周建中

（江西省贛州市人民醫(yī)院血液科 341000）

糖原染色對鑒別診斷急性白血病、骨髓增生異常綜合征及某些腫瘤疾病具有重要價值[1]。但糖原染色關鍵步驟——標本浸入Schiff液后，大多未指明作用（反應）溫度[1－4]，有的選擇室溫[5－6]，有的選擇37℃[7]。故確實有必要探討溫度對糖原染色積分的影響，以努力提高細胞化學染色靈敏度。

1 資料與方法

1.1 一般資料 再生障礙性貧血（AA）、慢性嗜酸粒細胞白血病（CEL）、慢性粒細胞白血?。–ML）、溶血性貧血（HA）、缺鐵性貧血（IDA）、特發(fā)性血小板減少性紫癜（ITP）、急性淋巴細胞白血病L1型（L1）或L2型（L2）、急性粒細胞白血病未分化型（M1）或部分分化型（M2）、急性早幼粒細胞白血?。∕3）、急性粒－單核細胞白血病（M4）、急性單核細胞白血?。∕5）、巨幼細胞貧血（MA）、骨髓增生異常綜合征（MDS）、多發(fā)性骨髓瘤（MM）、非霍奇金淋巴瘤（NHL）及白細胞減少癥（白減）等患者30例。CR、PR分別為完全緩解、部分緩解的縮寫。

1.2 方法 嚴格按照文獻[2]方法配制Schiff液。取每例患者骨髓片5張，均用乙醇甲醛液固定10 min[3，8]并水洗后，均用10 g／L過碘酸22℃氧化20 min[2－3，7，9]，水洗并晾干后，分別浸入4℃（1組）、10℃（2組）、20℃（3組）、30℃（4組）及37℃（5組）等5種溫度Schiff液中反應60 min[7]，水洗后，用蘇木素液復染。均以中性桿狀核粒細胞、中性分葉核粒細胞判斷陽性程度及計算積分[7]。

1.3 統(tǒng)計學處理 用PEMS 3.1統(tǒng)計軟件分析。對積分結果進行雙因素方差分析及LSD－t檢驗。

2 結 果

1～5組糖原染色積分依次升高，分別為（216.2±43.4）、（228.9±48.7）、（245.7±44.3）、（266.4±43.9）、（280.5±42.2）分，見表1。F處理＝70.294，P＜0.001；F配伍＝29.511，P＜0.001，即不同溫度及不同患者之間差異有統(tǒng)計學意義。LSD－t檢驗示4℃組與37℃組比較，t＝14.478，P＜0.001；10℃組與37℃組比較，t＝11.605，P＜0.001；20℃組與37℃組比較，t＝7.832，P＜0.001；30℃組與37℃組比較，t＝3.173，P＜0.002。

表1 不同溫度糖原染色積分比較

續(xù)表1 不同溫度糖原染色積分比較

3 討 論

化學反應速度大多隨溫度升高而加快，這是由于溫度升高時活化分子增加，分子運動加快，反應物分子間的有效碰撞機會增加。糖原染色積分均數隨溫度升高呈依次增加，說明多糖類或糖原的乙二醇經過碘酸氧化成雙醛基后，后者與Schiff液作用由無色品紅變成紫紅色化合物速度也加快。反應60 min后，4℃組與37℃組相差不是太大，說明低溫時反應也較充分。如反應時間減至30 min[2]、20 min[1，3]或10 min[4]，可能4℃組與37℃組積分差異將會增加。隨溫度升高，鐵染色、特異性酯酶染色也呈類似增強反應[10－11]。

總之，糖原染色有效溫度廣泛，選用37℃可提高糖原染色反應強度；溫度確實為糖原染色反應強度的重要影響因素。

[1]Zakout YM，Salih MM，Ahmed HG.The effect of fixatives and temperature on the quality of glycogen demonstration[J].Biotech Histochem，2010，85（2）：93－98.

[2]葉應嫵，王毓三，申子瑜.全國臨床檢驗操作規(guī)程[M].3版.南京：東南大學出版社，2006：159－160.

[3]葉應嫵，王毓三.全國臨床檢驗操作規(guī)程[M].2版.南京：東南大學出版社，1997：79－80.

[4]王穎，薛世泉，張澤兵，等.改良Schiff液的配制及應用[J].臨床與實驗病理學雜志，2009，25（6）：672.

[5]王庸晉.現代臨床檢驗學[M].北京：人民軍醫(yī)出版社，2001：93－95.

[6]Lyon HO，Schulte EK，Prento P，et al.Standardized staining methods：Feulgen－Rossenbeck reaction for desoxyribonucleic acid and periodic acid－Schiff（PAS）procedure[J].Biotech Histochem，2002，77（3）：121－125.

[7]李家增，王鴻利，韓忠朝.血液實驗學[M].上海：上?？茖W技術出版社，1997：68－70.

[8]周建中.三種固定劑糖原染色的靈敏度比較[J].中國臨床實用醫(yī)學，2007，1（10）：65.

[9]周建中.過碘酸氧化時間對糖原染色靈敏度的影響[J].中國現代藥物應用，2007，1（1）：28.

[10]方國安，金秀國，劉波.溫度對骨髓鐵染色的影響[J].臨床檢驗雜志，1995，13（6）：317.

[11]周建中.溫度對特異性酯酶染色積分的影響[J].實用醫(yī)學雜志，2010，26（17）：3235－3236.