劉 杰，郁宏燕，鮑立杰，羅 焱

(昆山市流通領(lǐng)域食品質(zhì)量檢測中心，江蘇 昆山 215300)

液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定飲料中16種鄰苯二甲酸酯

劉 杰，郁宏燕，鮑立杰，羅 焱

(昆山市流通領(lǐng)域食品質(zhì)量檢測中心，江蘇 昆山 215300)

建立同時檢測飲料中16種鄰苯二甲酸酯的液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用檢測方法。用甲醇提取飲料中的鄰苯二甲酸酯，采用Aglilent Eclipse plus C18柱(2.1mm×150mm，3.5μm)，以0.1%甲酸的甲醇溶液＋0.1%甲酸溶液作為流動相，梯度洗脫，質(zhì)譜檢測器檢測，多反應(yīng)監(jiān)測定量。方法檢出限為0.005～0.051mg/kg，回收率為89.1%～105.1%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.8%～4.1%，可以滿足飲料中鄰苯二甲酸酯的檢測要求。

鄰苯二甲酸酯；液相色譜-質(zhì)譜；飲料

2011年5月，從臺灣飲料業(yè)開始的“塑化劑風(fēng)波”引起了社會各界的廣泛關(guān)注，不法分子用塑化劑生產(chǎn)食品添加劑“起云劑”，造成下游食品受到污染。截止2011年6月7日臺灣地區(qū)已公布受塑化劑污染企業(yè)279家，產(chǎn)品948種。衛(wèi)生部2011年第16號公告更是將塑化劑的主要成分鄰苯二甲酸酯(PAEs)列入《食品中可能違法添加的非食用物質(zhì)和易濫用的食品添加劑名單(第六批)》。鄰苯二甲酸酯類具有種類多、難以降解、生物富集性強的特點，對人體、生物體及植物均有較大的毒性，該類污染物對人類的危害主要表現(xiàn)在致癌、致畸性以及免疫抑制性，尤以人體生殖功能異常最為引人注目[1-6]。

據(jù)文獻報道，鄰苯二甲酸酯的檢測方法主要有光譜法[7]、氣相色譜法[8]、液相色譜法[9-11]、氣質(zhì)聯(lián)用法[12-15]、液質(zhì)聯(lián)用法等[16-17]。國內(nèi)文獻以氣質(zhì)聯(lián)用法居多，并且很少有同時測定十多種鄰苯二甲酸酯的文獻報道。目前為止，食品方面的國家檢測標(biāo)準(zhǔn)也僅有氣質(zhì)聯(lián)用法一種[18]。本研究擬采用液高效相色譜(high performance liquid chromatography)質(zhì)譜(mass spectrometer)聯(lián)用法測定飲料中的鄰苯二甲酸酯，以期為其方法的建立提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

飲料 市售。

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：苯二甲酸二異丁酯(DIBP)、鄰苯二甲酸二丁酯(DBP)、鄰苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯(DMEP)、鄰苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯(BMPP)、鄰苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯(DEEP)、鄰苯二甲酸二戊酯(DPP-1)、鄰苯二甲酸二己酯(D H X P)、鄰苯二甲酸丁基芐基酯(BBP)、鄰苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯(DBEP)、鄰苯二甲酸二環(huán)己酯(DCHP)、鄰苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP)、鄰苯二甲酸二苯酯(DPP-2)、鄰苯二甲酸二正辛酯(DNOP)、鄰苯二甲酸二壬酯(DNP)，16種標(biāo)準(zhǔn)品均為Dr.Ehrenstorfer品牌，純度均大于99.5%。甲醇(HPLC級)、乙酸銨(GR)。

1.2 儀器與設(shè)備

1290-6410B液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用 美國Agilent公司； Direct-Q 純水儀 美國密理博公司。

1.3 方法

1.3.1 色譜條件

色譜柱：Aglilent Eclipse plus C18(2.1mm×150mm，3.5μm)；流動相：0.1%甲酸的甲醇溶液＋0.1%甲酸溶液；柱溫：3 0℃；進樣量：5 μL。

1.3.2 質(zhì)譜條件

操作模式：ESI正離子模式；干燥氣流量：10L/min；干燥氣溫度：350℃；毛細(xì)管電壓：4000V；噴霧壓力：30psi。

1.3.3 樣品處理

準(zhǔn)確稱取樣品5g(精確至0.01g)于25mL容量瓶中，加入約10mL甲醇，超聲波振蕩30min，平衡至室溫后用甲醇定容。用離心管離心后，取上清液待測。注意，本實驗所接觸的所有實驗器具均要求為玻璃材質(zhì)，并要求做全程溶劑空白實驗。

1.3.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

準(zhǔn)確稱取1.1節(jié)中所述16種標(biāo)準(zhǔn)品各10mg(精確至0.01mg)，用甲醇配成1000mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲備液，于4℃條件下密封保存。

