李翠文 黎敏 侯培珍

包頭醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院急診科，內(nèi)蒙古包頭 014010

舒肝和胃顆粒對試驗(yàn)性大鼠慢性淺表胃炎的治療作用

李翠文 黎敏 侯培珍

包頭醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院急診科，內(nèi)蒙古包頭 014010

目的探討舒肝和胃顆粒對氨水致慢性淺表性胃炎大鼠的治療作用。方法將60只Wistar大鼠隨機(jī)分為空白對照組、模型組、舒肝和胃顆粒低、中、高劑量組及三九胃泰組，采用大鼠飲用0.02%氨水90 d，制作大鼠慢性淺表性胃炎動物模型。用HE染色，光鏡觀察胃黏膜的病理變化；采用硝酸還原酶法檢測血液一氧化氮（NO）含量及免疫組化檢測胃黏膜環(huán)氧化酶-2（COX-2）陽性表達(dá)。結(jié)果舒肝和胃顆粒低、中、高劑量組能減輕氨致慢性淺表性胃炎大鼠胃黏膜的病理性損傷，降低血清NO含量，與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；高劑量組能明顯降低COX-2陽性表達(dá)，與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。舒肝和胃顆粒各劑量組和三九胃泰組療效比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）結(jié)論舒肝和胃顆?？擅黠@減輕攻擊因子對胃黏膜的損傷和炎癥反應(yīng)，保護(hù)胃黏膜。

舒肝和胃顆粒；慢性淺表性胃炎；環(huán)氧化酶-2；一氧化氮

舒肝和胃顆粒具有理氣、健脾、和胃功效，多年臨床觀察對慢性淺表性胃炎具有良好的療效。本實(shí)驗(yàn)通過觀察舒肝和胃顆粒對慢性淺表性胃炎大鼠胃黏膜組織病理學(xué)變化，并檢測在胃黏膜保護(hù)和損傷機(jī)制中起重要作用的NO及COX-2指標(biāo)的研究，從實(shí)驗(yàn)角度進(jìn)一步探討舒肝和胃顆粒治療慢性淺表性胃炎的療效及作用機(jī)制。

1 動物與試藥

1.1 動物

Wister大鼠60只，雌雄各半，體重（200±30）g，由內(nèi)蒙古大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供，合格證號：SCXK（蒙）2002-0001。

1.2 藥品、試劑及儀器

舒肝和胃顆顆粒：包頭醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院中醫(yī)科王睿琦提供，每克顆粒相當(dāng)于原生藥6 g，臨床用蒸餾水配成0.500、0.250、0.125 g生藥/mL的混懸液。三九胃泰顆粒，湖南三九南開制藥有限公司生產(chǎn)，批號：0809051。氨水，洛陽化學(xué)試劑廠，批號：010318。戊巴比妥鈉：佛山市化工實(shí)驗(yàn)廠，批號：960901。NO試劑盒，南京建成生物工程研究所，批號：20050816。COX-2試劑盒，福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。鼠單克隆抗體批號：RMA-0549。

2 方法與結(jié)果

2.1 動物分組、造模、給藥

Wister大鼠隨機(jī)分為6組（空白對照組，模型組，三九胃泰組，舒肝和胃顆粒高、中、低劑量組），每組10只。除空白對照組（每日飲用蒸餾水）外，其余各組造模（0.02%氨水大鼠自由飲用，連續(xù)90 d）。造模成功后，禁食16 h（以20%戊巴比妥40mL/kg）麻醉，斷頭處死模型組大鼠，其余分別給予不同藥處理。舒肝和胃顆粒高、中、低劑量組分別為25.00、12.50、6.25 g/kg（分別相當(dāng)于推薦臨床試驗(yàn)60 kg成人日用湯藥劑量的20、10、5倍）。三九胃泰膠囊組2 g/kg（相當(dāng)于推薦臨床試驗(yàn)60 kg成人日用劑量的20倍）。藥物組采用等容積不等濃度藥液法給藥，1mL/100 g，模型組給予等容積生理鹽水，每日一次，連續(xù)30 d。

