曾建紅，曾 軍

（1.廣東省廣州市第一人民醫(yī)院鶴洞分院 510380；2.廣東省廣州市第一人民醫(yī)院呼吸內(nèi)科 510380）

慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmonary disease，COPD）是一組慢性氣道阻塞性疾病的統(tǒng)稱，疾病發(fā)展后期的肺動脈高壓（pulmonary arterial hypertension，PAH）常會導(dǎo)致肺源性心臟?。ǚ涡牟。┑陌l(fā)生，大約80%～90%的肺心病是由COPD疾病發(fā)展而來[1]。目前，COPD的人群發(fā)病率約為1.7%，因此，延緩慢性炎癥所導(dǎo)致的PAH的形成，是COPD疾病終末階段肺心病防治的一個有效途徑[2－3]。Rho激酶（Rho associated coiled coil forming protein kinase，ROCK），又稱Rho關(guān)聯(lián)含卷曲螺旋蛋白激酶，是小G蛋白Rho的下游效應(yīng)激酶。有研究顯示Rho激酶的活化與血管平滑肌的增生和血管的重構(gòu)有著密切的關(guān)系，參與了動脈粥樣硬化、高血壓、肺心病等多種疾病的發(fā)生發(fā)展過程[4－5]?，F(xiàn)將本研究COPD合并PAH患者血清以及單核細(xì)胞ROCK水平的臨床意義報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2010年1月至2011年1月本院收治的COPD患者40例，根據(jù)病情分為兩組，COPD伴PAH患者20例為A組，男14例，女6例；年齡45～76歲，平均（57.2±14.3）歲。不伴PAH的COPD患者20例為B組，男12例，女8例；年齡42～75歲，平均（54.8±12.7）歲；選取本院同期體檢中心健康體檢者20例為對照組，男13例，女7例；年齡41～74歲，平均（54.2±11.8）歲。所有受試者均簽署知情同意書并獲得本院倫理委員會批準(zhǔn)。3組患者在性別、年齡、體質(zhì)量等方面比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2 入選和排除標(biāo)準(zhǔn) 參照1997年全國第2次肺心病專業(yè)會議制定的標(biāo)準(zhǔn)，患者吸入支氣管舒張藥后第1秒用力呼氣容積／用力呼氣肺活量（FEV1／FVC）＜70%及FEV1＜80%定義為COPD；參照2009年歐洲心臟病學(xué)會PAH診斷指南，將肺動脈平均壓大于或等于25 mm Hg，伴有氣促、下肢水腫等臨床表現(xiàn)定義為PAH。排除標(biāo)準(zhǔn)：有心血管疾病，支氣管擴(kuò)張，肝、腎等臟器疾病，近期使用過他汀類藥物者。

1.3 肺動脈平均壓測定 肺動脈平均壓＝0.61×[4×（三尖瓣反流速度）＋右房壓]＋2。

1.4 血清Rho激酶1（ROCK1）水平的測定 采集所有受試者過夜空腹12 h靜脈血，3 000 r／min，離心15 min，分離上清液。ROCK1檢測ELISA試劑盒購自美國D＆G公司，嚴(yán)格按著試劑盒說明書操作，酶標(biāo)儀450 nm波長處測定各孔的光密度值（optical density，OD）。以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，所對應(yīng)的OD值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，然后對照標(biāo)準(zhǔn)曲線根據(jù)血清樣品的OD值計算ROCK1的表達(dá)水平。

1.5 單核細(xì)胞ROCK1表達(dá)水平的流式細(xì)胞儀檢測 采集所有受試者過夜空腹12 h靜脈血20 mL，參照黃芬等[6]的方法分離單核細(xì)胞，血液中加入PBS緩沖液和淋巴細(xì)胞分離液，1 000×g，離心10 min，細(xì)胞分層，吸取所需的單核細(xì)胞，PBS緩沖液洗滌細(xì)胞2次，500μL PBS重懸細(xì)胞，按照抗體說明書加入10μL FITC－ROCK1或者同型對照（美國R＆D公司）室溫孵育30 min，流式細(xì)胞儀（美國Beckman Coulter公司）IL1通道檢測10 000個單核細(xì)胞，計算ROCK1的表達(dá)水平。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS12.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理，計量資料以±s表示，組間比較采用t檢驗(yàn)和單因素方差分析，Pearson相關(guān)性分析檢測各指標(biāo)的相關(guān)性，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

