王 華，陳慶森*

(天津市食品生物技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津商業(yè)大學(xué)生物技術(shù)與食品科學(xué)學(xué)院，天津 300134)

乳源酪蛋白糖巨肽抗細(xì)胞凋亡干預(yù)小鼠潰瘍性結(jié)腸炎效應(yīng)研究

王 華，陳慶森*

(天津市食品生物技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津商業(yè)大學(xué)生物技術(shù)與食品科學(xué)學(xué)院，天津 300134)

研究乳源酪蛋白糖巨肽(CGMP)對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎小鼠結(jié)腸黏膜細(xì)胞凋亡的影響。利用惡唑酮誘導(dǎo)小鼠潰瘍性結(jié)腸炎(UC)模型，采用低、中、高劑量的CGMP組(劑量分別為5、50、500mg/(kg·d))和藥物柳氮磺胺吡啶(劑量為40mg/(kg·d))連續(xù)灌胃4d，正常對(duì)照組和模型對(duì)照組每天灌胃相應(yīng)劑量的超純水；用HE染色和TUNEL法檢測(cè)小鼠結(jié)腸大體形態(tài)損傷和病理組織學(xué)及其細(xì)胞凋亡變化。結(jié)果表明：低、中、高劑量CGMP組均可在一定程度上改善惡唑酮誘導(dǎo)的結(jié)腸炎中結(jié)腸病理?yè)p傷和細(xì)胞凋亡表現(xiàn)，尤其以中劑量CGMP組的作用較為明顯，與藥物治療組相比不存在顯著性差異。因而，證實(shí)CGMP作為一種生物活性物質(zhì)可以通過(guò)抗結(jié)腸組織細(xì)胞凋亡具有抑制潰瘍性結(jié)腸炎的功能。

酪蛋白糖巨肽；細(xì)胞凋亡；小鼠；惡唑酮；潰瘍性結(jié)腸炎

酪蛋白糖巨肽(casein glycomacropeptide，CGMP)，是乳中κ-酪蛋白(κ-CN，含有169個(gè)氨基酸殘基，是酪蛋白中唯一含有糖成分的、對(duì)鈣不敏感的蛋白質(zhì))上的一個(gè)多肽片段。干酪加工時(shí)凝乳酶水解酪蛋白(主要是κ-CN)的苯丙氨酸-蛋氨酸鍵，生成不溶性的副-κ-CN(肽鏈的1～105部分)和可溶性的多肽(肽鏈的106～169部分)兩部分，此多肽含有較多的碳水化合物，稱之為“糖巨肽”，酪蛋白來(lái)源的糖巨肽稱為“酪蛋白糖巨肽”。CGMP的研究始于1965年Delfour等[1]發(fā)現(xiàn)的一種含有唾液酸的糖肽，之后人們對(duì)其進(jìn)行了大量的研究，到目前為止已經(jīng)發(fā)現(xiàn)CGMP有諸多生物學(xué)活性，比如抑制細(xì)菌、毒素的附著和定殖[2]、免疫調(diào)節(jié)功能[3]等活性，但目前還未見(jiàn)有對(duì)腸道黏膜細(xì)胞凋亡的相關(guān)報(bào)道。

炎癥性腸病(inflammatory bowel disease，IBD)，包括潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis，UC)和克羅恩病(Crohn,s disease，CD)，是一類(lèi)腸道慢性炎癥性疾病, 其病因及發(fā)病機(jī)制尚未十分明確。目前認(rèn)為形成IBD的主要原因有3個(gè)：1)基因的敏感性，如關(guān)鍵蛋白的突變促進(jìn)微生物進(jìn)入腸上皮；2)腸道抗原，如定殖于腸道的微生物或食物抗原；3)環(huán)境因素，如壓力、吸煙等[4]。隨著分子生物學(xué)技術(shù)、免疫學(xué)以及基礎(chǔ)研究的不斷深入，目前認(rèn)為腸黏膜細(xì)胞凋亡失調(diào)在IBD的發(fā)病中占有十分重要的地位，腸黏膜上皮細(xì)胞凋亡過(guò)度、腸黏膜固有層T淋巴細(xì)胞和中性粒細(xì)胞凋亡遲滯可能是IBD發(fā)生及發(fā)展的原因之一[5]。而目前常用的3類(lèi)藥物(水楊酸類(lèi)、類(lèi)固醇激素和免疫抑制劑)IBD的治療效果并不理想，并且還存在一定的副作用[6]，因此尋找一種新的治療物質(zhì)成為目前該研究的熱點(diǎn)。而CGMP作為一種從乳中提煉出來(lái)的生物活性物質(zhì)以其多種生物學(xué)活性而成為本研究的首選。本實(shí)驗(yàn)采用惡唑酮制造UC小鼠模型，并用不同劑量CGMP進(jìn)行灌胃，以研究CGMP對(duì)UC小鼠結(jié)腸細(xì)胞凋亡的干預(yù)和治療情況。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

