肖慶邦，羅祖強(qiáng)，周正平

(遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院 病理科，貴州 遵義 563099)

·臨床醫(yī)學(xué)研究·

P57KIP2在子宮內(nèi)膜癌及子宮內(nèi)膜不同病變組織中表達(dá)的意義

肖慶邦，羅祖強(qiáng)，周正平

(遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院 病理科，貴州 遵義 563099)

目的通過檢測p57KIP2蛋白在子宮內(nèi)膜癌及子宮內(nèi)膜不同病變組織中的表達(dá)情況，探討p57KIP2在子宮內(nèi)膜癌發(fā)生、發(fā)展中的作用。方法選取100例子宮內(nèi)膜樣腺癌(endometrioid adenocarcinoma，EA)，以及子宮內(nèi)膜增生期、分泌期、單純性增生、復(fù)雜性增生組織各10例，子宮內(nèi)膜上皮內(nèi)瘤變(Endometrial intraepithelial neoplasia,EIN) 20例，用免疫組織化學(xué)Elivision法檢測這些病變組織中p57KIP2蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果p57KIP2蛋白在EA、子宮內(nèi)膜增生期、分泌期、單純性增生、復(fù)雜性增生、EIN組織中的陽性表達(dá)率分別為26.00%、0.00%、60.00%、0.00%、10.00%、40.00%。p57KIP2蛋白在EA組織中的陽性表達(dá)與在分泌期組織中的陽性表達(dá)比較，在分泌期組織中的陽性表達(dá)與在復(fù)雜性增生中的陽性表達(dá)比較，差異均有顯著性(P<0.05)；在EA中，p57KIP2蛋白的陽性表達(dá)與組織學(xué)分級(jí)有關(guān)(P<0.05)，與年齡大小、盆腔淋巴結(jié)有無轉(zhuǎn)移等無關(guān)(P>0.05)。結(jié)論p57KIP2參與了子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生發(fā)展過程。

子宮內(nèi)膜癌；子宮內(nèi)膜樣腺癌，免疫組織化學(xué)；p57KIP2

子宮內(nèi)膜癌是女性生殖系統(tǒng)常見的惡性腫瘤之一，在發(fā)達(dá)國家，其發(fā)病率已高居女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤之首[1]，其組織學(xué)類型以子宮內(nèi)膜樣腺癌(endometrioid adenocarcinoma，EA)最為常見，其確切的癌變機(jī)制至今仍無定論。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用免疫組織化學(xué)Elivision法，通過檢測 p57KIP2蛋白在子宮內(nèi)膜樣腺癌及子宮內(nèi)膜不同病變組織中的表達(dá)情況，探討其在子宮內(nèi)膜癌發(fā)生發(fā)展過程中的作用。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源 收集遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院病理科2006年1月至2010年12月確診的EA標(biāo)本100例(I級(jí)38例，II級(jí)41例，III級(jí)21例)，均經(jīng)10%中性福爾馬林固定，石蠟包埋，HE染色重新閱片進(jìn)一步明確診斷。檢出盆腔淋巴結(jié)腫大46例，其中伴盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移16例；患者年齡：32～76歲，中位年齡54歲(≤50歲26例，>50歲74例)?；颊咝g(shù)前均未作放、化療等治療。隨機(jī)選取子宮內(nèi)膜增生期、分泌期、單純性增生、復(fù)雜性增生組織各10例，子宮內(nèi)膜上皮內(nèi)瘤變(Endometrial intraepithelial neoplasia,EIN) 20例作為試驗(yàn)對照組。

1.2 試劑 鼠抗人 p57KIP2單克隆抗體(工作濃度為1∶75)、EliVision試劑盒及其他配套試劑均購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。

1.3 方法 將存檔蠟塊4 μm厚連續(xù)切片，行HE染色和EliVision免疫組化染色。免疫組化實(shí)驗(yàn)過程嚴(yán)格按照說明書操作步驟進(jìn)行，DAB顯色，蘇木精復(fù)染。用邁新生物技術(shù)有限公司提供的陽性切片作陽性對照，以PBS代替一抗作空白對照。組織抗原采用高壓修復(fù)處理。

