胡軼娟 程 林 浦錦寶 梁衛(wèi)青 鄭軍獻 魏克民

土圞兒為豆科植物土圞兒Apios fortunei Maxim．的干燥塊根，浙江省民間用藥。其性涼，味甘、微苦，性平，無毒，具有清熱解毒、活血止痛、祛風化痰、消腫等功效。土圞兒中的化學成分有生物堿、淀粉等，其中生物堿是一類重要的生理活性物質?！顿F州民間草藥》:“散積，理氣，解毒，補脾”?！度珖胁菟巺R編》:“清熱解毒，化痰止咳”?！顿F州藥植調查》:“治蛇咬傷，并治療癀，去毒”［1］?？捎糜诟忻翱人?，百日咳，咽喉腫痛，疝氣，癰腫，瘰疬。由于其為地方藥材，到目前為止，對它進行的研究并不多。在已見的報道中，主要對土圞兒的原植物形態(tài)、藥材性狀、顯微特征等進行了初步研究。本研究采用系統(tǒng)溶劑萃取法，從土圞兒植物塊根中得到石油醚萃取物，并用氣相色譜－質譜聯(lián)用儀對土圞兒塊根石油醚萃取物化學組分進行定性研究。分析鑒定了11個化學成分，為其藥效評價和應用提供科學依據(jù)。

材料與方法

1．儀器和試藥:美國Varian公司450GC－240MS氣相色譜－質譜聯(lián)用儀，Varian CP Sil 24CB氣相色譜柱(30m×0.25mm，0.25μm)，土圞兒采自浙江磐安，經鑒定為豆科植物土圞兒Apios fortunei Maxim的干燥塊根。石油醚(60～90℃)為國產分析純試劑，BSTFA∶TMCS(99∶1)購于美國REGIS公司(批號:CFCQ－270121)。

2．方法［2～11］:(1)石油醚萃取物的制備:取土圞兒藥材6kg，粉碎成粗粉，加8倍量95%乙醇加熱回流提取3次，每次2h，提取液減壓回收乙醇至無醇味，加熱水至2L成混懸液，用石油醚(60～90℃)萃取3次，每次2L，回收石油醚，得石油醚萃取物86．86g。收率為1．45%。(2)供試品溶液的制備:取石油醚萃取物適量，加環(huán)己烷溶解成6mg/ml溶液，取5ml置具塞試管中，氮吹至干，加入 BSTFA∶TMCS(99∶1)試劑0.5ml，加蓋密封后，振搖 30s，于 80℃烘箱反應 1h，取出，放冷，即得。(3)GC－MS條件:毛細管色譜柱(30m×0．25mm，0．25μm)。汽化溫度250℃;程序升溫，初始溫度 50℃，保持2min，以4℃/min的速度升溫至200℃，保持10min，再以5℃/min的速度升溫至250℃，保持20min;載氣為高純氦氣，流量1m l/min;進樣量1μl;分流比 1∶20。EI電離源，70eV;離子源溫度220℃;掃描質量范圍(m/z)50～1000。(4)石油醚萃取物的化學成分分析:對總離子流圖中的各峰經質譜掃描后得到質譜圖，通過工作站N IST標準質譜圖庫進行檢索，并結合有關文獻進行人工檢索和解析，確認各化合物。通過工作站數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，按峰面積歸一化法計算各化合物在揮發(fā)油中的相對百分含量。

結 果

本實驗對未衍生化前的石油醚萃取物進行GC分析，結果檢測到的色譜峰較少，且強度低，表明石油醚萃取物中的各化學成分主要為非揮發(fā)性成分，運用BSTFA∶TMCS(99∶1)衍生化后，揮發(fā)性增強，檢測到較多的色譜峰，且強度增大，見圖1。

圖1 衍生化前(上圖)后(下圖)土圞兒石油醚萃取物的GC色譜圖

比較 了 Varian CP Sil 5CB(30m ×0．25mm，0.25μm)、8CB(30m ×0．25mm，0．25μm)、24CB(30m ×0．25mm，0．25μm)和 HP － INnowax Polyethylene Glycol色譜柱(30m ×0．32mm，0．25μm)4 種色譜柱，結果Varian CP Sil 24CB的分離效果最佳。對氣相色譜程序升溫條件進行了考察，最終確定上述程序升溫條件下分離度較好，峰數(shù)較多。通過GC－MS聯(lián)用技術分析了土圞兒石油醚萃取物中的成分，通過計算機質譜庫檢索，共鑒定出11個化合物，采用峰面積歸一定量法，求得各化合物的相對百分含量。土圞兒石油醚萃取物中主要成分及相對含量見表1，總離子圖見圖2。

表1 土圞兒石油醚提取物中的化學成分及相對含量

圖2 土圞兒石油醚萃取物的總離子圖

討 論

從石油醚萃取物中檢出16個色譜峰，鑒定出11個化合物，占石油醚萃取物總量的68．75%。其中，有機酸類成分6個(54．54%)，肌醇的3種同分異構體(27．27%)，另外還有 α －D － 葡萄糖苷(9．09%)、色氨酸(0．29%)。在鑒定的成分中，α－D－葡萄糖苷的相對含量最高，占57．18%?？赡苁峭翀K兒中淀粉和多糖類成分含量較高，萃取過程中有部分淀粉和多糖帶入萃取物中。在鑒定出的11個成分中，6個為有機酸類成分，其中2個為不飽和脂肪酸，9，12－十八碳二烯酸的相對含量較高，為14．81%。從石油醚萃取物中檢測出肌醇的3種同分異構體，廣泛分布在動物和植物體內。肌醇(MYO)是環(huán)已六醇中9種立體異構體的一種，屬于維生素B族。MYO在細胞形態(tài)發(fā)生和生成、脂質合成、細胞膜的結構以及細胞生長方面起著極其重要的作用［12］。從石油醚萃取物中檢出16個色譜峰，鑒定出11個化合物，另外5個色譜峰在10～40min之間，在N IST標準質譜圖庫未能找到相應的化合物，有待于進一步的研究。通過與空白圖譜對照，表明在50～70min之間未鑒別的色譜峰為BSTFA∶TMCS(99∶1)衍生劑的絡合物。本實驗對土圞兒石油醚萃取物進行了體外抗腫瘤實驗，發(fā)現(xiàn)濃度為 50μg/ml、100μg/ml時對 HepG2細胞株的抑制率分別為31．8%、52．4%，有一定的抑制作用。其他的生物活性還有待于進一步研究。

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