羅靜波

·實驗研究·

HPLC法測定鹽酸左西替利嗪分散片的含量及有關物質

羅靜波

目的使用HPLC法測定鹽酸左西替利嗪分散片的含量及有關物質。方法HypersilBDS C18色譜柱(150 mm×4.6 mm，um)，流動相每升為0.02 mol磷酸二氫銨(用磷酸調PH-3.2):乙腈(60: 40)加入0.5%三乙胺，流速每分鐘約為0.8 mL，進樣量20uL，檢測波長230nm。結果鹽酸左西替利嗪質量濃度在0.08～0.12 g/L內與峰面積線性關系良好(r=0.9992)，平均回收率為99.8%，RSD= 0.56%(n=9)。結論HPLC法的操作方法簡單，結果準確可靠，重現(xiàn)性好，靈敏度高。

HPLC法;鹽酸左西替利嗪分散片;含量;有關物質

鹽酸左西替利嗪片是新一代非鎮(zhèn)靜的抗組胺藥物，是西替利嗪的R-異構體，具有受體選擇性強、作用靶位明確、代謝迅速、不良反應較少等特點，主要用于治療變應性鼻炎［1］。本文主要針對鹽酸左西替利嗪分散的成分和相關物質進行HPLC法測定。

1 資料與方法

1.1 一般資料 Waters515 hPLC儀;HypersilBDSC18色譜柱; PHS-3 c型酸度計(上海雷韻試驗儀器制造有限公司);電子天平(德國賽多利斯集團);鹽酸左西替利嗪對照品(批號010220，5 m l/片)和鹽酸左西替利嗪分散片(批號:010307、010306、010305，5 mg/片)均由成都英創(chuàng)科技發(fā)展有限公司提供;乙腈(批號:000115101，天津市四友生物醫(yī)學技術有限公司);重蒸水(第三軍醫(yī)大學薪橋醫(yī)院藥學部自制);磷酸二氫銨(批號:20010112，中國成都化學試劑廠);乳糖(批號: 99072601，哈爾濱制藥總廠);淀粉(批號:00080502，山東聊城阿華只要有限公司);微晶纖維素(批號:991025，江蘇常熟市用藥輔料廠);硬脂酸鎂(批號:00052401，天津市天大化工實驗廠)。其他試劑為分析純。

1.2 檢測方法

1.2.1 色譜條件 HypersilBDS C18色譜柱(150 mm×4.6 mm，um)，流動相每升為0.02 mol磷酸二氫銨(用磷酸調PH-3.2):乙腈(60∶40)加入0.5%三乙胺，流速每分鐘約為0.8 ml，進樣量20μl，檢測波長230 nm。

1.2.2 溶液配制 ①制備供試品溶液:取鹽酸左西替利嗪分散片樣品10片，將其研碎并磨成粉末狀后，取100 ml的容器將藥物樣品放入，再加入40 ml水，對其進行10 min的超聲處理，之后讓溫度下降至室溫，并加水稀釋將其搖晃均勻，使用0.45 um的微孔濾膜過濾取得濾液。②制備空白溶液:鹽酸左西替利嗪分散片的構成主要是由淀粉、乳糖、硬脂酸鎂、微晶纖維素等。按照①的制備方法將其制作成空白的溶液。③制備對照品溶液:用精密儀器測定鹽酸左西替利嗪分散片藥物5 mg，按照①的制備方法將其制成對照品溶液，放置在100 ml的容器中，并依法操作。

1.2.3 系統(tǒng)適用性試驗 取出制備好的空白溶液、對照品溶液和供試品溶液，按照1.2.1的色譜條件取得色譜件，研究結果表明，樣品保留在5 min處沒有見到其他早知干擾，理論塔板數(shù)為2000以上。

1.2.4 線性關系考察 稱取鹽酸左西替利嗪分散片，要求其干燥并恒溫，25 mg放置在100 ml的量瓶中，加入流動相溶液將其溶解，并加水稀釋將其搖晃均勻，放置作為備用液。將備用液去25 m l放置瓶中，家如流動相稀釋搖勻，分別將濃度調為10μg/ml、30μg/m l、50μg/ml、70μg/ml、100μg/ml的對照品溶液，按照1.2.1的色譜條件記錄峰面積，以濃度X為橫坐標，峰面積A為縱坐標進行線性回歸分析，制出回歸曲線，其方程式為:r=0.9997，A=671421X-14428，線性范圍在10 um/ml-100 um/m l。

