邢宗杰

(黑龍江大興安嶺地區(qū)圖強林業(yè)局,黑龍江 漠河 165301)

松杉靈芝 (Ganoderma tsugae)是靈芝的一種,其有效成分是普通靈芝的幾十倍[1]。其人工品與野生品無明顯的質(zhì)量差異[2]。所治病種涉及心臟、血管、消化、神經(jīng)、內(nèi)分泌、呼吸等各個系統(tǒng),尤其對腫瘤、肝臟病變、失眠的防治以及延緩衰老的作用十分顯著[3],極具栽培和開發(fā)價值。

筆者曾于2006—2009年,對松杉靈芝人工代料栽培進行了初步試驗,并取得一定成果和可觀的經(jīng)濟效益。本文報道以不同樹種為原料栽培松杉靈芝試驗的結(jié)果,供研究人員和栽培者參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料 試驗菌株為采集自圖強林業(yè)局奮斗林場52林班的野生松杉靈芝幼體經(jīng)組織分離獲得。

母種培養(yǎng)基a為PDA培養(yǎng)基,配方為：馬鈴薯200 g、蔗糖20 g、水1 000 mL、瓊脂18～ 20 g。母種培養(yǎng)基b配方為水冬瓜赤楊木塊200 g、食糖20 g、食鹽2 g、清水1 000 mL。

原種培養(yǎng)基配方為樺木木屑78%、麩皮20%、食糖1%、豆餅粉2%、石膏1%,每千克培養(yǎng)基中另加維生素B10.1 g,pH值調(diào)至6.5。栽培試驗采用5個樹種：水冬瓜赤楊(Alnus cremastogyne Burk)、榆樹 (Ulmuspibirian Elm)、鉆天柳 (Chosenia arbutifolia)、落葉松 (Larix gmelinii)、白樺(Betula platyphylla suk)。

1.2 試驗方法

(1)母種分離與純化。按常規(guī)方法制作PDA母種培養(yǎng)基,制成斜面試管,常溫下放置7天,觀察有無雜菌發(fā)生,備用。將干水冬瓜赤楊木加工成綠豆大小的小木塊,將食糖、食鹽溶于1 000 mL水中,制成營養(yǎng)液。將小木塊浸水10小時,取出后瀝水1小時裝管至1/2高,經(jīng)滅菌后備用,作為母種培養(yǎng)基b。

在無菌條件下,對基本成熟、長勢有后勁的野生松杉靈芝子實體,用75%的酒精初步消毒。手術(shù)刀經(jīng)酒精燈灼燒,冷卻后,切削子實體扇面,每切削一次,燒一次手術(shù)刀并冷卻,如此3～4次后,將子實體切成黃豆粒大小的小塊,并迅速接入斜面試管及小木塊試管中。在25～28℃條件下避光培養(yǎng),24 h后觀察接入兩種不同培養(yǎng)基的子實體組織,周圍均發(fā)生萌動現(xiàn)象的,表明其已成活。當PDA培養(yǎng)基試管菌絲長到5 mm時,取其頂端優(yōu)勢菌絲,移接到備用試管內(nèi)進行再次培養(yǎng)提純,小木塊試管不作處理,備用。

(2)原種制作。按設(shè)計配方稱取各種配料,加清水拌勻,裝入 500 mL菌種瓶,經(jīng) 0.14 MPa、126℃滅菌2 h,冷卻到30℃以下后在無菌條件下接入兩個不同培養(yǎng)基母種,于25～28℃環(huán)境下培養(yǎng)30～45天,裝瓶備用。

(3)菌棒制作。樹木進入休眠期 (2月)后,砍伐直徑8～10 cm的水冬瓜赤楊、榆樹、鉆天柳、落葉松、白樺5個不同樹種,截成15 cm的小段,以人工手段將含水量降到40%左右,裝入16.5×33×0.005(cm)的聚乙烯塑料袋,常壓100℃滅菌12 h,冷卻后接入原種,于24～28℃條件下培養(yǎng),培養(yǎng)室相對空氣濕度為40%～50%,經(jīng)30～40天,菌絲長透菌木。

(4)出芝管理。松杉靈芝屬高度腐生菌,只有寄生木材被高度腐朽,菌絲貯存大量養(yǎng)分后產(chǎn)生子實體,一般情況在第二年才可發(fā)生大量子實體[4]。根據(jù)這一特性,進入深秋后 (9月15日)將長好菌的菌木入棚埋入土中越冬,第二年5月下旬,除去菌木上覆蓋的厚土,留1～2 cm薄土層,覆膜,進行保溫保濕培養(yǎng)。培養(yǎng)前期濕度為70%～80%,現(xiàn)菌后控制在80%～90%,棚內(nèi)溫度保持14～28℃,光照控制在100～300 lx,CO2濃度調(diào)節(jié)到0.1%以下。靈芝現(xiàn)蕾到成熟大約需40天,見子實體邊緣無生長點,有孢子粉彈射時停水采收。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同母種培養(yǎng)基的生長情況 試驗結(jié)果表明,兩種培養(yǎng)基的菌絲生長速度無明顯差異,萌動時間均為24 h,滿管時間培養(yǎng)基a為30天,培養(yǎng)基b為32天,平均日生長速度分別為4.20 mm和3.97 mm。分析原因可能是,在避光,溫、濕度條件一致情況下,PDA培養(yǎng)基和小木塊培養(yǎng)基所含營養(yǎng)都能滿足靈芝菌絲正常萌動、生長的需要。

