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        兩種方法提取林蛙籽脂肪酸的氣-質(zhì)聯(lián)用分析

        2012-10-27 03:07:42李鐵純侯冬巖刁全平回瑞華
        食品科學(xué) 2012年18期
        關(guān)鍵詞:林蛙烯酸不飽和

        李鐵純,侯冬巖,刁全平,孫 博,回瑞華

        (鞍山師范學(xué)院化學(xué)系,遼寧 鞍山 114007)

        兩種方法提取林蛙籽脂肪酸的氣-質(zhì)聯(lián)用分析

        李鐵純,侯冬巖,刁全平,孫 博,回瑞華

        (鞍山師范學(xué)院化學(xué)系,遼寧 鞍山 114007)

        采用Bligh-Dyer提取法和Soxhlet提取法分別提取林蛙籽中的脂肪油,再進(jìn)行甲酯化處理,利用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀進(jìn)行分析。Bligh-Dyer法提取的脂肪油中檢測(cè)出27種脂肪酸,其中不飽和脂肪酸為16種,相對(duì)含量72.49%,二十碳四烯酸甲酯和二十碳五烯酸均為5.72%,二十二碳六烯酸為5.02%,亞油酸為8.89%,二十二碳六烯酸甲酯為5.72%。Soxhlet法提取的脂肪油中檢測(cè)出12種脂肪酸,其中不飽和脂肪酸6種,相對(duì)含量64.86%,油酸為21.99%,亞油酸為7.58%,二十碳五烯酸為5.22%。

        林蛙籽;脂肪酸;氣相色譜-質(zhì)譜

        林蛙(Rana chensinensis)俗稱田雞、哈士蟆等[1],是一種經(jīng)濟(jì)價(jià)值極高的兩棲動(dòng)物,廣泛分布于我國(guó)東北三省。林蛙屬于藥、食兩用的珍貴蛙種,林蛙的蛙籽具有很高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值,可用于制藥和保健食品,具有調(diào)節(jié)免疫、延緩衰老、壯陽、明目、調(diào)節(jié)血脂和預(yù)防婦女更年期綜合癥的作用[2]。近年來,對(duì)林蛙籽營(yíng)養(yǎng)成分中的甾類激素、氨基酸、微量元素[3-4]等有報(bào)道,而關(guān)于林蛙籽脂肪酸的研究少見報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)采用Bligh-Dyer提取方法和Soxhlet提取法分別對(duì)林蛙籽的脂肪油進(jìn)行提取[5-7],進(jìn)行甲酯化處理,利用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(gas chromatography-mass spectrometry,GCMS)對(duì)其進(jìn)行分析測(cè)定[8],分離鑒定其中的脂肪酸成分,為更好地開發(fā)和利用林蛙籽提供依據(jù)。

        1 材料與方法

        1.1 材料、試劑與儀器

        林蛙采自撫順林蛙養(yǎng)殖場(chǎng)。

        石油醚、正己烷、甲醇、氫氧化鈉、氯仿均為分析純。

        HP6890GC/5973MS型氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀 美國(guó)惠普公司;80-2B臺(tái)式離心機(jī) 上海安亭科學(xué)儀器廠;RE-52C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器 上海亞榮盛華儀器廠。

        1.2 方法

        1.2.1 樣品前處理

        將林蛙清洗后自然晾干,解剖取出蛙籽,干燥,研碎后備用。

        1.2.2 Bligh-Dyer法提取脂肪油

        稱取5.00g經(jīng)1.2.1節(jié)方法處理的蛙籽,放入250mL錐形瓶中,加入100mL甲醇,50mL氯仿,40mL蒸餾水,電磁攪拌10h放置過夜后,加入50mL氯仿,50mL蒸餾水,過濾后分液取下層有機(jī)相,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)回收氯仿,得油率為30.8%。

        1.2.3 Soxhlet提取法提取脂肪油

        稱取5.00g經(jīng)1.2.1節(jié)方法處理的蛙籽,放入濾紙筒中,再裝入索氏提取器中,加入100mL的石油醚,恒溫水浴70℃回流萃取5h,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)回收石油醚,得油率為32.4%。

        1.2.4 脂肪油的甲酯化

        分別將提取的脂肪油加入8.0mL正己烷,再加入4.0mL氫氧化鈉-甲醇溶液液(0.5mol/L),置水浴上70℃回流20min,取出冷卻移至刻度試管中,再加水10mL,超聲提取、離心、取上層清液,待做GC-MC分析。

        1.2.5 GC-MC條件

        色譜條件:色譜柱為彈性石英毛細(xì)管HP-5(25m× 0.20mm,0.33μm);進(jìn)樣口溫度:300℃;程序升溫:初始溫度100℃然后以10℃/min速率升溫至280℃(保持10min);分流比:50:1;進(jìn)樣量:0.4μL;載氣流量:1mL/min。

        質(zhì)譜條件:電子離子源、離子源溫度230℃、電離電壓70eV、電子倍增器電壓1988V、發(fā)射電流34.6μA、接口溫度150℃、質(zhì)量范圍為20~500m/z。

        1.2.6 測(cè)定方法

        取經(jīng)1.2.4節(jié)方法處理過的樣品0.4μL,用GC-MS進(jìn)行分析鑒定,通過G1701BA化學(xué)工作站數(shù)據(jù)處理系統(tǒng),檢索NIST 98譜圖庫,并分別與八峰索引及EPA/ NIH質(zhì)譜圖集的標(biāo)準(zhǔn)譜圖進(jìn)行對(duì)照[9],確定樣品中各個(gè)化學(xué)成分。通過G1701BA化學(xué)工作站數(shù)據(jù)處理系統(tǒng),按峰面積歸一化法進(jìn)行定量分析,分別求得各化學(xué)成分的相對(duì)含量。