酪蛋白糖巨肽(CGMP) 新西蘭Tatua公司；惡唑酮(OXZ) 美國(guó)Sigma公司；TUNEL細(xì)胞凋亡原位檢測(cè)試劑盒 瑞士Roch公司；其他劑均為國(guó)產(chǎn)。

1.2 儀器與設(shè)備

電熱恒溫干燥箱 上海新苗醫(yī)療器械制造有限公司；石蠟切片機(jī)、生物組織攤片機(jī)、生物組織烤片機(jī) 金華市益迪醫(yī)療設(shè)備廠；倒置顯微鏡 日本Nikon公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

Balb/c小鼠，SPF級(jí)，雄性，體質(zhì)量(20±2)g，小鼠常規(guī)飼料購(gòu)自中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。

1.4 方法

1.4.1 動(dòng)物分組及實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

Balb/c小鼠72只，適應(yīng)性喂養(yǎng)一周，隨機(jī)分為6組，每組12只：正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、低劑量CGMP組(5mg/(kg·d))、中劑量CGMP組(50mg/(kg·d))、高劑量CGMP組(500mg/(kg·d))和藥物治療組(40mg/(kg·d))。

1.4.2 UC模型制作[7]

小鼠腹部剃毛致敏禁食36h后，將硅膠管從肛門(mén)插入，正常對(duì)照組灌注50%乙醇0.15mL，其余組均灌注1g/100mL OXZ(OXZ溶于50%乙醇)0.15mL，灌腸后對(duì)3個(gè)CGMP組小鼠灌胃相應(yīng)劑量的CGMP，藥物組灌胃相應(yīng)劑量的柳氮磺胺吡啶，正常對(duì)照組與模型組灌胃相應(yīng)劑量的超純水，此記為第1天處理，連續(xù)灌胃4d。每天觀察小鼠狀態(tài)(大便性狀、精神、活動(dòng)、飲食量等)，測(cè)定所有小鼠的體質(zhì)量變化及飲食情況，并作詳細(xì)記錄。拉頸處死小鼠，打開(kāi)腹腔，剪取結(jié)腸段，對(duì)明顯病變處進(jìn)行大體形態(tài)損傷評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)如表1所示[8]。

表1 小鼠結(jié)腸大體形態(tài)損傷評(píng)分表Table 1 Evaluation criteria for visible lesions in mouse colon

取1cm病變結(jié)腸于4%甲醛中固定24h，先經(jīng)梯度濃度的乙醇脫水處理，二甲苯透明，石蠟包埋后切成5μm切片，貼于防脫載玻片上經(jīng)展片、烤片，脫蠟復(fù)水，蘇木精染色，鹽酸分化，梯度乙醇脫水，伊紅染色后，經(jīng)中性樹(shù)膠封片以供病理組織學(xué)觀察。小鼠結(jié)腸組織學(xué)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)如表2所示。

表2 小鼠結(jié)腸病理組織學(xué)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)[9]Table 2 Scoring scales for histopathological evaluation of mouse colon[9]

1.4.3 病變結(jié)腸組織細(xì)胞凋亡TUNEL分析

TUNEL檢測(cè)方法采用Gavrieli等[10]的方法并稍作改動(dòng)，操作步驟如下：切片經(jīng)脫蠟復(fù)水后，用蛋白酶K(20μg/mL)在室溫條件下作用15min，PBS沖洗3次每次5min，3%的H2O2室溫孵育10min，PBS沖洗3次每次5min，用正常山羊血清、3g/100mL牛血清白蛋白室溫封閉30min，玻片甩干后滴加TUNEL反應(yīng)混合液50μL于37℃暗室中孵育60min，PBS沖洗3次每次5min，用正常山羊血清、3g/100mL牛血清白蛋白室溫封閉30min，載玻片用力甩凈后滴加Converter-POD液50μL于37℃孵育30min，PBS沖洗3次每次5min，滴加DAB顯色液室溫下顯色30～90s，流水沖洗終止反應(yīng)，蘇木精復(fù)染、鹽酸分化脫水、中性樹(shù)膠封片光學(xué)顯微鏡下觀察細(xì)胞凋亡情況。其中陰性對(duì)照為T(mén)UNEL反應(yīng)混合液中不加末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶(TdT酶)孵育，其余步驟相同。

