黃 為 (潛江市衛(wèi)生局衛(wèi)生監(jiān)督局，湖北 潛江 433100)

胡曉立 (潛江市中心醫(yī)院外一科，湖北 潛江 433100)

肝細胞肝癌中HBX趨化因子受體CXCR4及配體CCR7與MMP9的相關性分析

黃 為 (潛江市衛(wèi)生局衛(wèi)生監(jiān)督局，湖北 潛江 433100)

胡曉立 (潛江市中心醫(yī)院外一科，湖北 潛江 433100)

目的：觀察趨化因子受體CXCR4及配體CCR7與基質(zhì)金屬蛋白酶9(matrix metalloproteinase，MMPs)在肝細胞肝癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)中的表達和臨床病理學意義。方法：用免疫組織化學法檢測HCC組織40例中CXCR、CCR7和MMP9表達，并將上述檢測結(jié)果結(jié)合臨床資料進行相關性分析。結(jié)果：40例癌組織中20例呈CXCR4高表達，19例呈CCR7高表達，23例MMP9高表達，CXCR、CCR7和MMP9在HCC中，均與HCC病理分級和門靜脈癌栓以及復發(fā)轉(zhuǎn)移有明顯正相關；CXCR、CCR7均與MMP9呈明顯正相關。結(jié)論：CXCR、CCR7聯(lián)合 MMP9可以作為評估HCC惡性程度和復發(fā)轉(zhuǎn)移的腫瘤標志物。

原發(fā)性肝癌；趨化因子受體CXCR4；趨化因子受體配體CCR7；基質(zhì)金屬蛋白酶9；病理分型

肝細胞肝癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)是常見的惡性腫瘤,其發(fā)病率在全世界高居第5位，病死率高[1]。通過有效的腫瘤標志物判斷HCC的惡性程度，進行針對性的診治在近年來越來越受到重視。研究顯示，趨化因子受體CXCR4與其配體CCR7構成的生物學軸與多種腫瘤的趨向性侵襲、轉(zhuǎn)移及預后相關。基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinase，MMPs)9可降解腫瘤細胞基底膜和細胞外基質(zhì)的蛋白成分，瘤細胞周圍基底膜通透性和運動能力發(fā)生變化[2]，從而改變腫瘤細胞的轉(zhuǎn)移潛能。然而，CXCR4及其配體CCR7與MMP9的相關性卻尚不明確。我們將探究人HCC標本中CXCR4/CCR7和MMP9的表達及臨床意義，并進一步分析其相關性，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1 材料與方法

1.1材料

選取2005年9月至2010年10月潛江市中心醫(yī)院HCC患者腫瘤手術切除標本40例，患者年齡30～72歲，平均年齡52歲，術前均未行任何治療，病理學診斷均為肝細胞肝癌。

兔抗人CXCLl2、CXCR4、MMP2和MMP9多克隆抗體、羊抗兔二抗均購自武漢三鷹公司， SP試劑盒、DAB顯色劑均購自武漢博士德公司。

1.2方法

標本石蠟包埋，0.4μm連續(xù)切片。切片常規(guī)脫蠟，抗原微波修復，羊血清封閉，CXCLl2(1∶200)、CXCR4(1∶200)、MMP2(1∶100)和MMP9(1∶100)孵育；生物素化標記二抗IgG孵育；鏈親和素過氧化物酶標記三抗孵育；DAB顯色；蘇木精復染。PBs代替一抗作為陰性對照。

由2名病理科醫(yī)生以隨機、雙盲原則評定染色結(jié)果。以胞膜和胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)淡黃至棕褐色顆粒為陽性，光鏡下隨機選取5個視野(× 400)，以平均50%以上細胞定位明確、染色明顯的組織切片視為高表達組，低于50%為低表達組。

1.3統(tǒng)計學分析

統(tǒng)計學分析數(shù)據(jù)用SPSSI3.0統(tǒng)計軟件包進行非參數(shù)秩和檢驗，χ2檢驗和Spearman rho相關性分析。Plt;0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

2.1病理組織學觀察結(jié)果

所有患者血清HBVAg均為陽性。患者臨床病理特點見表1，癌旁組織標本作為對照。

表1 CXCR4/CCR7和MMP9的表達及臨床意義

2.2CXCR4/CCR7和MMP9在HCC中的表達情況

CXCR4、CCR7和MMP9均表達于癌細胞的細胞膜和細胞質(zhì)，呈淡黃色至棕黃色，胞核為藍色。在癌周基質(zhì)內(nèi)有時也可見弱染色。在40例HCC標本中，有20例CXCR4染色陽性(50.0%)；臨床高病理分級HCC中CXCR4表達明顯增加(Plt;0.01)、復發(fā)轉(zhuǎn)移和門靜脈癌栓發(fā)生的病例中，CXCR4表達明顯增多(Plt;0.01)。CCR7染色陽性19例(47.5%)，MMP9染色陽性23例(57.5%)，CCR7和MMP9的表達與HCC臨床病理聯(lián)系與CXCR4有相同的趨勢，差異有統(tǒng)計學意義(Plt;0.01)。癌旁組織標本均未見CXCR4、CCR7和MMP9的明顯表達(見圖1～圖3、表1)。