        2 結(jié)果與分析

        表1 林蛙籽脂肪酸甲酯的組成及相對(duì)百分含量Table 1 Fatty acid methyl esters and relative contents in eggs of R. chensinensis

        樣品經(jīng)過GC-MS分析鑒定,得到林蛙籽脂肪酸甲酯的總離子流圖(圖1)。確認(rèn)的樣品中脂肪酸甲酯成分及相對(duì)含量見表1。

        表1表明,Bligh-Dyer法提取的林蛙籽脂肪油中共檢測(cè)出27種脂肪酸,其中不飽和脂肪酸16種,相對(duì)含量72.49%,二十碳四烯酸甲酯和二十碳五烯酸均為5.72%,二十二碳六烯酸為5.02%,亞油酸為8.89%,還檢測(cè)出二十二碳六烯酸甲酯為5.72%。Soxhlet法提取的脂肪油中檢測(cè)出12種脂肪酸,其中不飽和脂肪酸6種,相對(duì)含量64.86%,油酸為21.99%,亞油酸為7.58%,二十碳五烯酸為5.22%。

        圖1 Bligh-Dyer法(A)和索式提取法(B)處理林蛙籽脂肪酸甲酯總離子流圖Fig.1 TIC of fatty acid methyl ester in eggs of R. chensinensis by Bligh-Dyer (A) and soxhle (B)

        3 討 論

        Bligh-Dyer法提取脂肪油得油率為30.8%,Soxhlet提取法提取脂肪油得油率為32.4%,Soxhlet提取法略高于Bligh-Dyer法提取脂肪油的得油率。Bligh-Dyer法提取的林蛙籽脂肪油中共檢測(cè)出27種脂肪酸,不飽和脂肪酸16種;Soxhlet提取法提取的脂肪油中檢測(cè)出12種脂肪酸,不飽和脂肪酸6種。說明Bligh-Dyer法提取的林蛙籽脂肪油中所含有的脂肪酸不僅種類多于Soxhlet提取法,而且不飽和脂肪酸相對(duì)含量較高于Soxhlet提取法,其主要原因是:采用Soxhlet提取法,在加熱條件下不飽和脂肪酸特別是多不飽和脂肪酸化學(xué)性質(zhì)不穩(wěn)定,容易被氧化。采用Bligh-Dyer法,在室溫條件下進(jìn)行提取,避免了脂肪酸在提取過程中的損失。

        Bligh-Dyer法提取的林蛙籽脂肪油中檢測(cè)出二十碳五烯酸(EPA)為5.72%,二十二碳六烯酸(DHA)為5.02%,Soxhlet提取法提取的林蛙籽脂肪油中只檢測(cè)出EPA為5.22%,而未檢測(cè)出DHA。EPA和DHA具有不同的生理活性,不同人對(duì)EPA和DHA的食用是有選擇性的,以健腦益智恢復(fù)視力為目的需要補(bǔ)充較多的DHA,以促進(jìn)心腦血管循環(huán)為目的需要補(bǔ)充較多的EPA。

        兩種方法提取的林蛙籽脂肪油中不飽和脂肪酸含量均較高,研究表明,多不飽和脂肪酸具有降低膽固醇、降低血液黏稠度、改善血液微循環(huán)、提高腦細(xì)胞的活性、增強(qiáng)記憶力和思維能力,對(duì)心腦血管疾病起到預(yù)防作用[10-15]。本實(shí)驗(yàn)為林蛙籽的進(jìn)一步開發(fā)提供一定的科學(xué)依據(jù)。

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        Analysis of Fatty Acids inRana chensinensisEggs by Two Different Extraction Methods Combined with GC-MS

        LI Tie-chun,HOU Dong-yan,DIAO Quan-ping,SUN Bo,HUI Rui-hua
        (Department of Chemistry, Anshan Normal University, Anshan 114007, China)

        The egg oil ofRana chensinensiswas extracted by Bligh-Dyer method or Soxhlet extraction method, methyl esterfied, and then analyzed by gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS). A total of 27 fatty acids were identified in the egg oil obtained by Bligh-Dyer method, including 16 unsaturated fatty acids (72.49%), such as arachidonic acid methyl ester (5.72%), eicosapentaenoic acid (5.72%), docosahexaenoic acid (5.02%), 9,12-octadecadienoic acid (8.89%), and 5,8,11,14-eicosatetraenoic acid (5.72%). Twelve fatty acids were identified by Soxhlet extraction method combined with GC-MS, comprising 6 unsaturated fatty acids (64.86%), such as 9-octadecenoic acid (21.99%), 5,8,11,14,17-eicosapentaenoic acid (7.58%) and 9,12-octadecadienoic acid (5.22%).

        Rana chensinensiseggs;fatty acid;gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS)

        O657.63

        A

        1002-6630(2012)18-0195-03

        2011-06-23

        遼寧省教育廳科學(xué)技術(shù)基金項(xiàng)目(20331079)

        李鐵純(1969—),男,教授,博士,主要從事有機(jī)分析及天然產(chǎn)物化學(xué)研究。E-mail:tiechunli@163.com

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