張秀環(huán)，胡昌江，戴德蓉，馮 健

(四川新綠色藥業(yè)科技發(fā)展股份有限公司藥物研究所，四川 成都 611930)

赤芍為毛茛科植物芍藥 Paeonia lactiflora Pall.或川赤芍Paeonia veitchii Lynch.的干燥根，性微寒、味苦，具有清熱涼血、散瘀止痛之功效[1]。赤芍的主要有效成分為芍藥苷、芍藥內酯苷、氧化芍藥苷等多種苷類物質，總稱為赤芍總苷，其中芍藥苷為赤芍中含量較高的主要有效成分之一[2]?，F代藥理研究表明，赤芍具有多種藥理功能，主要作用于心血管系統(tǒng)，還具有抗腫瘤、抗內毒素等[3-4]功效。赤芍配方顆粒由芍藥或川赤芍中藥飲片經現代制藥工藝提取、濃縮、干燥、制粒而成，目前其質量標準研究未見文獻報道，國家也尚未出臺中藥配方顆粒標準。為給國家制訂赤芍配方顆粒質量標準提供參考，也為有效控制赤芍配方顆粒的質量，筆者參照2010年版《中國藥典(一部)》方法，并對其加以改進，采用薄層層析(TLC)法建立了定性方法，采用高效液相色譜(HPLC)法建立了含量測定方法，現報道如下。

1 儀器與試藥

Linomat 5_17065 CAMAG(瑞士制造);170513 CAMAG TLC visualizer(瑞士制造);Agilengt 1200型高效液相色譜儀;Agilengt 1200化學工作站;BP-211D型電子天平(德國Satorius);KQ3200B型超聲波清洗器(昆山市儀器有限公司)。芍藥苷對照品(批號為0736-9912，中國藥品生物制品檢定所);赤芍購自河北安國中藥材市場，經成都中醫(yī)藥大學藥學院胡昌江教授鑒定為毛茛科植物芍藥 Paeonia lactiflora Pall.的干燥根。赤芍配方顆粒(四川新綠色藥業(yè)科技發(fā)展股份有限公司);乙腈(色譜純，迪馬公司 )，水為重蒸水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 定性鑒別

取本品顆粒1 g，加乙醇20 mL使溶解，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇1 mL使溶解，作為供試品溶液。精密稱取在五氧化二磷減壓干燥器中干燥36 h的芍藥苷對照品，加乙醇制成每1 mL含2 mg的溶液，作為對照品溶液。取赤芍藥材2 g，加乙醇20 mL使溶解，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇1 mL使溶解制成對照藥材溶液。另取赤芍配方顆粒的陰性對照品3.0 g，照供試品溶液的制備方法，制成陰性對照品溶液。照薄層色譜法2010年版[《中國藥典(一部)》附錄ⅥB]試驗，吸取上述4種溶液各10μL，分別點于同一硅膠 G薄層板上，以氯仿-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(40∶5∶10 ∶0.2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，加熱至斑點顯色清晰，置日光下檢視。供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液色譜相應位置上顯相同的藍紫色斑點，陰性對照品溶液色譜圖則無此斑點(見圖 1)。

圖1 赤芍薄層色譜圖

2.2 含量測定

2.2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱:Phenomenex C18柱(150 mm×4.60 mm，5μm);流動相:乙腈-0.1%磷酸(14∶86);流速:1.0 mL/min;檢測波長:230 nm;柱溫:35℃。在此條件下，赤芍配方顆粒中芍藥苷的分離度好，理論板數較高，峰形對稱性好。色譜圖見圖2。

圖2 高效液相色譜圖

2.2.2 溶液制備

精密稱取經五氧化二磷減壓干燥器中干燥36 h的芍藥苷對照品1.7 mg，置10 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，微孔濾膜(0.45μm)過濾，取續(xù)濾液，即得對照品溶液。取赤芍配方顆粒(批號為090401)約0.1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇溶液50 mL，稱定質量，超聲處理30 min，冷卻至室溫，再稱定質量，用甲醇補足減失的質量，搖勻，濾紙過濾，濾液用微孔濾膜(0.45μm)過濾，取續(xù)濾液即得供試品溶液。