2.2 標(biāo)本采集及處理

末次給藥后禁食16 h，斷頭取血4 mL，測定血清NO含量（μmol/L）。剖腹快速取出全胃，10%甲醛固定，石蠟包埋，切片，HE染色。光鏡下觀察黏膜病變，每張切片觀察10個視野，計(jì)算各組炎癥級數(shù)的均數(shù)及標(biāo)準(zhǔn)差，比較各組間差異的顯著性。病變判斷標(biāo)準(zhǔn)與積分方法，0級：表示胃黏膜層無炎癥細(xì)胞；1級：表示胃黏膜層可見少許散在的炎癥細(xì)胞；2級：表示胃黏膜層可見較多的炎癥細(xì)胞；3級：表示胃黏膜層可見聚集成堆的炎癥細(xì)胞浸潤。0～3級可記作：0、1、2、3分。采用免疫組織化學(xué)染色方法，實(shí)驗(yàn)操作步驟按COX-2試劑盒說明進(jìn)行，免疫組化切片，胞漿呈黃褐色，在高倍鏡下（×200）計(jì)數(shù)5個視野的陽性細(xì)胞所占百分?jǐn)?shù)。

2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 15.0對實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)量資料數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差±s）表示，采用方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.4 結(jié)果

2.4.1 各組大鼠胃黏膜病理變化模型組胃黏膜炎細(xì)胞浸潤較嚴(yán)重，與空白對照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），說明大鼠慢性淺表性胃炎模型建立成功。經(jīng)治療后舒肝和胃顆粒各劑量組、三九胃泰組與模型組比較，炎癥程度明顯減輕，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；舒肝和胃顆粒與三九胃泰組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），說明舒肝和胃顆粒與三九胃泰療效基本相同。見表1。

表1 各組大鼠胃黏膜炎癥程度的比較（n=10）

2.4.2 各組大鼠NO含量及COX-2陽性細(xì)胞表達(dá)情況模型組NO含量、COX-2陽性表達(dá)與空白對照組比較明顯升高（P＜0.05）。與模型組比較，舒肝和胃顆粒各劑量組和三九胃泰組NO含量顯著降低（P＜0.05）；舒肝和胃顆粒高劑量組、三九胃泰組COX-2陽性數(shù)量表達(dá)明顯減少（P＜0.05）。見表2。

3 討論

慢性淺表性胃炎（chronic superficial gastritis，CSG）是不伴有胃黏膜萎縮、胃黏膜層以淋巴細(xì)胞和漿細(xì)胞為主的慢性炎性細(xì)胞浸潤的慢性胃炎[1]。中醫(yī)認(rèn)為，本病病位雖在胃，但與肝關(guān)系密切。病因主要為情志抑郁、飲食寒熱內(nèi)傷胃膜，導(dǎo)致肝氣不舒，胃失和降，痰淤氣滯，寒熱互結(jié)，胃膜受傷。病情可見胃脘疼痛、痞脹噯氣、燒心反酸、心煩口苦、咽干惡心等癥。治療以疏肝和胃止痛、清熱祛寒消積為法。舒肝和胃顆粒方藥中柴胡、青皮、郁金、川楝子舒肝理氣，雞內(nèi)金、焦檳榔、瓦楞子、厚樸和胃化積，石膏、黃芩、黃連、干姜清化寒熱，元胡、五靈脂理氣活血止痛。合方具有疏肝理氣，和胃消痞，制酸止吐，通絡(luò)止痛之功效。本實(shí)驗(yàn)胃黏膜病理觀察表明，舒肝和胃顆粒低、中、高劑量組均能明顯減輕大鼠慢性淺表性胃炎的組織病理學(xué)改變，提示舒肝和胃顆?？梢种瓢睂ξ葛つさ膿p傷，減輕炎癥反應(yīng)，促進(jìn)胃黏膜修復(fù)，其作用與三九胃泰相同。

表2 各組大鼠NO含量及胃黏膜COX-2陽性細(xì)胞表達(dá)情況的比較（±s，n=10）

表2 各組大鼠NO含量及胃黏膜COX-2陽性細(xì)胞表達(dá)情況的比較（±s，n=10）

注：與空白對照組比較，*P＜0.05；與模型組比較，**P＜0.05；“-”表示無數(shù)據(jù)