3組受試者血清ROCK1水平、外周血單核細(xì)胞ROCK1水平及肺動脈平均壓變化見表1，3組受試者外周血單核細(xì)胞ROCK1水平的流式細(xì)胞儀檢測見圖1。Pearson相關(guān)性分析顯示：受試者血清ROCK1水平與肺動脈平均壓呈正相關(guān)（r＝0.654，P＜0.05），外周血單核細(xì)胞ROCK1水平與肺動脈平均壓亦呈正相關(guān)（r＝0.664，P＜0.05），血清ROCK1水平與外周血單核細(xì)胞ROCK1水平呈正相關(guān)（r＝0.864，P＜0.01）。

表1 3組受試者血清者ROCK1水平、外周血單核細(xì)胞ROCK1水平及肺動脈平均壓變化（±s，n＝20）

表1 3組受試者血清者ROCK1水平、外周血單核細(xì)胞ROCK1水平及肺動脈平均壓變化（±s，n＝20）

＊：P＜0.05，與對照組比較；▲：P＜0.05，與B組比較。

組別 肺動脈平均壓（mm Hg）血清ROCK1表達(dá)水平（pmol／L）單核細(xì)胞ROCK1表達(dá)水平（%）A組 51.37±11.64＊▲36.72±7.18＊▲31.21±8.83＊▲B組 25.14±4.28＊23.55±4.97＊10.56±3.72＊對照組20.14±3.45 13.10±2.67 3.61±2.44

圖1 3組患者單核細(xì)胞ROCK1表達(dá)的流式細(xì)胞儀檢測

3 討 論

COPD在老年人群中患病人數(shù)多，疾病會反復(fù)發(fā)作，最終會導(dǎo)致PAH的產(chǎn)生，嚴(yán)重影響了患者的生活質(zhì)量[7]。ROCK分為N末端催化結(jié)構(gòu)域、卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域、C端PH結(jié)構(gòu)域3部分，N末端具有絲氨酸／蘇氨酸蛋白激酶活性，可以磷酸化下游的靶蛋白產(chǎn)生一系列的生物學(xué)效應(yīng)。Rho激酶有ROCKl和ROCK2 2個亞基，ROCKl和ROCK2氨基酸序列有65%的同源性，絲氨酸／蘇氨酸蛋白激酶催化活性區(qū)同源性高達(dá)92%，兩個亞基有一定的組織分布特異性，研究顯示ROCKl對血管平滑肌細(xì)胞的促增殖作用較明顯[8－10]。本研究顯示，血清和單核細(xì)胞中ROCK1的表達(dá)水平在對照組、A組和B組3組之間比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），說明Rho激酶的高表達(dá)參與了COPD患者PAH的形成和發(fā)展。

ROCK信號通路可以通過多種方式參與PAH的形成，例如ROCK通過Erk信號通路抑制骨形態(tài)發(fā)生蛋白所引起的p－Smad1核遷移，促進(jìn)肺動脈平滑肌細(xì)胞增殖；誘導(dǎo)活性氧產(chǎn)生損傷血管平滑肌收縮性并誘發(fā)血管結(jié)構(gòu)重構(gòu)，另外血小板源性生長因子、5－羥色氨、血管緊張素Ⅱ等血管活性物質(zhì)也主要是通過ROCK信號通路來促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞的增生和肥大[10－11]。本研究顯示，血清和單核細(xì)胞ROCK1的表達(dá)水平與肺動脈平均壓呈正相關(guān)，證明了ROCK在PAH中的作用，提示ROCK可以成為降低肺動脈壓的一個新的治療靶點(diǎn)。有研究顯示，ROCK的抑制劑法舒地爾可以顯著降低肺動脈壓力，而且在吸氧氣或口服鈣離子通道阻滯劑等常規(guī)治療無效的患者，法舒地爾也可以起到降低肺動脈壓力的作用[12－13]。COPD病理基礎(chǔ)就是小氣道的慢性炎癥，慢性炎癥必然會有間質(zhì)慢性炎性細(xì)胞浸潤，本研究COPD患者外周血單核細(xì)胞ROCK表達(dá)升高，在伴發(fā)PAH患者中顯著升高，說明了單核細(xì)胞參與了COPD疾病PAH的形成和發(fā)展，相關(guān)性分析血清ROCK1水平與外周血單核細(xì)胞ROCK1表達(dá)水平呈顯著正相關(guān)（r＝0.864，P＜0.01），說明血液中的ROCK可能主要是慢性炎癥刺激單核細(xì)胞所分泌。

綜上所述，ROCK信號通路的激活參與了COPD疾病PAH的形成和發(fā)展，ROCK是降低PAH的一個潛在治療靶點(diǎn)。

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