郝曉玲，陶林，張文杰，2

（1石河子大學醫(yī)學院病理系／新疆地方與民族高發(fā)病教育部重點實驗室，石河子832002；2華中科技大學同濟醫(yī)學院生殖醫(yī)學中心，武漢430030）

子宮頸癌是世界范圍內(nèi)女性第三高發(fā)惡性腫瘤，居乳腺癌和大腸癌之后。據(jù)國際癌癥研究組織（IARC）2008年的數(shù)據(jù)估計，我國有7.5萬子宮頸癌新發(fā)病例，占全球新發(fā)病例的14%；而宮頸癌死亡病例高達3.3萬，占全球死亡病例的12%。2011年一項調(diào)查顯示，全球子宮頸癌新發(fā)病例在過去的30 年 間 （1980－2010）逐 年 上 升，年 增 長 率 達0.6%［1］；因此，研究和闡明子宮頸癌，尤其是癌前病變的發(fā)生、發(fā)展的分子機制對子宮頸癌的預(yù)防和靶向性治療具有重要意義。

IL－17（Interleukin－17）是一種主要由 Th17細胞亞群和中性粒細胞分泌產(chǎn)生的促炎細胞因子（proinflammatory cytokine）。它可以招募中性粒細胞，促進多種細胞釋放炎性因子，促進細胞增殖和血管生成，是參與慢性炎癥和腫瘤發(fā)生的重要炎癥因子［2］。對人類腫瘤與小鼠的多種惡性腫瘤模型的研究發(fā)現(xiàn)，慢性炎癥是腫瘤的主要誘發(fā)因素［3］。

為了深入研究IL－17與子宮頸癌癌前病變（CIN）的發(fā)生、發(fā)展之間的關(guān)系，本實驗應(yīng)用免疫組化法檢測不同CIN病變組織中IL－17的表達情況，探討其在子宮頸癌癌前病變的發(fā)生、發(fā)展過程中潛在的生物學意義。

1 材料與方法

1.1 標本來源與臨床資料

收集石河子大學醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院病理科2008年至2011年石蠟包埋宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）90例及子宮頸對照組織30例，按2009年WHO子宮頸腫瘤的診斷標準（其中CIN1、CIN2、CIN3及子宮頸對照組織各30例），所有病例均在病理醫(yī)生原始診斷的基礎(chǔ)上進行了二次復查診斷。

1.2 試劑

兔抗人IL－17多克隆抗體（美國Santa Cruz公司）；DAB顯色試劑盒（Dako公司，ZLI－9019）；S－P法試劑盒、抗原修復液：EDTA緩沖液（0.01mol／L，PH 0.8～0.9）均購于北京中杉金橋生物有限公司。

1.3 實驗方法及結(jié)果判讀

實驗方法：采用免疫組織化學S－P法。所有載玻片預(yù)先經(jīng)丙酮、APES防脫片膠處理。組織標本經(jīng)過10%福爾馬林固定，常規(guī)石蠟包埋，4μm連續(xù)切片。脫蠟水化后，于EDTA緩沖液（0.01mol／L，PH 0.8～0.9）中微波加熱進行抗原修復15 min。其余步驟嚴格按試劑盒說明書操作（IL－17抗體稀釋濃度為1∶200）。PBS代替一抗（其余步驟完全一樣）作陰性對照，由試劑公司提供的照片作陽性對照。

結(jié)果判斷：IL－17組織切片顯示以胞漿染色為淺黃色至棕色顆粒者為陽性，于光學顯微鏡（400倍）下隨機選取4個有代表性的不同視野，每個視野計數(shù)100個腫瘤細胞，得分由陽性染色細胞所占面積和細胞染色強度兩者計分乘積來判斷。染色面積計分為：陽性染色細胞＜5%計0分；6～25% 計1分；26～50% 計2分；51～75% 計3分；76～100%計4分。細胞染色強度：無著色計0分；淺黃色計1分；黃色計2分；棕黃色計3分；棕色計4分。兩項記分相乘0～1分為（－），2～4分為（＋），5～8分為（＋＋），9～12分為（＋＋＋），13～16分為（＋＋＋＋）。（－）為陰性，（＋）為弱陽性表達，（＋＋）～（＋＋＋＋）為強陽性表達［4］。

1.4 統(tǒng)計學分析

SPSS 17.0統(tǒng)計軟件分析，計數(shù)資料之間的差異顯著性采用χ2檢驗法。

2 結(jié)果

IL－17在子宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）中的表達情況見表1。

表1 IL－17在子宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）中的表達Tab.1 The expression of IL－17 in cervical intraepithelial neoplasias（CINs）

由表1可知：IL－17主要表達在子宮頸鱗狀上皮（CIN病變組織）細胞的細胞漿，在子宮頸對照組織、CIN1、CIN2、CIN3中高表達的（＋＋以及以上）分別 是 1（3.3%），2（6.7%），19（63.3%），27（90.0%），4組間差異顯著（P＜0.05），而且隨著CIN病變程度的增加IL－17高表達的陽性率也逐漸增加（表1，圖1）。