組別劑量（g/kg）NO含量（μmoL/L）COX-2陽性細(xì)胞表達(dá)（%）空白對照組模型組舒肝和胃顆粒大劑量組舒肝和胃顆粒中劑量組舒肝和胃顆粒小劑量組三九胃泰組--25.00 12.50 6.25 2.00 56.44±4.51 106.93±25.36* 83.40±8.83** 84.50±9.86** 88.24±11.00** 84.40±9.43** 1.60±1.36 33.00±9.89 18.70±2.83** 27.80±7.22 28.70±6.91 28.40±5.01**

NO是由誘生型一氧化氮合酶（inducible nitricoxide synthase，Inos）在炎癥或免疫反應(yīng)時被激活，催化L-精氨酸產(chǎn)生，通過組織內(nèi)鐵的釋放、阻斷線粒體的功能和阻礙DNA的合成等，引起細(xì)胞和組織的損傷[2-3]。COX-2為誘導(dǎo)型酶，在正常組織中不表達(dá)或弱表達(dá)，在受到各種物質(zhì)刺激下均可使炎癥部位被快速誘導(dǎo)表達(dá)，產(chǎn)生大量的炎癥性前列腺素和其他炎癥介導(dǎo)物引起炎癥反應(yīng)，其高表達(dá)與炎癥等的發(fā)生、發(fā)展存在密切關(guān)系[4-5]。本實(shí)驗(yàn)證明，模型組NO、COX-2表達(dá)均較正常對照組明顯增高，提示胃黏膜受到氨水刺激后，NO、COX-2表達(dá)增多，參與了慢性淺表性胃炎的病理過程。疏肝和胃顆粒低、中、高劑量三組血清NO含量均降低，大劑量組COX-2蛋白表達(dá)明顯減少，與模型組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），揭示疏肝和胃顆?？上抡{(diào)NO、COX-2水平，從而減輕及抑制攻擊因子對胃黏膜的損傷的作用，保護(hù)胃黏膜，從另一個角度證實(shí)了中醫(yī)肝郁辨證方法中通過調(diào)節(jié)“肝氣”治療“胃病”的疏肝和胃理論根據(jù)[8-11]，為慢性淺表性胃炎的臨床研究奠定了基礎(chǔ)。

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Treatment effect of Shuganhewei Granule on experimental rats w ith chronic superficial gastritis

LICuiwen LIMin HOU Peizhen
Department of Emergency,the First Affiliated Hospital of Baotou Medical College,Inner Monggol Autonomous Region, Baotou 014010,China

ObjectiveTo evaluate the therapeutic effects of Shuganhewei Granule for treating chronic superficial gastritis. M ethods Sixty rats of Wister were divided into different dosage groups of control group,Shuganheweimodel group with low,middle,high dose and Sanjiuweitai Capsule group.0.02%NH3H2O was used to establish ratsmodel of the chronic surfacial gastritis by drink freely.The pathological changes of chronic superficial gastritis was tested by HE colors;the content of nitric oxide synthase was tested by using nitrate reductase and the positive rate of cyclooxygenase-2 protein expression was tested by immunohisochemistry in chronic superficial gastritis model.ResultsShuganhewei Granule on obvious therapeutic action of treatment chronic superficial gastritiswas obviously.It could lighten the pathological changes of chronic superficial gastritis.Different dosage groups and model group inflammatory cell invasion had significantly different(P＜0.05).The positive rate of cyclooxygenase-2 protein expressio in chronic superficial gastritis,there were significantly differences in high of dosage group and model group(P＜0.05).There were no difference between the Sanjiuweitaigroup and different dosage groups of ShuganheweiGranule(P＞0.05).ConclusionShuganheweiGranule can obviously lighten attack factors on gastricmucosa damage and inflammation and protect gastricmucosa.

ShuganheweiGranule;Chronic superficial gastritis;Cyclooxygenase-2;Nitric oxide synthase

R285.5

A

1673-7210（2012）11（b）-0008-02

李翠文（1978-），女，漢族，碩士研究生，主治醫(yī)師，主要從事消化疾病研究。

侯培珍（1945-），女，漢族，教授，碩士生導(dǎo)師，主任醫(yī)師，主要從事消化道腫瘤的研究。

2012-05-29 本文編輯：衛(wèi)軻）