結(jié)果判斷：凋亡的結(jié)腸上皮細(xì)胞核呈棕褐色或棕黃色并定位于細(xì)胞核，對(duì)照HE切片并根據(jù)以下標(biāo)準(zhǔn)判斷著色細(xì)胞為凋亡細(xì)胞：1)單個(gè)散在分布；2)核固縮或染色質(zhì)濃聚附邊或核碎裂；3)周?chē)鸁o(wú)炎癥反應(yīng)[11]。細(xì)胞凋亡的統(tǒng)計(jì)方法為：每張切片計(jì)數(shù)5個(gè)高倍鏡視野(×400)中的凋亡陽(yáng)性結(jié)腸上皮細(xì)胞核數(shù)，按下式計(jì)算結(jié)腸上皮細(xì)胞凋亡指數(shù)，取其平均值。

1.4.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)利用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，以t檢驗(yàn)進(jìn)行方差分析，處理結(jié)果用±s表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 各組小鼠一般狀態(tài)及體質(zhì)量的變化

圖1 各組小鼠體質(zhì)量變化Fig.1 Body weight changes of mice in each group

正常對(duì)照組小鼠前2d有輕度毛發(fā)松散、肛部黏連、食欲減少，而第3天則表現(xiàn)為大便及飲食正常，毛發(fā)有光澤。OXZ模型對(duì)照組小鼠表現(xiàn)為食量減少，毛發(fā)松散、無(wú)光澤，呆滯且有不同程度的腹瀉，肛部黏連。3個(gè)CGMP組小鼠前2d與模型對(duì)照組無(wú)明顯性差異，飲食量從第3天開(kāi)始與正常對(duì)照組基本相同，并且毛發(fā)松散、無(wú)光澤程度逐步得到緩解。藥物治療組小鼠與CGMP組各劑量組均無(wú)明顯差異。各組小鼠體質(zhì)量變化結(jié)果見(jiàn)圖1。正常對(duì)照組小鼠第1天體質(zhì)量略有下降，從第2天開(kāi)始體質(zhì)量增加而OXZ模型對(duì)照組小鼠體質(zhì)量一直處于下降趨勢(shì)。3個(gè)CGMP組小鼠造模后體質(zhì)量前2d也有所下降，但下降幅度較模型組低，第3天體質(zhì)量開(kāi)始回升，但與正常對(duì)照組之間還存在一定差異性。藥物治療組小鼠體質(zhì)量第1天有所下降，從第2天開(kāi)始有回升趨勢(shì)，其余與3個(gè)CGMP組無(wú)明顯差異。

2.2 各組小鼠結(jié)腸組織形態(tài)觀察結(jié)果

將小鼠造模后第5天拉頸處死解剖取其結(jié)腸，觀察發(fā)現(xiàn)正常對(duì)照組小鼠結(jié)腸組織正常，無(wú)水腫、血點(diǎn)出現(xiàn)；模型對(duì)照組能看見(jiàn)明顯的水腫、大面積血點(diǎn)。而3個(gè)CGMP組和藥物治療組與模型對(duì)照組相比，水腫減輕，有散落的小血點(diǎn)，各組小鼠結(jié)腸組織形態(tài)經(jīng)放大40倍后的觀察結(jié)果見(jiàn)圖2。各組小鼠結(jié)腸組織形態(tài)經(jīng)放大400倍后的觀察結(jié)果見(jiàn)圖3。

圖2 各組小鼠結(jié)腸病理組織學(xué)變化(×40)Fig.2 Histopathological changes of mouse colon in each group(×40)

圖3 各組小鼠結(jié)腸病理組織學(xué)變化(×400)Fig.3 Histopathological changes of mouse colon in each group(×400)

由圖2、3可知，正常對(duì)照組結(jié)腸組織黏膜上皮完整，固有層腺體排列正常，黏膜及黏膜下層無(wú)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，未見(jiàn)糜爛及潰瘍；而OXZ模型組結(jié)腸組織黏膜上皮細(xì)胞脫落，固有層腺體排列紊亂，黏膜及黏膜下層有大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，可見(jiàn)多處大面積糜爛和潰瘍；3個(gè)CGMP組對(duì)小鼠結(jié)腸黏膜均有一定的修復(fù)作用，固有層排列開(kāi)始恢復(fù)正常，膜及黏膜下層炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)減少，可見(jiàn)小面積糜爛和潰瘍，其中中劑量CGMP組作用效果最為明顯；藥物治療組對(duì)小鼠結(jié)腸中固有層排列基本恢復(fù)正常，黏膜及黏膜下層基本無(wú)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，無(wú)糜爛和潰瘍，其修復(fù)作用是最為明顯的，但與正常對(duì)照組相比還存在一定差距。

