高智席，吳艷紅，鄭胡飛，敖克厚，劉 焱，曾啟華，黃 成

(1.遵義師范學(xué)院化學(xué)系，貴州 遵義 563002；2.西南大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院，重慶 400715)

燈籠果中噻菌靈的RP-HPLC-PDA殘留分析

高智席1，吳艷紅1，鄭胡飛1，敖克厚1，劉 焱1，曾啟華1，黃 成2

(1.遵義師范學(xué)院化學(xué)系，貴州 遵義 563002；2.西南大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院，重慶 400715)

目的：建立反相高效液相色譜-二極管陣列檢測(cè)器測(cè)定燈籠果中殺菌劑噻菌靈殘留的分析法。方法：色譜柱為Shim-pack VP-ODS(150mm×4.6mm)，檢測(cè)波長(zhǎng)為299nm，流動(dòng)相為pH6.8的乙腈-0.02mol/L磷酸緩沖溶液(70:30，V/V)，流速為0.6mL/min，進(jìn)樣量20μL。結(jié)果：噻菌靈在0.10～90.0μg/mL范圍內(nèi)與峰面積成良好線性關(guān)系(r＝0.9995)，檢測(cè)限為0.05μg/mL，噻菌靈的回收率為87.9%～102.6%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.98%～2.79%。結(jié)論：該方法操作簡(jiǎn)便快速，可作為燈籠果中噻菌靈含量監(jiān)測(cè)的控制方法。

噻菌靈；殘留分析；反相高效液相色譜；燈籠果

燈籠果具有“開(kāi)胃健脾，補(bǔ)虛益智”的作用，又可作為治療腦溢血、腦血栓、動(dòng)脈粥樣硬化，減低血壓，緩和痛風(fēng)和風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等癥的滋補(bǔ)品，并能養(yǎng)血安神、清理血虧、降低血液中的膽固醇、調(diào)節(jié)血脂、促進(jìn)腦部和眼睛的發(fā)育[1]。它除了具有一般水果所含有的氨基酸、維生素、微量元素等對(duì)人體有益的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值外，另外還具有一定的保健藥用價(jià)值。燈籠果含有大量的油酸、亞油酸等不飽和脂肪酸，所以具有美容養(yǎng)顏、延緩衰老、預(yù)防心腦血管病等保健價(jià)值[2]。

噻菌靈(triabendazole)屬于苯并咪唑類(lèi)農(nóng)藥，它是一類(lèi)高效、低毒和廣譜的內(nèi)吸性殺菌劑。噻菌靈具有抑制霉菌生長(zhǎng)繁殖的作用，但噻菌靈生產(chǎn)上除防治灰霉病等病害，主要用于防治貯藏期病害[3]。因此，它被廣泛用于采收后的水果和蔬菜的防腐保鮮。為了防貯藏期病害，減少經(jīng)濟(jì)損失，在貯存時(shí)，常常向燈籠果上噴灑噻菌靈殺菌劑。但水果中殘留的噻菌靈對(duì)人體有一定的毒性，主要侵害人體的肝臟、神經(jīng)系統(tǒng)和骨髓。因此，檢測(cè)燈籠果中噻菌靈殘留量就顯得很有必要，對(duì)保證人體健康具有重要意義。

通常測(cè)定噻菌靈的方法有高效液相色譜法[4-8]、固相萃取-高效液相色譜法[9-12]、離子交換色譜法[13-14]、高效液相色譜-熒光檢測(cè)法[15]、毛細(xì)管電泳法[16]、高效液相色譜-質(zhì)譜法[17-19]等。但未見(jiàn)關(guān)于燈籠果中噻菌靈殘留分析的高效液相色譜測(cè)定方法的報(bào)道。因此，本實(shí)驗(yàn)旨在建立一種簡(jiǎn)單、適用并能檢測(cè)名貴水果中噻菌靈殘留量的監(jiān)測(cè)控制方法，建立反相高效液相色譜分離-二極管陣列檢測(cè)器測(cè)定燈籠果中噻菌靈殘留分析的方法。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑與儀器

燈籠果樣品為市購(gòu)，于冷藏柜中保存(0～10℃)。

噻菌靈標(biāo)準(zhǔn)品(含量≥99%) 國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)樣品信息中心；甲醇、純磷酸氫二鈉、硫酸鈉、磷酸二氫鈉、乙酸乙酯均為分析純；二次蒸餾水。所有溶液使用前均經(jīng)0.45μm孔徑的濾膜過(guò)濾。

LC-20AT高效液相色譜儀(配SPDM-20A檢測(cè)器、SIL-20A自動(dòng)進(jìn)樣器、CBM-20A系統(tǒng)控制器) 日本島津公司；電子天平 上海越平科學(xué)儀器有限公司；離心機(jī) 上海手術(shù)器械廠；微孔過(guò)濾裝置 北京萊伯泰科儀器有限公司；SY3200超聲波清洗器 上海聲源超聲波儀器設(shè)備有限公司；DHG-9070A型新型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱 寧波江南儀器廠。

