李 蕓，楊秀松，何計(jì)國(guó),*

(1. 中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與營(yíng)養(yǎng)工程學(xué)院，北京 100083；2. 國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局培訓(xùn)中心，北京 100073)

金花葵黃酮對(duì)高脂血癥大鼠血脂的影響

李 蕓1，楊秀松2，何計(jì)國(guó)1,*

(1. 中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與營(yíng)養(yǎng)工程學(xué)院，北京 100083；2. 國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局培訓(xùn)中心，北京 100073)

目的：探討金花葵黃酮對(duì)高脂血癥模型大鼠血脂的影響。方法：100只SD大鼠，按體質(zhì)量隨機(jī)分為6組；除空白對(duì)照組外，其余各組飼喂高脂飼料制作動(dòng)物高脂血癥模型；其中金花葵黃酮分為3、30、90mg/(kg·d)劑量組；陽(yáng)性對(duì)照組灌胃洛伐他汀片10mg/(kg·d)；空白對(duì)照組、陰性對(duì)照組灌胃10mL/(kg·d)蒸餾水，連續(xù)6周。每?jī)芍軠y(cè)定血脂相關(guān)指標(biāo)，最后一周測(cè)定氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)。結(jié)果：3個(gè)劑量組大鼠血清血脂水平(總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C))及ox-LDL明顯降低。結(jié)論：金花葵黃酮能緩解大鼠高脂血癥，降低ox-LDL水平，延緩泡沫細(xì)胞的形成和動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生。

金花葵；黃酮；高脂血癥

金花葵(Abelmoschus manihot(L.))，又名金芙蓉、菜芙蓉、野芙蓉，為錦葵科秋葵屬一年生草本植物，在20世紀(jì)80年代末農(nóng)業(yè)資源普查時(shí)被認(rèn)為已滅絕，2003年由中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院專(zhuān)家在河北邢臺(tái)地區(qū)發(fā)現(xiàn)，具有食用、藥用、保健功能，有較高的開(kāi)發(fā)利用價(jià)值[1-2]。

研究證明，氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)是動(dòng)脈粥樣硬化形成的重要中心環(huán)節(jié)[3]，而血脂升高是導(dǎo)致低密度脂蛋白氧化加速和動(dòng)脈粥樣硬化形成的主要危險(xiǎn)因素。因此，預(yù)防和控制血脂升高已成為功能食品領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)之一[4]。黃酮類(lèi)化合物具有降低血脂，減緩心血管疾病風(fēng)險(xiǎn)的作用[5]。金花葵花富含黃酮類(lèi)物質(zhì)，為主要的活性成分[6]。

本研究通過(guò)飼喂高脂飼料，建立大鼠高血脂模型，制備金花葵黃酮，觀察灌胃金花葵黃酮后對(duì)血脂水平、ox-LDL水平的改變，旨在觀察金花葵黃酮是否具有降低血脂、延緩大鼠早期動(dòng)脈粥樣硬化形成作用。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑與儀器

金花葵購(gòu)買(mǎi)于錦州市泰和區(qū)衛(wèi)生局。

總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、ox-LDL ELISA試劑盒 北京科美生物技術(shù)有限公司。

Alpha-pure純水系統(tǒng) 上海瑞楓生物科技有限公司；YS-04粉碎機(jī) 北京燕山正德機(jī)械設(shè)備有限公司；722S分光光度計(jì) 上海精密儀器科技有限公司；東芝TB A-1 20FR全自動(dòng)生化分析儀 日本東芝公司；THERMO-ASCENT全自動(dòng)酶標(biāo)儀 美國(guó)熱電公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF級(jí)雄性SD大鼠，體質(zhì)量(140±10)g，100只，由解放軍軍事科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證編號(hào)為SCXK(軍)2007-004。

1.3 動(dòng)物飼養(yǎng)條件

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)于中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)食品安全技術(shù)中心(SPF級(jí))；飼養(yǎng)溫度：20～25℃，相對(duì)濕度：40%～70%；實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼喂常規(guī)飼料由解放軍軍事科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

清潔級(jí)基礎(chǔ)飼料配方：粗蛋白20.8%、粗脂肪4.5%、粗灰分6.83%、水分10%、粗纖維4.4%、鈣1.23%、磷0.96%；高脂飼料配方：78.8%基礎(chǔ)飼料、1%膽固醇、10%蛋黃粉、l0%豬油、0.2%膽鹽。