2.2 不同母種培養(yǎng)基菌絲老化情況 觀察發(fā)現(xiàn),不同母種培養(yǎng)基菌絲老化速度有很大的差異,出現(xiàn)老菌皮時間培養(yǎng)基a為17天,而培養(yǎng)基b為115天。分析原因,對PDA培養(yǎng)基,菌絲只能生于培養(yǎng)基表面,一旦遇有微光和適生氣體,菌絲便失去生長空間,出現(xiàn)老化,而對小木塊培養(yǎng)基,菌絲生存空間大,即便長滿管后還可向木質(zhì)中繼續(xù)生長,因此老化推遲。

2.3 不同樹種結(jié)實情況 5種試驗樹種均能發(fā)生靈芝子實體 (圖1),其中木質(zhì)松軟的樹種結(jié)實要大一些,但子實體質(zhì)地不如木質(zhì)較硬的樹種上的致密堅硬。同時木質(zhì)松軟的樹種結(jié)實后,從手感上感覺其菌木已幾乎被完全分解吸收,沒有第二年再出芝的可能,而木質(zhì)較硬的樹種則不同。經(jīng)分析認為：木質(zhì)松軟的樹種其組織結(jié)構(gòu)不夠緊密,相對而言,木質(zhì)素和纖維素不足,不能提供靈芝多年生長所需的必需營養(yǎng),因而不適用多年 (2～3年)靈芝再生。而木質(zhì)較硬的樹種則在第二年還可以產(chǎn)生優(yōu)質(zhì)的靈芝子實體 (表3)。

表3 不同樹種結(jié)實及菌木腐熟情況

2.4 不同樹種的發(fā)菌速度 5個樹種的栽培袋置于同一培養(yǎng)室內(nèi)進行培養(yǎng),通過觀察,發(fā)現(xiàn)菌絲長滿段木的時間有著一定差異：菌絲長滿段木時間從快到慢依次為水冬瓜赤楊 (30天)、鉆天柳 (33天)、樺樹 (35天)、落葉松 (42天)、榆樹 (50天)。根據(jù)不同樹種的材質(zhì)硬度和菌絲長滿段木時間綜合分析,菌絲在段木上的生長速度與材質(zhì)硬度及輸導組織的密度有關(guān)。

圖1 5個樹種出芝情況

3 小結(jié)與討論

3.1 綜上可見,由于松杉靈芝母種極易老化,因此生產(chǎn)母種時,應(yīng)采取小木塊培養(yǎng)基為好。同時也可考慮用PDA培養(yǎng)基提純后,再轉(zhuǎn)入小木塊培養(yǎng)基,此方法更便于貯存。以后使用時,只要將1塊小木塊接入PDA斜面培養(yǎng)基,10天左右即可得到純正母種。另外,PDA培養(yǎng)基只能在0℃以上保存,而小木塊培養(yǎng)基則可置于-40℃保存,不影響日后擴繁。松杉靈芝菌絲在段木上的生長速度與材質(zhì)的硬度及材質(zhì)疏導組織的密度有直接關(guān)系。

3.2 試驗證明,采用的5個樹種均可用于生產(chǎn)松杉靈芝,所產(chǎn)靈芝品質(zhì)差異不明顯,在選擇樹種時,主要應(yīng)從當?shù)氐馁Y源條件考慮。樹種形成主要依靠天然更新和人工植樹,建議勿選擇落葉松,因為該樹種生長較慢。其他4個樹種除了天然更新和人工造林形成林木之外,都有著較強的萌生能力,用于栽培松杉靈芝,不僅能保證原料來源,而且對保護和合理利用森林資源都具有重要意義。

[1]李希政,夏宏志,李氵蒙,等.松杉靈芝生產(chǎn)雜菌原因及控制[J].中國食用菌,2011(2)：64-65.

[2]張 潔,姜士成.松杉靈芝的質(zhì)量標準研究 [J].長春中醫(yī)學院學報,2005,21(1)：62-63.

[3]中國科學院微生物研究所檢測鑒定書 〔2009〕微檢字第095號.

[4]王 柏,張明杰,徐金丹.松杉靈芝的馴化栽培初探 [J].中國食用菌,1997(5)：14.