魏偉明，葉加建，邵美英

(福建省老年醫(yī)院，福建福州350003)

急性腦梗死(ACI)致殘率高，不但給患者帶來痛苦，而且給家庭和社會帶來沉重的負擔。ACI患者常伴有纖溶系統(tǒng)功能失調(diào)或障礙，易發(fā)生血液學的多種改變。為了解急性ACI患者的血漿P－選擇素水平和血小板聚集功能的變化，我們應用ELISA法對58例ACI患者治療前后進行血漿P－選擇素水平檢測，同時測定其血小板聚集功能，探討P－選擇素和血小板聚集功能與ACI的關(guān)系，以及P－選擇素與血小板聚集功能的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 研究對象

①急性ACI組:58例急性ACI患者均為本院2008年2月～2008年12月在神經(jīng)內(nèi)科住院患者。其中男45例，女13例，平均年齡在64±7歲，均由我院神經(jīng)內(nèi)科經(jīng)臨床明確診斷的急性腦梗死病人。②正常對照組:30例，男20例，女10例，均為我院體檢中心經(jīng)健康體檢合格的正常人，無高血壓、心、腦、血管疾病，也無內(nèi)分泌疾病或其它慢性疾病，近期未曾服用任何溶栓、抗凝、抗血小板藥物。

1.2 標本采集

用塑料注射器抽取肘靜脈血(空腹)6ml，平分于兩個標準塑料試管中，分別以109mmol/L枸櫞酸鈉1∶9抗凝。用來檢測P－選擇素的標本，平衡后置TDL－5A離心機內(nèi)3000轉(zhuǎn)/min離心15min，直接吸取上層血漿進行檢測。用來檢測血小板聚集功能的標本，先置室溫一段時間，讓紅細胞自然沉降，吸取上層的富血小板血漿于標準塑料管內(nèi)備用，然后將標本置TDL－5A離心機內(nèi)3000轉(zhuǎn)/min離心15min制備貧血小板血漿，準備完畢后再行檢測。

1.3 血漿P－選擇素測定

采用雙抗體夾心ELISA法測定血漿P－選擇素濃度，酶免試劑盒由上海太陽生物技術(shù)公司提供，酶標儀為美國 BIO－RAD 550型，測定波長為405mm，操作過程嚴格按照試劑盒說明書。

1.4 血小板聚集功能測定

儀器采用北京普利生公司提供的LBY－NJ2型血液凝聚儀，誘導劑為 40μM的二磷酸腺苷(ADP)、15mM的花生四烯酸(AA)，由北京普利生公司提供。檢測方法為比濁法，操作嚴格按儀器操作說明書進行。

1.5 統(tǒng)計學處理

2 結(jié)果

2.1 兩組血漿P－選擇素和血小板最大聚集率的比較

急性ACI患者血漿P－選擇素水平和血小板最大聚集率均明顯高于正常對照，兩者均存在顯著性差異(P＜0.01)。(見表1)

表1 兩組血漿P－選擇素和血小板最大聚集率檢測結(jié)果(s)

表1 兩組血漿P－選擇素和血小板最大聚集率檢測結(jié)果(s)

與正常對照組比較，*P＜0.01

30 9.89±2.66 42.10±4.76 48.40±4.58急性ACI組 58 26.75±4.87* 76.21±5.98* 80.85±4.96誘導劑正常對照組組 別 n P－選擇素(ng/L)血小板最大聚集率(%)ADP誘導劑 AA*

2.2 急性ACI患者治療前后血漿P－選擇素和血小板最大聚集率比較

急性ACI患者治療后(住院治療7d)血漿P－選擇素水平和血小板最大聚集率與治療前相比均有顯著性降低(P＜0.01)，但與正常對照組相比均仍有顯著性差異(P＜0.01)。(見表2)

表2 治療前后血漿P－選擇素和血小板最大聚集率檢測結(jié)果(s)

表2 治療前后血漿P－選擇素和血小板最大聚集率檢測結(jié)果(s)

與正常對照組比較，*P＜0.01;與治療前比較，▲P＜0.01

誘導劑正常對照組組 別 n P－選擇素(ng/L)血小板最大聚集率(%)ADP誘導劑 AA 30 9.89±2.66 42.10±4.76 48.40±4.58 ACI治療前 58 26.75±4.87* 76.21±5.98* 80.85±4.96*ACI治療后 58 16.82±4.07＊▲ 58.22±4.27＊▲ 60.22±4.37＊▲

