劉 悅

（南京中醫(yī)藥大學(xué)研究生院，江蘇 南京 210046）

雙氯芬酸鈉滴眼液為《中華人民共和國國家藥品標(biāo)準(zhǔn)新藥轉(zhuǎn)正標(biāo)準(zhǔn)》第30冊收載的品種，主要成分為雙氯芬酸鈉。臨床上主要用于治療葡萄膜炎、角膜炎、鞏膜炎等感染，其療效確切、副作用小。滴眼液中含活性成分玻璃酸鈉（Sodium hyaluronate，SH）又稱透明質(zhì)酸鈉，是透明質(zhì)酸（Hyaluronic acid，HA）的鈉鹽形式，是葡糖醛酸－N－乙酰氨基葡糖為雙糖單位組成的直鏈高分子酸性黏多糖，廣泛分布于動物和人體結(jié)締組織細(xì)胞外基質(zhì)中，具有非常好的生物相容性，用于治療關(guān)節(jié)炎、干眼癥、皮膚潰瘍等。玻璃酸鈉在眼科的應(yīng)用最早始于治療干眼癥，因其具有粘彈性流變學(xué)特性被提議用作人工淚液成分之一，可延長淚膜破裂時間，促進(jìn)淺表角膜潰瘍的愈合，并且具有良好的舒適性和保水性［1］。但含玻璃酸鈉的雙氯芬酸鈉滴眼液標(biāo)準(zhǔn)中未對玻璃酸鈉進(jìn)行質(zhì)量控制［2］，筆者采用凝膠滲透色譜法測定雙氯芬酸鈉滴眼液中玻璃酸鈉的含量，方法簡便，結(jié)果準(zhǔn)確，專屬性強(qiáng)，可有效控制產(chǎn)品的質(zhì)量，報道如下。

1 儀器與試藥

色譜儀：美國Agilent公司Agilent1120高效液相色譜儀；檢測器：示差折光檢測器（RI）；對照品：玻璃酸鈉原料（山東正大福瑞達(dá)制藥有限公司，純度：99.0%）；雙氯芬酸鈉滴眼液（含玻璃酸鈉）：自制樣品（批號： 111001， 111002， 111003）；水為Milli－Q超純水；其它試劑均為分析純。

2 色譜條件

色譜柱：Shodex SB 805HQ（300mm×8mm）（多糖用凝膠色譜柱）；流動相：0.2mol／L 硝酸鈉水溶液（含0.02%疊氮鈉）；流速：0.3mL／min；柱溫40℃。

3 方法與結(jié)果

3.1 專屬性試驗

供試品溶液的配制：以樣品溶液作為供試品溶液，采用0.45μm為空濾膜過濾后進(jìn)行測定；對照品溶液的配制：精密玻璃酸鈉原料適量，加水溶解并制成每lmL中約含0.1 mg的玻璃酸鈉溶液，搖勻，即得；空白溶液的配制：按處方量制備成不含玻璃酸鈉的陰性樣品適量，作為空白溶液。精密吸取上述溶液20μL，注入液相色譜儀，使主成分峰與其它雜質(zhì)峰分離度符合要求。

結(jié)果：對照樣品與供試品溶液出現(xiàn)了相同的色譜峰，主峰與其它色譜峰分離度良好，空白樣品在相同的保留時間沒有出現(xiàn)色譜峰，說明雙氯芬酸鈉原料及其它輔料不干擾測定，本方法專屬性較好，如圖1所示。

圖1 專屬性試驗

3.2 線性試驗

取玻璃酸鈉原料10mg，精密穩(wěn)定，置100mL容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻；分另精密吸取3、4、5、6、7mL置10mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，濃度分別為30、40、50、60、70μg／mL。分別取上述溶液20μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以濃度C為橫坐標(biāo)，以峰面積Y為縱坐標(biāo)，得回歸方程：Y＝2000.4C－19615，r＝0.996。表明玻璃酸鈉在30～70μg／mL濃度范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

3.3 回收率試驗

按處方量的80%、100%、120%稱取玻璃酸鈉原料各3份，按處方量加入其它原輔料制成供試品進(jìn)樣測定，以外標(biāo)法，按照當(dāng)日標(biāo)準(zhǔn)曲線計算玻璃酸鈉的回收率?；厥章蕿?8.5%、98.6%和98.3%，平均回收率為：98.5%，RSD%為0.59%，說明本法的準(zhǔn)確度良好，見表1。

3.4 溶液的穩(wěn)定性試驗

取上述供試品溶液，分別于第0、2、4、6、8h精密量取供試品溶液20μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，計算峰面積的平均值為78 921，RSD為1.07%，說明本品的水溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

3.5 精密度試驗

精密吸取樣品溶液20μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，峰面積分別為77596、78123、76899、77254、77028、77444，RSD%為0.57%，說明此方法的精密度良好。

3.6 樣品含量測定

按上述方法對自制的3批樣品進(jìn)行測定，測得玻璃酸鈉含量相當(dāng)于標(biāo)示量的99.2%，RSD%為0.78%。結(jié)果見表2。

表1 回收率試驗結(jié)果 （n＝3）

表2 三批樣品含量測定結(jié)果

4 討論

雙氯芬酸鈉滴眼液（含玻璃酸鈉）為眼科臨床常用藥，其主要成分雙氯芬酸鈉具有較好的抗感染效果，活性成分玻璃酸鈉作為其輔料，因其具有非牛頓流體的特性和極好的生物相容性、耐受性，粘度隨切變力的增大而明顯減小，使藥液的粘度很高，眼臉仍可眨動自如，沒有粘糊的感覺。因為這些優(yōu)點(diǎn)，使其成為滴眼液的良好載體，多用于干眼癥、眼角膜損傷等眼科疾病治療。目前文獻(xiàn)報道玻璃酸鈉的含量測定多采用咔唑比色法［3］，筆者在研究該方法時發(fā)現(xiàn)重復(fù)測定誤差較大，且樣品處理較為復(fù)雜。為選用更為簡便準(zhǔn)確的測定方法，考慮玻璃酸鈉為大分子酸性粘多糖，沒有紫外吸收，本研究選擇凝膠滲透色譜法，采用示差折光檢測器對雙氯芬酸鈉滴眼液（含玻璃酸鈉）進(jìn)行測定。結(jié)果顯示，本研究所建立的方法準(zhǔn)確度良好，適用于本品中玻璃酸鈉的含量測定。

［1］ 高啟合，鄒志紅.滴眼液中玻璃酸鈉含量測定方法研究［J］.亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2007，21（09）：38－39.

［2］ 國家藥典委員會.雙氯芬酸鈉滴眼液國家藥品標(biāo)準(zhǔn)（WS1－X－059－2002Z）［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2002.

［3］ 郭桂芬.玻璃酸鈉在滴眼液和干眼治療中的應(yīng)用［J］.亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2009，5（10）：125.