1.4 方法

1.4.1 金花葵黃酮提取分離

根據(jù)夏文寬[7]的研究，采用金花葵總黃酮的提取最佳工藝參數(shù)進(jìn)行提?。?0℃水浴，80%乙醇作為提取溶劑，提取2次，每次提取2 h，干燥的金花葵粉末和提取溶劑的料液比為1:100(m/V)，提取pH值為l0。采用AB-8大孔樹(shù)脂對(duì)金花葵總黃酮進(jìn)行純化。三氯化鋁法[6]測(cè)定金花葵含量。金花葵花總黃酮的提取率為干質(zhì)量的1.7%(17mg/g 干花)。金花葵黃酮溶液于4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4.2 大鼠高血脂模型的建立

大鼠10只/籠，適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后，隨機(jī)選取10只作為空白對(duì)照組，給予基礎(chǔ)飼料，其余90只連續(xù)飼喂高脂飼料兩周，不限飲水。兩周后，隔夜禁食12h，內(nèi)眥靜脈取血，生化分析儀測(cè)定TC、TG、LDL-C、HDL-C含量，比較高脂飼料組與空白對(duì)照組的TC含量，選取高脂組中與空白對(duì)照組TC值存在顯著性的50只作為模型動(dòng)物。

1.4.3 分組及給藥劑量

依模型大鼠的TC值，運(yùn)用SPSS軟件隨機(jī)分組，分為陽(yáng)性對(duì)照組(洛伐他汀)、黃酮高劑量組、黃酮中劑量組、黃酮低劑量組、陰性對(duì)照組，每組1 0只。

將金花葵黃酮溶液配制成含黃酮0.3mg/mL的水溶液，作為低劑量組的灌胃劑量，每組大鼠按10mL/kg 進(jìn)行灌胃，相當(dāng)于黃酮?jiǎng)┝繛?mg/(kg·d)。

以低劑量組10倍劑量為中劑量，配制含黃酮3mg/mL的水溶液，每組大鼠按10mL/kg進(jìn)行灌胃，相當(dāng)于黃酮?jiǎng)┝繛?0mg/(kg·d)。

以低劑量組30倍劑量為高劑量，配制含黃酮9mg/mL的水溶液，每組大鼠按10mL/kg進(jìn)行灌胃，相當(dāng)于黃酮?jiǎng)┝繛?0mg/(kg·d)。

依洛伐他汀的服用量，將洛伐他汀配制成1mg/mL溶液，用于陽(yáng)性對(duì)照組。每組大鼠按10mL/kg進(jìn)行灌胃。

空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組每天灌以蒸餾水。

空白對(duì)照組喂食基礎(chǔ)維持飼料，其余受試組飼喂高脂飼料，不限飲水，喂養(yǎng)6周。

1.4.4 數(shù)據(jù)處理

采用SPSS1 6.0軟件分析，用單因素方差分析ANOVA(one-way analysis of variance)，以 Duncan,s多種比較檢驗(yàn)(Duncan’s multiple range tests)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果以±s表示，P＜0.05時(shí)具有顯著性差異，P＜0.01時(shí)具有極顯著性差異。

2 結(jié)果與分析

2.1 金花葵黃酮對(duì)大鼠血清TC水平的影響

表1 金花葵黃酮對(duì)大鼠血清TC水平的影響(n=10)Table 1 Effect of Abelmoschus manihot flavonoids on serum TC of rats (n=10)

由表1可見(jiàn)，飼喂高脂飼料，造模成功后(0周)，高脂模型鼠血清TC含量高于空白對(duì)照組且存在極顯著性差異(P＜0.01)，說(shuō)明高脂飼料能夠成功的復(fù)制高TC含量大鼠模型，可以用于受試物的降脂實(shí)驗(yàn)；灌胃金花葵黃酮4周后，陽(yáng)性對(duì)照組和受試物各劑量組大鼠血清TC含量與陰性對(duì)照組相比存在極顯著性差異(P＜0.01)，表明受試物各劑量組的血清TC含量低于陰性對(duì)照組，說(shuō)明受試物具有降低血清TC含量的作用。

2.2 金花葵黃酮對(duì)大鼠血清TG水平的影響

由表2可見(jiàn)，飼喂高脂飼料，造模成功后(0周)，高脂模型大鼠血清TG含量高于空白對(duì)照組且存在極顯著性差異(P＜0.01)，說(shuō)明高脂飼料能夠成功的復(fù)制高TG含量大鼠模型，可以用于受試物的降脂實(shí)驗(yàn)；實(shí)驗(yàn)第2周開(kāi)始，陽(yáng)性對(duì)照組和受試物各劑量組大鼠血清TG含量低于陰性對(duì)照組且存在極顯著性差異(P＜0.01)；實(shí)驗(yàn)后期，各劑量組TG水平均低于空白對(duì)照組說(shuō)明受試物具有降低血清TG含量的作用。