2.2.3 方法學考察

標準曲線繪制:分別精密吸取芍藥苷對照品溶液(0.485 g/mL)0.5，1.0，2.0，5.0，10.0 μL，依次進樣，測定峰面積。以進樣量(X)為橫坐標、峰面積為縱坐標(Y)進行線性回歸，得回歸方程Y=1 289.2 X-2.165 2，r=0.999 97(n=5)。結果表明，芍藥苷進樣量在0.243～4.850μg范圍內與峰面積線呈良好線性關系。

精密度試驗:精密吸取對照品溶液(0.17 g/L)10μL，連續(xù)進樣6次，測定峰面積。結果芍藥苷峰面積平均值為2 657，RSD為1.93%(n=6)，表明儀器精密度良好。

重復性試驗:稱取同一批樣品(批號為090401)，精密稱定，依法制備供試品溶液，共6份，測定峰面積。結果的 RSD為0.42(n=6)，表明方法重現性良好。

穩(wěn)定性試驗:精密吸取對照品溶液(0.17 g/L)和供試品溶液各 10 μL，置室溫下放置，分別于 0，2，4，6，8，10 h 時進樣，按擬訂的色譜條件測定峰面積。結果對照品溶液的 RSD為1.03(n=6)，供試品溶液的 RSD為0.60(n=6)，表明對照品溶液和供試品溶液在10 h內基本穩(wěn)定。

加樣回收試驗:精密稱取已知含量的供試品溶液(批號為090401)6份，分別精密加入對照品溶液適量，按供試品溶液制備方法和測定方法，在上述條件下測定含量。結果見表1。

表1 芍藥苷加樣回收試驗結果(n=6)

2.2.4 樣品含量測定

分別取不同批號的赤芍配方顆粒約0.1 g，精密稱定，依法制備供試品溶液，分別進樣10μL，按擬訂的色譜條件測定芍藥苷峰面積，計算芍藥苷含量。結果批號分別為091116，0909111，1012046，1012050，081201，090401，090501 的樣品中芍藥苷含量分別為 52.95，52.62，50.16，47.09，77.63，77.63，77.63 mg/g。7批樣品含量測定結果顯示，芍藥苷含量在47.09～77.63 mg/g之間，建議本品質量標準中芍藥苷含量不得少于40 mg/g。

3 討論

采用薄層色譜法對赤芍配方顆粒進行定性鑒別。2010年版《中國藥典(一部)》赤芍薄層色譜[鑒別]項下，供試品的處理方法采用振搖提取。為了適應配方顆粒制備工藝的要求，本研究在藥典方法的基礎上加以改進，供試品采用超聲提取30 min，以便赤芍的有效成分充分溶出。同時，以芍藥苷對照品和赤芍對照藥材作為參照，相關性強，說明了赤芍配方顆粒制備工藝的合理。經多批樣品的重復試驗，證明該薄層色譜法簡便、靈敏、專屬性強，可用于樣品的定性鑒別。

本研究對赤芍配方顆粒進行了多展開系統(tǒng)的薄層色譜考察。在其他條件相同的情況下，以三氯甲烷-甲醇-醋酸乙酯(5∶1)展開系統(tǒng)進行對比試驗，結果也能將芍藥苷較好分離，但薄層色譜圖譜上斑點比較少，不能將其他成分有效分離。

現行藥典以甲醇-0.05 mol/L磷酸二氫鉀(40∶65)為流動相，芍藥苷分離度、理論板數均較好，但峰拖尾現象較嚴重。本研究以乙腈-0.1%磷酸溶液(14∶86)為流動相，色譜柱Phenomenex C18柱 (150 mm ×4.6 mm，5μm)為固定相，對樣品進行分析，分離度好，理論板數較高，峰形對稱性好。

中藥配方顆粒作為單味中藥濃縮制成的顆粒劑，其標準與一般的顆粒劑比較，應更加完善。只有提高配方顆粒的質量標準，才能顯示其與一般顆粒劑或傳統(tǒng)飲片的不同之處，才能保證其內在質量。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:化學工業(yè)出版社，2010:147-148.

[2]阮金蘭，趙鐘祥.赤芍化學成分和藥理作用的研究進展[J].中國藥理學通報，2003，19(9):965-970.

[3]冀蘭鑫，黃 浩.赤芍藥理作用的研究進展[J].藥物評價研究，2010，33(3):233-236.

[4]劉 超，王 靜.赤芍總甙活血化瘀作用的研究[J].中藥材，2000，23(9):557.

[5]張海燕.免煎中藥配方顆粒的臨床應用[J].華北煤炭醫(yī)學院學報，2010，12(4):496-498.