將標(biāo)準(zhǔn)儲備液用甲醇稀釋成0.05、0.50、1.00、2.00、5.00mg/L的標(biāo)準(zhǔn)使用液，通過液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀測定，以多反應(yīng)監(jiān)測(multiple reaction monitoring，MRM)子離子峰面積對質(zhì)量濃度做標(biāo)準(zhǔn)定量曲線。

1.3.5 定性和定量

樣液經(jīng)液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀測定，通過保留時間及多反應(yīng)監(jiān)測MRM子離子相對豐度定性，標(biāo)準(zhǔn)曲線外標(biāo)法定量。

2 結(jié)果與分析

2.1 色譜和質(zhì)譜條件的優(yōu)化

2.1.1 色譜條件優(yōu)化

經(jīng)實驗可知，使用0.1%甲酸的甲醇溶液＋0.1%甲酸溶液體系，采用梯度洗脫的方式可以將16種鄰苯二甲酸酯較好的分離(梯度見表1)。

表1 HPLC流動相梯度洗脫條件Table 1 Mobile phase gradient program for HPLC analysi

2.1.2 質(zhì)譜條件優(yōu)化

將16種PAEs標(biāo)準(zhǔn)使用液進行質(zhì)譜全掃描，找到母離子，然后優(yōu)化傳輸電壓和碰撞能量，最后分6個時間段進行多反應(yīng)監(jiān)測，質(zhì)譜優(yōu)化條件參數(shù)見表2，多反應(yīng)監(jiān)測MRM離子流圖見圖1。本方法采用的分6個時間段進行MRM多反應(yīng)監(jiān)測，能最大程度的提高儀器靈敏度和準(zhǔn)確度，從而實現(xiàn)16種PAEs的同時測定，優(yōu)于其他文獻報道[16]。

表2 質(zhì)譜優(yōu)化條件Table 2 Optimized mass spectrometric parameters for 16 PAEs

圖1 多反應(yīng)監(jiān)測離子流圖Fig.1 MRM Ion current chromatograms of 16 PAEs

表3 線性關(guān)系和檢出限Table 3 Linear ranges and detection limits for 16 PAEs

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線、線性范圍和檢出限

按1.3.4節(jié)的方法制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到線性方程和相關(guān)系數(shù)，結(jié)果表明在相應(yīng)的線性范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好(表3)。取經(jīng)預(yù)先測定不含PAEs的飲料，添加低濃度PAEs后，以3倍信噪比計算檢出限，10倍信噪比計算定量限，結(jié)果見表3。

2.3 回收率與精密度

表4 回收率和精密度Table 4 Average recovery rates and precision RSD for 6 replication determinations

為了驗證方法的準(zhǔn)確度和精密度，對飲料樣品進行了高、中、低3個不同水平的標(biāo)準(zhǔn)添加回收實驗，每一水平分別做6份平行實驗，計算平均回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(relative standard deviation，RSD)，以回收率表示準(zhǔn)確度，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差表示精密度。結(jié)果表明(表4)，回收率為89.1%～105.1%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.8%～4.1%，方法回收率和精密度良好，能滿足檢測的要求。經(jīng)實驗比對，本方法回收率、重復(fù)性等實驗結(jié)果均優(yōu)于同等條件的國標(biāo)氣質(zhì)聯(lián)用法。

2.4 樣品測定

隨機購買10批次的國產(chǎn)飲料，采用本實驗建立的方法進行檢測。經(jīng)檢測，除有3批次飲料檢出0.33～0.89mg/kg的DEHP之外(低于GB 9685—2008《食品容器、包裝材料用添加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》最大遷移量要求，可能與包裝遷移有關(guān))，其他均低于方法檢出限，經(jīng)與GB/T 21911—2008《食品中鄰苯二甲酸酯的測定》檢測結(jié)果對比，檢測結(jié)果一致。

每次進樣完后，需長時間自動清洗進樣針以降低殘留。實驗發(fā)現(xiàn)，采用50%的甲醇溶液自動清洗進樣針5s以上便能滿足要求。

3 結(jié) 論

針對鄰苯二甲酸酯的檢測，國內(nèi)文獻以氣質(zhì)聯(lián)用法居多，并且很少有同時測定十多種鄰苯二甲酸酯的文獻報道。目前為止，食品方面的國家檢測標(biāo)準(zhǔn)也僅有氣質(zhì)聯(lián)用法一種，本實驗建立了同時檢測飲料中16種鄰苯二甲酸酯的液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法。方法檢測限為0.005～0.051mg/kg，回收率為89.1%～105.1%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.8%～4.1%，可以滿足飲料中鄰苯二甲酸酯的檢測要求。經(jīng)試驗比對，本方法回收率、重復(fù)性等實驗結(jié)果均優(yōu)于同等條件的國標(biāo)氣質(zhì)聯(lián)用法。

[1]柴麗月, 辛志宏, 蔡晶, 等. 食品中鄰苯二甲酸酯類增塑劑含量的測定[J]. 食品科學(xué), 2008, 29(7): 362-365.