表2 金花葵黃酮對(duì)大鼠血清TG水平的影響(n=10)Table 2 Effect of Abelmoschus manihot flavonoids on serum TG of rats (n=10)

2.3 金花葵黃酮對(duì)大鼠血清LDL-C水平的影響

表3 金花葵黃酮對(duì)大鼠血清LDL-C 水平的影響(n=10)Table 3 Effect of Abelmoschus manihot flavonoids on serum LDL-C of rats (n=10)

由表3可見(jiàn)，飼喂高脂飼料，造模成功后(0周)，高脂模型大鼠血清LDL-C含量與空白對(duì)照組相比存在顯著性差異(P＜0.01)。實(shí)驗(yàn)第2周，低、中劑量組能顯著降低血清LDL-C水平(P＜0.01)；實(shí)驗(yàn)第4周，3個(gè)劑量組均能顯著降低血清LDL-C水平(P＜0.01)，各劑量組之間沒(méi)有差異(P＞0.05)；實(shí)驗(yàn)第6周，低、中劑量組效果優(yōu)于高劑量組。說(shuō)明金花葵黃酮可以有效降低血清LDL-C水平。

2.4 金花葵黃酮對(duì)大鼠血清HDL-C水平的影響

由表4可見(jiàn)，飼喂高脂飼料，造模成功后(0周)，模型組間不存在顯著性差異性(P＞0.05)，與空白對(duì)照組存在顯著差異(P＜0.01)。灌胃開(kāi)始后，陰性對(duì)照組血清HDL-C與空白對(duì)照組相比并沒(méi)有持續(xù)的存在顯著差異性。各劑量組對(duì)血清HDL-C水平影響也不顯著，僅在第2周時(shí)，高劑量組與陰性對(duì)照組相比存在顯著性差異(P＜0.05)。說(shuō)明金花葵黃酮在提高血清HDL-C水平方面效果不明顯。

表4 金花葵黃酮對(duì)大鼠血清HDL-C水平的影響(n=10)Table 4 Effect of Abelmoschus manihot flavonoids on serum HDL-C of rats (n=10)

2.5 金花葵黃酮對(duì)大鼠血清ox-LDL水平的影響

實(shí)驗(yàn)第6周，大鼠處死，采血測(cè)得血清ox-LDL。由表5可見(jiàn)，陰性對(duì)照組ox-LDL水平顯著高于空白對(duì)照組(P＜0.05)。低劑量組與陰性對(duì)照組相比存在顯著性差異(P＜0.05)；高劑量組與陰性對(duì)照組相比存在極顯著性差異(P＜0.01)；陽(yáng)性對(duì)照組與陰性對(duì)照組差異性不顯著(P＞0.05)。說(shuō)明金花葵黃酮能顯著降低血清ox-LDL水平，能夠延緩動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生。

表5 金花葵黃酮對(duì)大鼠血清ox-LDL的影響(n=10)Table 5 Effect of Abelmoschus manihot flavonoids on serum ox-LDL of rats (n=10)

3 討 論

高脂血癥是臨床常見(jiàn)病、多發(fā)病。升高的血脂既是病理產(chǎn)物，又是心腦血管疾病發(fā)生與加重的主要因素。研究顯示，冠心病患者血清膽固醇、低密度脂蛋白水平與左心功能不全呈正相關(guān)[8]。動(dòng)脈粥樣硬化是當(dāng)代威脅人類(lèi)健康和生命安全的重要疾病，以高脂血癥為代表的脂質(zhì)代謝紊亂及脂質(zhì)氧化是引發(fā)動(dòng)脈粥樣硬化的病理基礎(chǔ)之一[9]。動(dòng)脈粥樣硬化是一個(gè)慢性炎癥性病變[10]，ox-LDL由血漿中的LDL經(jīng)過(guò)氧化修飾形成，是粥樣斑塊的特征性成分之一。ox-LDL可通過(guò)多方面作用促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展[11]。其機(jī)制有[12]：趨化作用，促進(jìn)循環(huán)中白細(xì)胞黏附于血管內(nèi)皮以及單核細(xì)胞進(jìn)入內(nèi)皮下層：ox-LDL不被LDL受體識(shí)別，清道夫受體加速ox-LDL。動(dòng)脈粥樣硬化斑塊中泡沫細(xì)胞內(nèi)的膽固醇主要是以膽固醇酯的形式存在，并主要來(lái)源于血漿脂蛋白中的LDL[13]。