2.3 急性ACI患者治療前血漿P－選擇素和血小板最大聚集率的相關(guān)性分析

經(jīng)統(tǒng)計學處理，急性ACI患者治療前的血漿P－選擇素水平與ADP誘導的血小板最大聚集率、AA誘導的血小板最大聚集率呈明顯的正相關(guān)關(guān)系(P＜0.01)。

3 討論

急性ACI是一種血小板血栓性的腦血管病。動脈粥樣硬化(AS)和血栓形成是ACI發(fā)生、發(fā)展的主要原因，血小板的活化和炎癥反應在ACI發(fā)生、發(fā)展中起著重要作用。P－選擇素存在于靜息的血小板膜表面，介導細胞與細胞、細胞與基質(zhì)間黏附作用，參與炎癥、AS和血栓形成［1］。P－選擇素是一種分子量為14000的黏附蛋白，當血小板活化時，а－顆粒與胞漿膜結(jié)合，P－選擇素顯露于胞漿膜表面，并隨著血小板的破壞釋放入血，另有部分血小板質(zhì)膜上的P－選擇素脫落至血漿中，成為血漿中P－選擇素的來源。因此血漿內(nèi)P－選擇素是血小板活化的最特異的分子標志物［2］，常用以表達血小板的活化程度。研究表明［3］，P－選擇素不僅對血小板黏附起作用，而且對血小板的聚集也具有重要作用。活化的P－選擇素使血小板與中性粒細胞相互激活，活化的中性粒細胞通過釋放Cathepsin G和彈力酶誘發(fā)血小板活化和促進血小板聚集。在血栓形成中，血小板尚通過對中性粒細胞和單核細胞而放大其血栓形成的作用。血小板聚集是血小板參與血栓形成的重要環(huán)節(jié)，也是血小板活化的標志之一。

本研究結(jié)果顯示:急性ACI患者血漿P－選擇素水平和血小板最大聚集率均明顯高于正常對照組，治療后(住院治療7d)血漿P－選擇素和血小板最大聚集率與治療前相比均有顯著性降低，但仍高于對照組;ACI患者血漿P－選擇素與血小板最大聚集率呈明顯的正相關(guān)。說明急性ACI患者體內(nèi)血小板處于高度活化狀態(tài);治療后仍顯著高于對照組，可能是ACI患者發(fā)病7d時血小板的活化不能完全被抑制，仍處于功能活躍狀態(tài)，還需要一定時間的抗血小板活性藥物進行持續(xù)性抗栓治療;通過對急性ACI組與對照組的血小板最大聚集率檢測對照，說明急性腦梗時血小板不僅被高度活化，活化的血小板促進了血小板發(fā)生黏附、聚集，使聚集功能大大增強，兩者呈平行正相關(guān)，具有啟動血栓形成并使已形成的血栓繼續(xù)擴大化，這是急性ACI發(fā)生的重要病理基礎(chǔ)。

研究提示，急性ACI患者血漿中存在著P－選擇素的高水平表達現(xiàn)象，血小板聚集功能增強，應及時選用抗血小板活性藥物進行持續(xù)性抗栓治療，并適當配合降纖、抗纖溶藥物治療，防止血栓的進一步擴大化。同步測定血漿P－選擇素和血小板聚集，不僅可以了解血小板的釋放功能，還可以了解其聚集功能，具有互補作用。因此，通過檢測血漿P－選擇素和血小板聚集的變化，可作為ACI患者病情判定以及治療效果觀察的指標，對了解病情及觀察預后具有十分重要的臨床價值。

［1］董德平，錢開成，于銀坤.糖尿病患者P－選擇素檢測的臨床意義［J］.上海醫(yī)學檢驗雜志，2000，15(3):165

［2］Abela GS，Huang R，Ma H，et al.Laser－light scattering，a new method for continuous monitoring of platelet activation in circulation fluid ［J］.Lab Clin Med，2003，141(1):50

［3］Merten M，Thiagarajan P.P－selectin expresion on platelets determines size and stability of platelet aggregates［J］.Circulation，2005，102(1):193