王國(guó)利 李景武

1.河北省唐山市人民醫(yī)院藥劑科，河北唐山 063001；2.河北省唐山市人民醫(yī)院胃腸外科，河北唐山 063001

Clusterin、Livin、和P53在胃癌中的表達(dá)及意義

王國(guó)利1李景武2

1.河北省唐山市人民醫(yī)院藥劑科，河北唐山 063001；2.河北省唐山市人民醫(yī)院胃腸外科，河北唐山 063001

目的研究Clusterin（簇集蛋白）、Livin（凋亡抑制蛋白）和野生型P53在胃癌組織中的表達(dá)及臨床意義。方法采用免疫組化SP法檢測(cè)42例胃癌組織和30例正常胃組織中Clusterin、Livin和P53蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果Clusterin、Livin和P53在胃癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為71.4%、85.7%和76.2%，均為高表達(dá)；Clusterin、Livin和P53蛋白的表達(dá)與與有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度、浸潤(rùn)深度和TNM分期相關(guān)（P＜0.05）。Clusterin、Livin蛋白的表達(dá)在生存時(shí)間分別＜3年及≥3年時(shí)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論Clusterin、Livin、和P53在腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移中發(fā)揮了重要作用，檢測(cè)Clusterin、Livin和P53的表達(dá)可作為預(yù)測(cè)胃癌的轉(zhuǎn)移趨勢(shì)指標(biāo)，為胃癌的診治提供臨床參考。

胃癌；簇集蛋白；凋亡抑制蛋白；P53；免疫組化

胃癌是消化系統(tǒng)最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，在腫瘤患者中，其死亡率排在第二位，極大地危害著人類的健康。盡管胃癌通過(guò)手術(shù)、放化療等取得了一定療效，但遠(yuǎn)期效果仍不能令人很滿意，最終多死于復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，因此探索新的治療方法意義重大。腫瘤的發(fā)生發(fā)展是多因素、多階段共同作用的結(jié)果，大量的研究表明，Clusterin、Livin、P53蛋白與腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移關(guān)系密切[1-2]。本研究旨在探討Clusterin、Livin和P53蛋白在胃癌的表達(dá)情況以及其臨床意義，為臨床診治提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集我院2008年7月～2009年7月收治的行手術(shù)治療的42例胃癌患者的臨床資料。所有患者術(shù)前均未進(jìn)行過(guò)化療、放射治療，病理診斷均為胃腺癌。其中男30例，女12例，年齡43～74歲，平均（55.3±6.8）歲，組織學(xué)分型：高中分化者16例，低分化者占26例。臨床分期：Ⅰ～Ⅱ期17例，Ⅲ～Ⅳ期25例。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移22例。選取30例正常胃黏膜組織標(biāo)本（距癌旁5 cm以上的胃黏膜組織）作為對(duì)照組。

1.2 試劑和方法

兔抗人Clusterin及Livin單克隆抗體，兔抗人P53多克隆抗體（購(gòu)自美國(guó)SANTA CRUZ公司），SP9001試劑盒和DAB顯色試劑盒（北京中山生物技術(shù)有限公司）。免疫組織化學(xué)染色采用鏈酶卵白素-生物素過(guò)氧化物酶法（SP法）。Clusterin、Livin和P53抗體稀釋倍數(shù)均為1∶100，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，染色步驟嚴(yán)格按說(shuō)明書進(jìn)行，用PBS代替一抗作陰性對(duì)照，細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核中呈現(xiàn)棕黃色染色顆粒為陽(yáng)性細(xì)胞。

1.3 判定標(biāo)準(zhǔn)

采用Olympus BX51型光學(xué)顯微鏡觀察并攝片。光學(xué)顯微鏡下，計(jì)算出每10個(gè)高倍視野中染色為陽(yáng)性的腫瘤細(xì)胞百分率，具體如下，顯色細(xì)胞數(shù)（染色陽(yáng)性百分比）：＜5%定為0分；6%～20%定為1分（弱+）；21%～50%定為2分（+）；＞50%定為3分（++），本實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)一采用總積分＞1，即陽(yáng)性表達(dá)作為統(tǒng)計(jì)分析的標(biāo)準(zhǔn)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料采用χ2比較（即：四格表或R×C表的χ2檢驗(yàn)），以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 正常胃黏膜組織和胃癌中Clusterin、Livin和P53的表達(dá)

Clusterin、Livin和P53的表達(dá)情況如表1所示，Clusterin、Livin、P53陽(yáng)性表達(dá)主要定位于癌細(xì)胞的胞質(zhì)，呈棕黃色或棕褐色，陽(yáng)性表達(dá)率分別為71.4%、85.7%和76.2%，三者在正常胃黏膜組織中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為20.0%、33.3%、26.7%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.2 Clusterin、Livin和P53的表達(dá)與胃癌臨床病因素的關(guān)系

如表2所示，Clusterin、Livin和P53的陽(yáng)性表達(dá)與有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度、浸潤(rùn)深度和TNM分期有關(guān)（P＜0.05）；與年齡、性別、腫瘤的部位、腫瘤的大小及大體分型差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

2.3 Clusterin、Livin和P53的表達(dá)與患者3年生存率的關(guān)系

如表3所示，對(duì)42例胃癌患者進(jìn)行跟蹤隨訪，3年內(nèi)患者的死亡例數(shù)為14例，Clusterin、Livin蛋白的表達(dá)在生存時(shí)間分別＜3年及≥3年時(shí)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