生物黃酮的功能早已被醫(yī)學(xué)界所公認(rèn)，它在治療心腦缺氧、缺血，增進(jìn)人體代謝中抗氧化功能，以及緩解抑郁緊張癥狀等方面都有顯著效果。心腦血管疾病是當(dāng)今世界公認(rèn)的十大疾病殺手之一，而生物黃酮?jiǎng)t被稱(chēng)為心腦疾病的克星[7]。

本研究從富含黃酮的金花葵中提取制得黃酮提取液，通過(guò)飼喂高脂飼料，建立大鼠高血脂模型，同時(shí)給藥組給以3個(gè)劑量的金花葵黃酮提取液。金花葵黃酮提取液對(duì)高血脂大鼠的血清TC、TG、LDL-C均有顯著降低作用，但對(duì)HDL-C影響不大，說(shuō)明金花葵黃酮主要是通過(guò)降低TC、TG、LDL-C含量，而不是通過(guò)升高HDL-C水平發(fā)揮降低血脂的作用。HDL-C是冠心病的保護(hù)因素，具有抗動(dòng)脈粥樣硬化作用。單獨(dú)升高HDL-C水平可以降低冠心病發(fā)生率。HDL-C具有調(diào)節(jié)體內(nèi)組織膽固醇庫(kù)的作用，它能將周?chē)M織和動(dòng)脈壁上的膽固醇吸收下來(lái)，并把它運(yùn)輸?shù)礁闻K中代謝，從膽汁排出。因此HDL-C可防止脂質(zhì)在動(dòng)脈壁上沉積，防止脂肪在肝內(nèi)堆積，具有抗動(dòng)脈硬化和抗脂肪肝的作用[14]。但在本研究中金花葵黃酮沒(méi)有提高HDL-C的直接作用，這方面的問(wèn)題有待今后的研究中進(jìn)一步探討。

金花葵黃酮能降低高脂血癥大鼠血清ox-LDL水平，可能是通過(guò)降低血脂LDL水平及抑制LDL氧化從而降低血清ox-LDL水平。金花葵黃酮可以通過(guò)降低血清脂質(zhì)水平，提高機(jī)體抗氧化能力，進(jìn)而減少LDL的氧化修飾，從而起到延緩動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生的作用。推測(cè)原因可能是金花葵黃酮能增強(qiáng)清除自由基能力，抑制LDL氧化。

另外，血清脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)可誘導(dǎo)炎癥因子及炎癥反應(yīng)[15]，因此金花葵黃酮的抗氧化作用及降低炎癥因子水平的研究具有重要意義，在今后的實(shí)驗(yàn)中有待進(jìn)一步研究。

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Effect ofAbelmoschus manihotFlavonoids on Blood Lipid Levels of Hyperlipidemic Rats

LI Yun1，YANG Xiu-song2，HE Ji-guo1,*
(1. College of Food Science and Nutritional Engineering, China Agricultural University, Beijing 100083, China；
2. Training Center of State Food and Drug Administration, Beijing 100073, China)

Objective: To explore the effect ofAbelmoschus manihotflavonoids on blood lipids of hyperlipidemic rats. Methods:Totally 100 SD rats were divided randomly into 6 groups: normal control group, high-fat control group, lovastatin positive control group at the dose of 10 mg/(kg·d), and flavonoid groups at low, middle and high doses (3, 30 mg/(kg·d) and 90 mg/(kg·d)).Except normal the control group, all groups were fed high-fat diet to establish a hyperlipidemia model. Normal control group and high-fat control group were given distilled water at the dose of 10 mL/(kg·d) once a day for 6 consecutive weeks. Serum TC,TG, HDL-C, LDL-C, and ox-LDL were determined after the last administration. Results: Compared with the control group,serum TC, TG, LDL-C and ox-LDL revealed a significantly reduction in all the model groups. However, no significant difference in HDLC level was observed among these groups. Conclusion: The flavonoids can delay the formation and development of arteriosclerosis.

Abelmoschus manihot；flavonoids；hyperlipidemia

Q946.83

A

1002-6630(2012)01-0248-04

2011-03-22

李蕓(1986—)，女，碩士研究生，研究方向?yàn)榻抵δ苁称?。E-mail：shirley8624@sohu.com

*通信作者：何計(jì)國(guó)(1966—)，男，副教授，研究方向?yàn)楣δ苁称芬约笆称钒踩珯z測(cè)。E-mail：hejiguo0870@sina.com