圖1 CXCR4的表達情況(×200)

圖2 CCR7表達情況(×200)

圖3 MMP9表達情況(×200)

2.3CXCR4/CCR7與MMP9在HCC中相關性分析

CXCR4蛋白表達和MMP9蛋白表達明顯正相關(r=0.556，P=0.000)，見表2。CCR7蛋白表達和MMP9蛋白表達明顯正相關(r=0.413，P=0.008)，同CXCR4蛋白表達呈正相關(r=0.951，P=0.000)。

表2 CXCLl2/CXCR4和MMP2/MMP9 相關性分析

3 討 論

CXCR4是CXC家族趨化因子的重要受體，CCR7是其配體，兩者具有高度的特異性和親和力。有研究證實，CXCR4-CCR7構成的生物軸通過調(diào)節(jié)惡性腫瘤如乳腺癌、肝癌、胃癌等的血管生成，直接活化腫瘤細胞，引導腫瘤細胞遷移到特定部位，從而在這些腫瘤的生長、轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮重要作用。本研究發(fā)現(xiàn)，HCC組織中CXCLl2和CXCR4蛋白表達明顯高于肝硬化、正常肝組織，提示CXCR4蛋白在HCC惡性轉(zhuǎn)化中起重要作用，參與了腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移。本實驗中， CXCR4和CCR7表達和HCC的病理分級和門靜脈癌栓以及復發(fā)轉(zhuǎn)移呈明顯正相關，提示趨化因子受體CXCR4及其配體CCR7共同參與肝癌細胞的發(fā)展和遷移，同時，CXCR4和CCR7在HCC中顯著正相關?？梢?，CXCR4和CCR7可同時作為評估HCC病理發(fā)展程度和轉(zhuǎn)移預后的一種腫瘤標志物。

基質(zhì)金屬蛋白酶可降解很多種細胞外基質(zhì)(ECM)，是一個蛋白水解酶大家族[3]?；|(zhì)金屬蛋白酶9在腫瘤中，能降解變性膠原、彈性蛋白、肌蛋白等細胞外基質(zhì)成分，改變腫瘤細胞的運動能力，調(diào)節(jié)趨化、遷移速率[4]。既往研究發(fā)現(xiàn)，MMP9與HCC的病理類型和轉(zhuǎn)移潛能有關，MMP9可以作為反映HCC惡性程度的重要指標[5]，這一結(jié)果在本研究中也得到證實。本研究進一步證實，在HCC中， MMP9和門靜脈癌栓明顯相關。本研究結(jié)果還發(fā)顯示，在CXCR4/CCR7高表達的HCC中，MMP9高表達，且呈顯著正相關。

CXCR4/CCR7和MMP9蛋白表達在HCC組織中均與病理類型、門靜脈癌栓以及復發(fā)轉(zhuǎn)移明顯相關，這提示CXCR4/CCR7蛋白可能通過某些通路對MMP9的表達進行調(diào)控而導致HCC的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移。然而，具體CXCLl2/CXCR4和MMP9/MMP2之間在HCC中的確切聯(lián)系及始動因素、調(diào)控因素以及與其他細胞因子與信號通路的相關作用等還需要更多的體外實驗和裸鼠模型來證實。但是，通過在HCC標本的CXCR4/CCR7和MMP9的表達和相關性分析，仍然為HCC的惡性程度評估提供了有效的標志物組合，也為我們進一步探討HCC的早期診斷、發(fā)展和預后提供了一定的線索。

[1]Schrader J,Gordon-Walker T T,et al.Matrix stiffness modulates proliferation,chemotherapeutic response,and dormancy in hepatocellular carcinoma cells[J].Hepatology，2011，53(4)：1192-1205.

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[編輯]一 凡

10.3969/j.issn.1673-1409(R).2012.03.002

R735.7；R361.3

A

1673-1409(2012)03-R003-03

2012-02-10

黃為(1969-)，男，湖北潛江人，主治醫(yī)師，主要從事肝膽外科臨床工作;通訊作者：胡曉立，E-mail: winterhxl@sina.com。