1.2 方法

1.2.1 色譜條件

色譜柱：Shim-pack VP-ODS(150mm×4.6mm，5μ m)；流動(dòng)相：乙腈-0.02mol/L磷酸緩沖溶液(70:30，V/V)；紫外檢測(cè)波長(zhǎng)：299nm；流速：0.6mL/min；柱溫：室溫；進(jìn)樣量：20μL。

1.2.2 溶液配制

標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱(chēng)取噻菌靈標(biāo)準(zhǔn)品0.0068g(精確至0.0001g)，置于50mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，搖勻后即為0.136mg/mL的噻菌靈標(biāo)準(zhǔn)溶液。用移液管準(zhǔn)確移取不同體積的噻菌靈標(biāo)準(zhǔn)溶液分別置于25mL的容量瓶中，再用甲醇定容得一系列不同質(zhì)量濃度(0.01、0.10、0.14、0.25、0.31、1.26、5.03、19.35、27.20、54.40、74.42、90.00、97.92μ g/mL)的噻菌靈標(biāo)準(zhǔn)溶液，搖勻并貼上標(biāo)簽，0～1 0℃保存，備用。

磷酸緩沖液：稱(chēng)1.38g Na2H2PO4·2H2O和1.41g Na2HPO4溶于900mL二次蒸餾水中，用0.1mol/L稀NaOH溶液調(diào)pH6.8，定容至1000mL，配制成0.02mol/L的磷酸緩沖溶液。搖勻，用0.45μ m的孔徑濾膜過(guò)濾，超聲振蕩15min，備用。

1.2.3 樣品前處理

將施用過(guò)噻菌靈(0.136mg/mL)的樣品燈籠果分別編號(hào)，并保存于0～5℃的冷藏柜中。對(duì)不同編號(hào)的樣品貯藏10d后依次進(jìn)行殘留量測(cè)定。

取10g樣品于研缽中，加入15g無(wú)水硫酸鈉混合均勻，再加入10mL乙酸乙酯，組織搗碎，轉(zhuǎn)移至250mL碘瓶中，用5mL乙酸乙酯沖洗研缽，將洗液合并入碘瓶中。超聲振蕩10min，過(guò)無(wú)水硫酸鈉層抽濾，用乙酸乙酯洗滌殘?jiān)鼉纱?，合并濾液。再在濾渣中加入20mL乙酸乙酯，超聲波提取10min，過(guò)無(wú)水硫酸鈉層抽濾，合并濾液于碘瓶中。于30℃恒溫箱中濃縮至干，用2mL甲醇溶解并通過(guò)0.45μm濾膜，待測(cè)。

2 結(jié)果與分析

2.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

利用二極管陣列檢測(cè)器在線掃描配制好的噻菌靈標(biāo)準(zhǔn)溶液，可得到噻菌靈的吸收波長(zhǎng)響應(yīng)值的紫外吸收?qǐng)D譜(圖1)，最大吸光波長(zhǎng)出現(xiàn)在204、235、299nm波長(zhǎng)處。當(dāng)吸收波長(zhǎng)小于220nm時(shí)，吸收干擾較大?？紤]到噻菌靈本身以及溶劑、基體干擾、靈敏度等因素，選定波長(zhǎng)為299nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。燈籠果中各雜質(zhì)在該波長(zhǎng)時(shí)對(duì)噻菌靈的測(cè)定無(wú)影響，且色譜峰形較好。

圖1 標(biāo)準(zhǔn)品噻菌靈的紫外掃描圖Fig.1 Spectrum of triabendazole standard

2.2 流動(dòng)相的選擇

分別用甲醇溶液、甲醇-氨水溶液、甲醇-磷酸二氫鉀溶液、甲醇-冰乙酸、乙腈-磷酸二氫鉀溶液、乙腈-離子對(duì)溶液、乙腈溶液和乙腈-磷酸緩沖溶液等作流動(dòng)相進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)乙腈-磷酸緩沖溶液作流動(dòng)相時(shí)，噻菌靈與其雜質(zhì)分離完全且峰形對(duì)稱(chēng)；再經(jīng)過(guò)比較不同配比的乙腈-磷酸緩沖溶液體系，發(fā)現(xiàn)乙腈-0.02mol/L磷酸緩沖溶液(pH6.8)配比為70:30(V/V)時(shí)，柱效最高、保留時(shí)間適宜。

2.3 流速的選擇

在上述流動(dòng)相和檢測(cè)波長(zhǎng)條件下，以0.2～1.0mL/min的不同流速進(jìn)行測(cè)定，分析比較發(fā)現(xiàn)在0.6mL/min流速時(shí)的噻菌靈液相色譜峰形較好、出峰時(shí)間較早，故選擇0.6mL/min為檢測(cè)流速。