圖1 IL－17在子宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）中的表達（S－P×100）Fig.1 The expression of IL－17 in cervical intraepithelial neoplasias（CINs）（S－P×100）

3 討論

IL－17是近年來發(fā)現(xiàn)的一種具有強致炎性作用的細胞因子，其中，CD4＋T細胞亞群中Th17細胞是IL－17的主要來源細胞［5］。但最近研究發(fā)現(xiàn)多種細胞均可以產(chǎn)生IL－17，如上皮細胞、血管內(nèi)皮細胞等。Steiner等［6］通過免疫組化和 RT－PCR法研究發(fā)現(xiàn)IL－17在正常前列腺組織中表達極少，且局限在淋巴細胞，而在79%的前列腺增生組織及58%的前列腺癌組織中高表達。說明IL－17主要是由前列腺上皮細胞產(chǎn)生的。

慢性炎癥例如炎癥性腸?。╥nflammatory bowel diseases，IBD）、幽門螺桿菌感染、和乙肝病毒感染均可致腫瘤的發(fā)生，稱為炎癥相關(guān)性腫瘤［7］，而在這類腫瘤中都發(fā)現(xiàn)IL－17表達增高?？肆_恩?。–rohn’s disease，CD）和潰瘍性結(jié)腸炎（ulcerative colitis，UC）作為一類慢性炎癥性腸病，與CD4＋T細胞的過度激活相關(guān)，活化的CD4＋T細胞釋放一系列促炎癥因子，如IL－6、IL－12、IL－23和IL－17，誘導特異性Th17細胞的分化［8－9］。幽門螺桿菌感染誘導的胃的慢性炎癥是胃癌的主要病因之一，在感染的幽門胃粘膜上可見IL－17的高表達［10］。這些研究表明，IL－17在炎癥相關(guān)性腫瘤的發(fā)生和發(fā)展過程中發(fā)揮了關(guān)鍵性的作用。

目前，已知HPV病毒感染是子宮頸癌的主要病因，從HPV病毒感染到子宮頸上皮內(nèi)瘤變到癌變是一個慢性炎癥過程，因此子宮頸癌也是一種與炎癥相關(guān)的腫瘤，應(yīng)該具有與其它病毒感染，如乙肝病毒感染，相同或相似的慢性炎性特征。體外實驗研究已經(jīng)證實，IL－17在有HPV感染的子宮頸癌細胞中的表達比在只有HPV感染的子宮頸上皮細胞和正常子宮頸上皮細胞都要高。在子宮頸癌活檢組織中，IL－17的表達水平也高于子宮頸上皮內(nèi)瘤變組織和正常子宮頸組織［11］，最近的一項研究［12］報告了52例子宮頸癌活檢組織中IL－17的表達情況，結(jié)果顯示從子宮頸上皮內(nèi)瘤變到子宮頸癌的進展過程中，IL－17的表達明顯增加。綜上所述，IL－17的過表達可能在子宮頸癌及其癌前病變的發(fā)生、發(fā)展過程中起重要的作用。

本實驗運用免疫組化方法檢測了子宮頸上皮內(nèi)瘤變組織及正常子宮頸對照組織中IL－17的表達情況，實驗結(jié)果顯示，IL－17主要在子宮頸鱗狀上皮（CIN病變組織）細胞的胞漿表達，在正常子宮頸對照組織中不表達，而且在CIN病變組織中IL－17高表達的陽性率隨著CIN病變級別的增高而逐漸增高，提示IL－17可能參與了子宮頸上皮內(nèi)瘤變的發(fā)生及發(fā)展，但本研究不能說明IL－17的表達變化是原發(fā)性還是繼發(fā)于與其有關(guān)的分子的表達。IL－17在腫瘤細胞中表達的現(xiàn)象在其他研究中也有提出：Chang等［13］發(fā) 現(xiàn) IL－17 在 非 小 細 胞 性 肺 癌 （NSCLC）腫瘤細胞胞漿中有表達，而在正常組織中沒有表達，我們推測病變的腫瘤細胞可能產(chǎn)生IL－17，也就是說，IL－17可能參與了宮頸腫瘤的發(fā)生或發(fā)展。但是，由于免疫組化方法的局限性，還需使用其它方法，如mRNA的表達，并擴大樣本量對這一觀察結(jié)果進行證實。

總之，IL－17作為炎癥相關(guān)性腫瘤微環(huán)境中的重要因子，可能與子宮頸癌癌前病變的發(fā)生或發(fā)展有關(guān)。IL－17與子宮頸癌及其癌前病變病情進展和患者預(yù)后的關(guān)系，以及同其他細胞因子的相互作用有待進一步研究。對IL－17的進一步研究有可能使IL－17成為評價子宮頸癌及其癌前病變病情和治療療效的一個新的免疫學指標。相關(guān)的臨床應(yīng)用及標準方案都尚未見明確報道，因此，深入研究IL－17家族及其相關(guān)的信號轉(zhuǎn)導通路在CIN病變中的作用很有前途，可能為闡明子宮頸癌及其癌前病變的發(fā)生和發(fā)展提供分子機制，也可能為靶向性生物治療開辟新的思路。

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