1.4 結(jié)果判斷 p57KIP2蛋白陽性信號(hào)呈棕黃色或棕褐色，主要定位于細(xì)胞核。將陽性細(xì)胞百分比分成5級(jí)：無陽性細(xì)胞為0分，陽性細(xì)胞≤25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，>75%為4分。著色強(qiáng)度：無色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。著色強(qiáng)度積分與數(shù)量積分相加：0分為(-)，2～3分為(±)，4～5分為(+)，6～7分為(++)，其中(+)和(++)判為陽性。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 所得數(shù)據(jù)采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件，應(yīng)用行×列表2檢驗(yàn)、配對四格表2檢驗(yàn)及Fisher確切概率法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。如P≤0.05，結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 p57KIP2蛋白在子宮內(nèi)膜癌及子宮內(nèi)膜不同病變組織中的表達(dá)情況 在子宮內(nèi)膜EA、增生期、分泌期、單純性增生、復(fù)雜性增生及EIN中，p57KIP2蛋白陽性表達(dá)率分別為26.00%(26/100)、0(0/10)、60.00% (6/10)、0(0/10)、10.00%(0/10)、40.00%(8/20)。統(tǒng)計(jì)分析表明，p57KIP2蛋白在EA組織中的陽性表達(dá)與在分泌期組織中的陽性表達(dá)比較，在分泌期組織中的陽性表達(dá)與在復(fù)雜性增生中的陽性表達(dá)比較，差異均有顯著性(P<0.05)；p57KIP2蛋白在EA組織中的陽性表達(dá)與在不同增生性病變中的陽性表達(dá)比較，p57KIP2蛋白在分泌期組織的陽性表達(dá)與其余增生性病變的陽性表達(dá)比較，差異均無顯著性(P>0.05)(見表1及圖1～2)。

表1 p57KIP2蛋白在子宮內(nèi)膜癌及子宮內(nèi)膜不同病變組織中的表達(dá)情況

注：◆p57KIP2蛋白在EA與分泌期表達(dá)比較，◆◆在分泌期與復(fù)雜性增生表達(dá)比較，P<0.05。

圖1 分泌期子宮內(nèi)膜，上皮細(xì)胞表達(dá) p57KIP2,EliVision法×200圖2 EA，腫瘤細(xì)胞表達(dá) p57KIP2,EliVision法×200

2.2 p57KIP2在EA組織中陽性表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系 在EA中，p57KIP2蛋白在組織學(xué)Ⅰ級(jí)與Ⅲ級(jí)之間的陽性表達(dá)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；但與患者年齡大小、盆腔淋巴結(jié)有無轉(zhuǎn)移無關(guān)(P>0.05)(見表2)。

表2 p57KIP2在EA組織中陽性表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系

注：◆p57KIP2蛋白在組織學(xué)Ⅰ級(jí)與Ⅲ級(jí)之間表達(dá)比較，P<0.05。

3 討論

p57KIP2是1995年由Masuoka等[2]用雙雜交系統(tǒng)克隆出來，是最遲被發(fā)現(xiàn)的CKIs家族成員，為細(xì)胞周期負(fù)性調(diào)控因子，是一種候選的抑癌基因。Guo等[3]通過研究 p57KIP2在肝癌組織及人肝癌細(xì)胞株中的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn) p57KIP2mRNA和蛋白在肝癌組織中的表達(dá)顯著低于鄰近非癌組織，其表達(dá)下調(diào)與cyclin D1的高表達(dá)相關(guān)，且與腫瘤大小、TNM分期、肝外轉(zhuǎn)移及較低的生存時(shí)間有關(guān)。周正平等[4，5]通過檢測乳腺癌、宮頸癌組織中 p57KIP2蛋白的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn) p57KIP2蛋白在乳腺癌、宮頸癌組織中的表達(dá)均低于良性病變，p57KIP2蛋白低表達(dá)可能是乳腺或?qū)m頸組織惡性轉(zhuǎn)變、腫瘤組織發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的重要生物學(xué)標(biāo)志。

本研究結(jié)果顯示，p57KIP2蛋白在子宮內(nèi)膜分泌期組織中的陽性表達(dá)最高，在EA組織中的陽性表達(dá)低于在分泌期、EIN組織中的陽性表達(dá)而高于在增生期、單純性增生組織中的不表達(dá)、復(fù)雜性增生組織中的陽性表達(dá)，但僅在EA組織與分泌期、分泌期與復(fù)雜性增生組織中的陽性表達(dá)之間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；在其余各組之間兩兩比較，由于觀察結(jié)果出現(xiàn)不表達(dá)(0.00%)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在EA中，p57KIP2蛋白隨著組織學(xué)分級(jí)的增加，陽性表達(dá)下降,但僅在組織學(xué)Ⅰ級(jí)與Ⅲ級(jí)之間的陽性表達(dá)比較,差異有顯著性(P<0.05)；其陽性表達(dá)與年齡大小、淋巴結(jié)有無轉(zhuǎn)移無關(guān)(P>0.05)。提示 p57KIP2參與了子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生發(fā)展過程。