1.2.5 穩(wěn)定性試驗 選取相同的供試品溶液，于0 h、4 h、8 h、12 h，按1.2.1色譜調節(jié)操作，每個樣品均策動五次，并記錄峰面積和色譜。研究結果顯示，供試品溶液12 h內的RSD為0.53%，穩(wěn)定性好，并滿足試驗的要求。

1.2.6 回收率實驗 稱取等重的鹽酸做西替利嗪分散片對照品，將其放入容量為50 m l的瓶子中，并將適量的輔料加入其中，加入適量的水直至刻度，搖晃均勻后，便可得到高濃度92.27μg/ml溶液，中濃度65.09μg/ml溶液及低濃度11.02 μg/m l溶液。將其過濾后取所得到的過濾液，按上述的色譜條件進樣，對樣品的鋒面值進行記錄，以標準曲線方程對其濃度進行計算。詳情見表1。

2 討論

HPLC法測定準確、靈敏度較高、簡便易行，可以有效控制產品的質量。流動相選擇的方面是通過對溶液中容易發(fā)生離子化的樣品分離，使用調節(jié)流動相的pH值方法。因為鹽酸左西替利嗪分散片具有叔胺的結構，和固定相表面沒有被硅烷化游離硅醇基間，發(fā)生形成氫鍵或者離子交換，西替利嗪色譜峰出現(xiàn)了拖尾，時間保留較長，分離較不理想。流動相加入有一定比例的有機胺調節(jié)劑，即可競爭掩蔽或抑制固定相表面游離的硅醇基活性，則堿性藥物易于改善峰形、出峰。經過優(yōu)化的考察，HPLC法流動相是采用0.02 mol/L的磷酸二氫銨:乙晴(60:40)，縮短保留時間，有良好的峰形，獲得較好的重現(xiàn)性。

［1］ 陳繼川，姬長友，等.鹽酸左西替利嗪對124例變應性鼻炎的前瞻性臨床研究．重慶醫(yī)學，2006，35(4):364-366．

［2］ 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部)．北京:化學工業(yè)出版社，2005．

410005長沙市第一醫(yī)院藥劑科

表1 鹽酸做西替利嗪分散片回收實驗效果比較(n=3)

加入量(mg) 測得量(mg) 回收率(mg)x(%) RSD(%) 40.2 40.4 100.4 39.4 39.3 91.1 40.3 40.0 99.2 50.1 50.3 100.3 99.7 0.55 50.3 50.0 99.5 50.6 50.2 99.1 60.0 60.2 100.2 59.3 58.9 99.2 60.2 60.3 100.1

1.2.7 精密度試驗 分別配置濃度為100.0μg/ml、50.0 μg/ml、10.0μg/ml高中低三種濃度的樣品溶液，在1 d內連續(xù)測定3次，1周內連續(xù)測定3次，并計算3種濃度的日內RSD值分別是2.12%、0.42%、0.45%(n=3)，周內的RSD值分別是2.40%、2.62%、1.88%(n=3)。試驗結果精密度較好。

1.2.8 樣品含量的測定 取鹽酸左西替利嗪分散片樣品20片，將其研碎并磨成粉末狀后，取50 m l的容器將藥物樣品放入，加入流動相溶液將其溶解，并加水稀釋將其搖晃均勻過濾，取20um濾液注入色譜儀。并記錄色譜;另取鹽酸左西替利嗪分散片對照品適量，加入流動相溶液將其溶解，將其濃度稀釋成0.10 g/L，按照外標法以峰面積計算樣品含量，有關物質和樣品含量測定結果如下:批號010305，其含量99.12%，有關物質為0.36%;批號010306，其含量100.26%，有關物質為0.41%;批號010307，其含量99.34%，有關物質為0.33%;

1.2.9 有關物質的檢查 采用不加校正因子的主成分自身對照法［2］。取本品細粉適量(約相當于鹽酸左西替利嗪5 mg)，加流動相制成約0.2 g/L的溶液，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液;將供試品容液用流動相稀釋100倍，為1%對照液。取對照溶液20μl進樣，調節(jié)檢測靈敏度，使主成分色譜峰的峰高為滿量程的10%;再精密量取供試品溶液20μl進樣，記錄色譜圖至主成分色譜峰保留時間的3倍?？鄢軇┓搴洼o料峰，量取色譜圖上除去鹽酸左西替利嗪峰外各雜志峰的總和與對照品主峰峰面積比較，計算雜志含量，見表2。由此可見三批樣品的雜質含量均小于1%。