[2]盧躍鵬, 胡筱靜, 方慧文, 等. 凝膠滲透色譜-氣相色譜/質(zhì)譜法測定塑料桶裝食用油中四種鄰苯二甲酸酯[J]. 糧食與油脂, 2008(11):31-38.

[3]PETERSEN J H, NAAMANSEN E T, NIELSEN P A, et a1. PVC cling film in contact with cheese: helath related to global mirgation and specific migration of DEHA[J]. Food Control, 1995, 12(2): 245-249．

[4]BALAFAS D, SHAW K J, WHITFIELD F B, et a1. Phthalate and adipate esters in Australian packaging materials[J]．Food Chemistry,1999, 65(3): 279-287.

[5]PETERSEN J H. Survey of diethyl hexyl phthalate olasticizer contamination of Danish milks[J]. Food Additives and Contaminants, 1991(8):701-706.

[6]KONSTANTIN C, CHINGIN K, GAMEZ G, et a1. Detection of diethyl phthalate in perfumes by extractive electrospray ionization mass spectrometry[J]. Ana1 Chem, 2009, 8(1): 123-129.

[7]張麗麗, 陳煥文, 李建強, 等. 鄰苯二甲酸酯類化合物檢測方法研究進展[J]. 理化檢驗, 2011, 47(2): 241-246.

[8]楊玉芳, 穆強, 鄢德利, 等. 氣相色譜法測定鄰苯二甲酸酯[J]. 化學(xué)研究, 2010, 21(5): 100-101.

[9]JEN J F. Determination ofthe phthalate estersfrom food contacted materials by on-line microdialysis and liquid chromatography[J]. Journal of Chromatography A, 2006, 1130(1): 28-30.

[10]姚衛(wèi)蓉, 俞曄, 閻微, 等. 食用油中鄰苯二甲酸酯污染物的測定方法及其污染程度研究[J]. 中國油脂, 2010, 35(6): 38-39.

[11]王睿, 雷鳴, 歐陽華學(xué), 等. 凝膠滲透一液相色譜法檢測食用油中3種鄰苯二甲酸酯類物質(zhì)[J]. 食品工業(yè), 2007(3): 58-59.

[12]邵棟梁. GC-MS法測定白酒中鄰苯二甲酸酯殘留量[J]. 化學(xué)分析計量, 2010(6): 33-34.

[13]盧春山, 李瑋, 屠海云, 等. 氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用測定食品中的鄰苯二甲酸酯[J]. 分析測試學(xué)報, 2010, 29(10): 1030-1040.

[14]王碩, 王琨, 朱華平, 等. 氣相色譜-質(zhì)譜法檢測食用油中的鄰苯二甲酸酯[J]. 食品研究與開發(fā), 2010, 31(9): 127-128.

[15]趙俊虹. 氣質(zhì)聯(lián)用法檢測塑料包裝西式火腿中鄰苯二甲酸酯類增塑劑[J]. 糧油加工, 2010(5): 131-133.

[16]劉超, 李來生, 王上文, 等. 液相色譜電噴霧質(zhì)譜聯(lián)用法測定飲料中的鄰苯二甲酸酯[J]. 色譜, 2007, 25(5): 766-767.

[17]王東輝, 李懿睿, 田玉平, 等. 食品包裝用塑料中八種鄰苯二甲酸酯的檢測方法[J]. 氨基酸和生物資源, 2010, 34(3): 83-86.

[18]GB/T 21911—2008 食品中鄰苯二甲酸酯的測定[S].

Determination of 16 Phthalate Esters in Drinks by HPLC-ESI-MS/MS

LIU Jie，YU Hong-yan，BAO Li-jie，LUO Yan
(Circulating Food Quality Supervision and Inspection Center of Kunshan, Kunshan 215300, China)

An HPLC-ESI-MS/MS method was developed for the simultaneous determination of 16 phthalate esters (PAEs)in drinks. Methanol was used to extract PAEs in drinks. The separation was performed on an Aglilent Eclipse plus C18 (2.1 mm ×150 mm, 3.5 μm) column with a gradient mobile phase mixture composed of water containing 0.1% fomic acid and methanol containing 0.1% fomic acid. A tandem mass detector was used for the detection and quantification of PAEs in the multiple reaction monitoring (MRM) mode. The results showed that the limit of detection of the developed method was in a range of 0.005－0.051 mg/kg. The average recovery rates of 16 PAEs across three spike levels were 89.1%－105.1% with relative standard deviation (RSD) of 0.8%－4.1%. This method could meet the requirements for the determination of PAEs in drinks.

PAEs；HPLC-ESI-MS/MS；drinks

TS207.3

A

1002-6630(2012)18-0211-05

2011-07-11

劉杰(1986—)，男，助理工程師，本科，主要從事食品檢驗分析研究。E-mail：liujiejienjut@163.com