3 討論

細(xì)胞凋亡是由基因控制的細(xì)胞主動(dòng)地程序性死亡過(guò)程。凋亡障礙使細(xì)胞生存延長(zhǎng)，突變的細(xì)胞積累而導(dǎo)致腫瘤的形成。大量的研究表明，腫瘤發(fā)生發(fā)展的重要原因之一可能是由于凋亡的抑制作用所致。細(xì)胞凋亡的調(diào)控因子包括誘導(dǎo)因子和抑制因子。抑制因子包括Clusterin、IAP家族、Bcl-2、BclxL、Mcl-l等，誘導(dǎo)因子包括P53、Caspases家族、Fas/FasL和Bax等[3]。

Clusterin是一種新發(fā)現(xiàn)的凋亡抑制因子，是一種硫酸化糖蛋白的異構(gòu)二聚體，在多種組織中發(fā)現(xiàn)這種蛋白的表達(dá)，Clusterin可能是在細(xì)胞外發(fā)揮抗凋亡作用的[4]。Livin基因是最新發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞凋亡抑制蛋白家族成員之一，近年來(lái)，以Livin為靶點(diǎn)的腫瘤基因治療策略備受關(guān)注。Livin編碼雙重底物特異性磷酸酶，具有脂質(zhì)磷酸酶活性和蛋白磷酸酶活性，Livin可能通過(guò)脂質(zhì)磷酸酶的活性調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)，其可在G1期阻斷細(xì)胞周期進(jìn)程，Livin基因作為一種抑癌基因，多數(shù)正常成人組織中不表達(dá)，而在一些腫瘤組織細(xì)胞中高表達(dá)，其異常高表達(dá)常引起組織細(xì)胞凋亡受阻，與腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)[5-6]。p53基因分為野生型和突變型兩種。野生型p53基因?yàn)橐职┗?，野生型p53基因發(fā)生突變后，轉(zhuǎn)變?yōu)橥蛔冃蚿53基因，成為癌基因。野生型p53基因是細(xì)胞生長(zhǎng)周期中的負(fù)調(diào)節(jié)因子，突變型p53基因喪失了對(duì)細(xì)胞增殖的監(jiān)控作用，可以促進(jìn)細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)化及癌變[7-8]。

表1 正常胃組織和胃癌中Clusterin、Livin和P53的表達(dá)[n（%）]

表2 Clusterin、Livin和P53的表達(dá)與胃癌臨床病因素的關(guān)系（例）

表3 胃癌中Clusterin、Livin和P53的表達(dá)與患者3年生存率的關(guān)系[n（%）]

本研究結(jié)果顯示，Clusterin、Livin和P53的陽(yáng)性表達(dá)均為高表達(dá)，且與有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度、浸潤(rùn)深度和TNM分期有關(guān)（P＜0.05）；提示三者可能抑制了胃癌細(xì)胞的凋亡，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞分裂，與胃癌發(fā)生和生長(zhǎng)關(guān)系密切。預(yù)示著隨著胃癌的生長(zhǎng)、分化程度的降低其侵襲和轉(zhuǎn)移能力逐漸增強(qiáng)。本研究結(jié)果還顯示，Clusterin、Livin蛋白的表達(dá)在生存時(shí)間分別＜3年及≥3年時(shí)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。Clusterin、Livin蛋白的高表達(dá)可能預(yù)示腫瘤有較高的侵襲性和預(yù)后不良。與國(guó)內(nèi)外相關(guān)研究結(jié)果一致[9-11]。

綜上所述，筆者認(rèn)為Clusterin、Livin和P53蛋白的表達(dá)水平與胃癌的發(fā)生、發(fā)展、侵襲和轉(zhuǎn)移有密切的關(guān)系，可以作為評(píng)估胃癌的生物學(xué)行為、預(yù)測(cè)轉(zhuǎn)移趨勢(shì)的重要指標(biāo)之一，為胃癌的診治制定更加積極、合理、有效的治療方案提供依據(jù)和參考。

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Expression and clinical significance of Clusterin,Livin and P53 in gastric cancer

WANGGuoli1 LIJingwu2
1.Department of Pharmacy,Tangshan People's Hospital,Hebei Province,Tangshan 063001,China;2.Department of Gastrointestinal surgery,Tangshan People's Hospital,Hebei Province,Tangshan 063001,China

ObjectiveTo study the expression of Clusterin,Livin and P53 in gastric cancer,and to investigate the clinical significance of Clusterin,Livin and P53 proteins expression.MethodsExpression of Clusterin,Livin and P53 in 42 specimens and 30 normal tissue specimens of gastric cancer was determined by immunohistochemical staining.ResultsThe positive rate of Clusterin,Livin and P53 was 71.4%,85.7%and 76.2%.The expression of Clusterin,Livin and P53 in the tissue of gastric cancer was significantly higher than that in normal gastric tissue,the expression of Clusterin,Livin and P53 protein was associated with lymphaticmetastasis,infiltration depth,degrees of differentiation and TNM staging(P＜0.05). Clusterin,Livin protein expression compared in survival time＜3 and≥3 had statistical significance(P＜0.05).ConclusionClusterin,Livin and P53 protein play a critical role in tumormetastasis.Co-detection of the expression of Clusterin, Livin and P53 protein can be used to predict themetastatic potential of gastric cancer,and it provides clinical reference for the diagnosis and treatment of gastric cancer.

Gastric cancer;Clusterin;Livin;P53;Immunohistochemistry

R735.2

A

1673-7210（2012）11（b）-0020-03

2012-09-11 本文編輯：郝明明）