在分泌期子宮內(nèi)膜組織中，p57KIP2蛋白陽性表達(dá)較高，可能因上皮細(xì)胞在此期受孕激素作用，產(chǎn)生分泌現(xiàn)象有關(guān)，提示 p57KIP2在子宮內(nèi)膜組織中發(fā)揮負(fù)向調(diào)控周期進(jìn)程的作用可能與孕激素的存在有關(guān)。在子宮內(nèi)膜增生期、單純性增生、復(fù)雜性增生組織中，上皮細(xì)胞受到雌激素的作用發(fā)生增殖，p57KIP2蛋白不表達(dá)或低表達(dá)。在EIN、EA組織中，p57KIP2蛋白的陽性表達(dá)低于在分泌期內(nèi)膜組織中的表達(dá)，提示可能隨著子宮內(nèi)膜由分泌狀態(tài)轉(zhuǎn)入各種增生性狀態(tài)，上皮細(xì)胞由受孕激素作用為主逐漸轉(zhuǎn)為以雌激素作用為主，p57KIP2蛋白表達(dá)下調(diào)甚至不表達(dá)，喪失其負(fù)向調(diào)節(jié)細(xì)胞增生的能力，使子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞出現(xiàn)增生、異常增生，甚至發(fā)生惡性轉(zhuǎn)變；關(guān)于p57KIP2蛋白在EIN、EA組織中的陽性表達(dá)高于良性增生性病變組織中的陽性表達(dá)，有待進(jìn)一步研究。

[1] Amant F,Moerman P,Neven P,et al.Endometrial ancer[J].Lancet,2005,366:491-505.

[2]Matsuoka S,Edwards MC,Bai C,et al.p57KIP2,a structurally distinct member of the p21CIP1 Cdk inhibitor family,is a candidate tumor suppressor gene[J].Genes Dev,1995,9:650-62.

[3]Guo H,Liu Y,Tian T,et al.Downregulation of p57 accelerates the growth and invasion of hepatocellular carcinoma[J].Carcinogengsis,2011,32:1897-904.

[4]周正平,王進(jìn)京,蘇俊,等.乳腺浸潤性導(dǎo)管癌中 p57KIP2、cyclin D1和cyclin E的表達(dá)及意義[J].臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志,2005,21:282-285.

[5]周正平,肖慶邦,冉豐豐,等.p57KIP2、cyclin D1和cyclin E在宮頸鱗癌中的表達(dá)及意義[J].腫瘤防治研究,2007,34:511-513.

Expressionandsignificanceofp57KIP2inendometrialcarcinomaandendometrialdifferentlesions

Xiaoqingbang,Luozuqiang,Zhouzhengping

(Department of Pathology,the Affiliated Hospital of Zunyi Medical College,Guizhou Zunyi 563099,China)

ObjectiveTo investigate the expressions of p57KIP2protein in endometrial carcinoma and endometrial different lesions and further explore the role of p57KIP2in the occurrence and development of endometrial carcinoma.MethodsThe expressions of p57KIP2protein in 100 cases of endometrial adenocarcinoma (EA),10 cases of endometrial proliferative phase,10 cases of secretory phase,10 cases of simple hyperplasia,10 cases of complex hyperplasia tissues and 20 cases of Endometrial intraepithelial neoplasia (EIN) were detected by immunohistochemical Elivision methods,respectively.ResultsThe positive expression rate of p57KIP2protein in EA,endometrial proliferative phase,secretory phase,simple hyperplasia,complex hyperplasia tissues and EIN were 26.00%,0.00%,60.00%,0.00%,10.00% and 40.00%,respectively.There was significant difference of p57KIP2protein positive expression between EA and endometrial secretory phase and between endometrial secretory phase and complex hyperplasia (P<0.05).In EA,there was correlation between the positive expression rate of p57KIP2protein and histological grade (P<0.05).However,the positive expression rate of p57KIP2protein was unrelated to age and lymph node metastasis (P>0.05).Conclusionp57KIP2participate in the occurrence and development of endometrial carcinoma.

Endometrial carcinoma; endometrioid adenocarcinoma; immunohistochemistry; p57KIP2

貴州省教育廳自然科學(xué)研究基金(NO:黔教科2010047)。

周正平，女，教授，碩士生導(dǎo)師，研究方向：腫瘤病理，E-mail:zhouzp66@163.com。

R737.33

A

1000-2715(2012)03-0206-03

[收稿 2012-04-12；修回 2012-05-13]

(編輯：譚秀榮)