作為對照品溶液，濃度為100.5ug/mL。

2.2.2 供試品溶液的制備 取本品粉末1g，精密稱定，加入90%乙醇－25%鹽酸 (4∶1)混合溶液20ml，85℃回流2h，放冷，用混合溶液補(bǔ)重，搖勻，濾過，用0.45um微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。

圖1 槲皮素對照品（A）和1號馬齒莧藥材樣品（B）色譜圖

2.3 線性關(guān)系考察 取對照品溶液0.2，0.5，1.0，1.3，1.5，2.0mL，分別置10mL量瓶中，加入甲醇至刻度，搖勻，分別精密吸取10uL進(jìn)樣分析，以槲皮素峰面積為縱坐標(biāo)y，以對照品溶液濃度 (ug·mL)為橫坐標(biāo)x，進(jìn)行線性回歸分析，得槲皮素回歸方程為:y=26334x+574.35，r=0.9999，槲皮素在0.02～0.20ug范圍內(nèi)與峰面積呈現(xiàn)良好線性關(guān)系。

2.4 精密度試驗(yàn) 在上述色譜條件下，取同一供試品溶液連續(xù)測定6次，進(jìn)樣量為20ul，測量槲皮素峰面積，計(jì)算其峰面積RSD=0.84% ，結(jié)果表明精密度良好。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 在上述色譜條件下，取同一供試品溶液，測定6次，每次間隔2h，供試品中槲皮素峰面積的RSD為2.44%，結(jié)果表明供試品溶液在10h內(nèi)穩(wěn)定。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一份樣品，按供試品溶液的制備方法制備6份供試品溶液，按上述色譜條件進(jìn)行測定，以供試品中槲皮素含量計(jì)算RSD為2.04%，證明此方法重復(fù)性良好。

2.7 加樣回收率試驗(yàn) 取已知槲皮素含量的11號樣品0.5g(9份)，精密稱定，分別精密加入濃度為0.0402mg/mL的槲皮素對照品溶液1.9，2.4，2.9mL(各3份)，按上述供試品溶液制備方法和色譜條件測定，計(jì)算回收率，結(jié)果平均加樣回收率為98.46% ，RSD=1.76%，說明此方法穩(wěn)定可靠。

2.8 樣品測定 取不同來源的馬齒莧藥材各3份，按

2.2.2 項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在上述色譜條件下，分別測定槲皮素含量，結(jié)果見表1。

表1 樣品中槲皮素含量測定結(jié)果 (n=3)

3 結(jié)果及討論

3.1 含量結(jié)果分析 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，不同采收期和不同加工方法對馬齒莧藥材中槲皮素含量有影響，其中不同采收期以5月含量相對較低，6月和10月含量較高。加工方法樣品中，燙后曬干和蒸后曬干幾乎是陰干含量的6倍多、直接曬干的2倍。另外實(shí)驗(yàn)過程中也發(fā)現(xiàn)陰干樣品和直接曬干的樣品顏色發(fā)黑、質(zhì)輕。由此可見，藥材采收時間和產(chǎn)地加工方法對馬齒莧中槲皮素含量都有影響。相比之下，產(chǎn)地加工方法的影響更明顯。槲皮素是馬齒莧藥材諸多黃酮類成分之一，其含量盡管不能完全反映藥材的質(zhì)量，但從某種角度來說，采收期和加工方法會對馬齒莧藥材中的化學(xué)成分產(chǎn)生一定影響，進(jìn)而會影響藥材質(zhì)量。另外，馬齒莧鮮藥材肉嫩多汁，在放置過程中很容易腐爛變質(zhì)。因此，需選擇適宜時間進(jìn)行采收，采收后更需要及時采取合適的方法對原藥材進(jìn)行加工干燥處理，以免影響藥材質(zhì)量。

3.2 測定條件的確定 在色譜條件的考察過程中，發(fā)現(xiàn)流動相的pH值、柱溫對色譜峰的峰形及分離度有較大影響。通過比較，最后確定流動相為甲醇－0.2%磷酸溶液 (46∶54)，柱溫32℃，此條件下得到的色譜峰峰形及分離度較好，且基線穩(wěn)定。

3.3 提取條件的確定 馬齒莧藥材目前沒有明確的有效成分，本實(shí)驗(yàn)遂選取其有效成分之一的黃酮類化合物槲皮素作為考察指標(biāo)，但通過實(shí)驗(yàn)預(yù)試，馬齒莧藥材中槲皮素含量低，直接測定效果不好，因此本實(shí)驗(yàn)采取酸水解后測定其槲皮素的含量，獲得滿意效果。并對水解條件進(jìn)行了選擇，考察了不同濃度的乙醇、甲醇以及提取時間和鹽酸濃度及酸水解時間的影響。結(jié)果顯示，用90%乙醇:25%鹽酸(4:1)回流2h，馬齒莧中槲皮素含量最高且峰形好，此方法可以用于控制馬齒莧藥材的質(zhì)量。

［1］牛廣財(cái)，朱丹.馬齒莧化學(xué)成分及其藥理作用研究進(jìn)展［J］.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2005，33(6):1090.

［2］中華本草編委會.中華本草［M］.上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1999:754.

［3］姚佳琪，孟娜，宋少江等.馬齒莧化學(xué)成分研究［J］.沈陽藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2007，24(12):751.

［4］崔山風(fēng).槲皮素的研究進(jìn)展［J］.西北藥學(xué)雜志，2006，21(6):279－280.

［5］劉淑梅，孫濟(jì)平，彭小冰等.不同產(chǎn)地加工方法對馬齒莧質(zhì)量影響的研究［J］.貴陽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2010，33(1):24.

R927.2

A

1007－8517(2012)22－0031－02

劉淑梅 (1975－)，女，碩士研究生，主要從事院內(nèi)制劑研究與質(zhì)量控制。E－mail:chenzhou129@sohu.com。

2012.10.10)