2.4 線性范圍及檢出限

按照上述色譜條件制作噻菌靈標(biāo)準(zhǔn)曲線，經(jīng)過(guò)回歸，得到其線性方程為y＝5010.8x－51.171，r＝0.9995。線性范圍為0.10～90.0μg/mL。噻菌靈標(biāo)準(zhǔn)譜圖見(jiàn)圖2，標(biāo)準(zhǔn)出峰在3.904min。采用標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的最低質(zhì)量濃度點(diǎn)并按上述色譜條件測(cè)定6 次，得到一組低質(zhì)量濃度標(biāo)準(zhǔn)峰面積，求出其標(biāo)準(zhǔn)偏差，以3倍標(biāo)準(zhǔn)偏差除以方法的靈敏度，即得方法的檢出限為0.05μg/mL。噻菌靈標(biāo)準(zhǔn)品和樣品色譜圖見(jiàn)圖2。

圖2 噻菌靈標(biāo)準(zhǔn)品(A)和燈籠果果肉中噻菌靈(B)的色譜圖Fig.2 Chromatogram of triabendazole in Peruvian ground cherry sarcocarp

2.5 精密度和回收率

在選定的色譜條件下進(jìn)行添加回收實(shí)驗(yàn)，燈籠果肉分別以0.01、0.05、0.1mg/kg三個(gè)添加水平，燈籠果皮分別以0.05、0.1、0.2mg/kg三個(gè)添加水平，按照樣品處理方法進(jìn)行提取凈化，測(cè)定噻菌靈含量，計(jì)算回收率見(jiàn)表1。燈籠果肉噻菌靈添加回收率為87.9%～101.5%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(relative standard deviation，RSD)(n＝3)為1.53%～2.79%，燈籠果皮噻菌靈添加回收率為89.2%～102.6%，RSD(n＝3)為0.98%～1.51%，方法的回收率和標(biāo)準(zhǔn)偏差符合國(guó)內(nèi)外有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)和法規(guī)的要求。在選定的色譜條件下，質(zhì)量濃度50μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)品連續(xù)測(cè)定5次，保留時(shí)間和峰面積的RSD分別為0.17%和2.78%(n＝5)。因此，本方法具有很高的靈敏度與精密度，重復(fù)性好，回收率穩(wěn)定，可以為燈籠果樣品中噻菌靈的測(cè)定提供參考方法。

2.6 實(shí)際樣品測(cè)定

對(duì)不同批次的樣品中燈籠果肉和燈籠果皮中的噻菌靈含量進(jìn)行測(cè)定，每個(gè)樣品重復(fù)3 次，從表2可以看出，燈籠果肉中的噻菌靈含量明顯低于燈籠果皮。相對(duì)誤差小于3.4%，符合國(guó)內(nèi)農(nóng)藥殘留檢測(cè)的要求。

表2 燈籠果樣品測(cè)定結(jié)果(n＝3)Table 2 Triabendazole residues in Peruvian ground cherry samples as determined by the method (n＝3)

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Residue Analysis of Triabendazole in Peruvian Ground Cherry by RP-HPLC-PDA

GAO Zhi-xi1，WU Yan-hong1，ZHENG Hu-fei1，AO Ke-hou1，LIU Yan1，ZENG Qi-hua1，HUANG Cheng2
(1. Department of Chemistry, Zunyi Normal College, Zunyi 563002, China；2. School of Chemistry and Chemical Engineering, Southwest University, Chongqing 400715, China)

Purpose: A reversed-phase high performance liquid chromatographic method with PDA was used for the residue analysis of triabendazole in Peruvian ground cherry. Methods: The HPLC conditions were as follows: the column was Shimpack VP-ODS 150 mm × 4.6 mm. CH3CN:0.02mol/L H3PO4 (pH 6.8) = 70:30 (V/V) as mobile phase, flow rate 0.6 mL /min,injection volume 20 μL and detection wavelength 299 nm. Results: Good linearity of triabendazole was obtained over the range of 0.10—90.0 μg/mL (r= 0.9995). The detection limits were 0.05 μg/mL for triabendazole. The average recoveries ranged from 87.9% to 102.6% with relative standard deviation of 0.98%—2.79%. Conclusions: The method is fast and simple for the residue detection and analysis of triabendazole in Peruvian ground cherry.

triabendazole；residue analysis；reversed-phase high performance liquid chromatographic (RP-HPLC)；Peruvian ground cherry

TS207.5

A

1002-6630(2012)10-0204-04

2011-07-27

貴州省遵義市科技局項(xiàng)目([2008]26號(hào))；貴州省教育廳自然科學(xué)研究項(xiàng)目([2010]085號(hào))；貴州省科技廳社會(huì)發(fā)展攻關(guān)項(xiàng)目(黔科合SY字[2009]3050)

高智席(1969—)，男，副教授，碩士，主要從事儀器分析研究。E-mail：wyhgzx@163.com