表3 各組小鼠結(jié)腸大體形態(tài)指數(shù)及組織學(xué)評(píng)分(±s)Table 3 Visible lesion index and histological score of mouse colon in each group (±s)

表3 各組小鼠結(jié)腸大體形態(tài)指數(shù)及組織學(xué)評(píng)分(±s)Table 3 Visible lesion index and histological score of mouse colon in each group (±s)

注：*.與正常對(duì)照組相比，差異顯著(P＜0.05)；+.與OXZ模型對(duì)照組相比，差異顯著(P＜0.05)。

組別 大體形態(tài)損傷評(píng)分 組織學(xué)評(píng)分正常對(duì)照組 0.20±0.00 0.13±0.00 OXZ模型對(duì)照組 5.38±0.92* 2.95±0.86*低劑量CGMP組 2.25±1.12*+ 1.90±0.75*+中劑量CGMP組 1.50±0.89*+ 1.36±0.56*+高劑量CGMP組 2.00±0.98*+ 1.75±0.68*+藥物治療組 1.25±1.20*+ 1.05±0.55*+

表4 各組小鼠結(jié)腸組織細(xì)胞凋亡表現(xiàn)(±s，n=8)Table 4 Colonic apoptosis index of each group (±s，n=8)

表4 各組小鼠結(jié)腸組織細(xì)胞凋亡表現(xiàn)(±s，n=8)Table 4 Colonic apoptosis index of each group (±s，n=8)

注：**.與正常對(duì)照組相比，差異極顯著(P＜0.01)；+. 與OXZ模型對(duì)照組相比，差異顯著(P＜0.05)；++.與OXZ模型對(duì)照組相比，差異極顯著(P＜0.01)。

組別 正常對(duì)照組 OXZ模型對(duì)照組 低劑量CGMP組 中劑量CGMP組 高劑量CGMP 組藥物治療組細(xì)胞凋亡指數(shù)/% 4.04±3.02 77.39±8.34** 66.98±13.10** 32.20±11.62**++ 55.82±9.78**+ 25.37±7.45**++

2.3 各組小鼠結(jié)腸大體形態(tài)損傷及組織學(xué)評(píng)分

由表3可見(jiàn)，模型對(duì)照組小鼠的結(jié)腸大體形態(tài)損傷指數(shù)和組織學(xué)評(píng)分比正常對(duì)照組顯著增高，而低、中、高劑量的CGMP組和藥物治療組與模型對(duì)照組相比顯著降低了結(jié)腸的損傷指數(shù)和組織學(xué)評(píng)分，但與正常對(duì)照組相比還存在顯著性差異，雖然藥物治療組與低、中、高劑量的CGMP組相比，結(jié)腸的損傷指數(shù)和組織學(xué)評(píng)分有所降低，但其與中劑量CGMP組之間無(wú)顯著性差異。

2.4 小鼠結(jié)腸組織細(xì)胞凋亡觀察結(jié)果

圖4 各組小鼠結(jié)腸黏膜凋亡TUNEL分析(×400)Fig.4 TUNEL analysis of the apoptosis of colonic mucosa in each group (×400)

由圖4和表4可知，正常對(duì)照組存在生理程序性的細(xì)胞凋亡，凋亡比率僅為4.04%，而OXZ模型對(duì)照組細(xì)胞凋亡比例明顯升高，高達(dá)(77.39±8.34)%。3個(gè)CGMP組與OXZ模型對(duì)照組相比均在一定程度上抑制了細(xì)胞凋亡，尤其以中劑量組作用明顯，與藥物治療組相比無(wú)顯著性差異。研究發(fā)現(xiàn)，無(wú)論是藥物治療組還是CGMP組在實(shí)驗(yàn)期間都無(wú)法使細(xì)胞凋亡比例恢復(fù)到正常水平，所以增加治療周期可能對(duì)腸黏膜上皮細(xì)胞的凋亡恢復(fù)是必需的。

3 討論與結(jié)論

UC由于病因不明，治療棘手，被世界衛(wèi)生組織列為現(xiàn)代難治病之一。目前，該病在我國(guó)的發(fā)病率和患病率均有明顯的增高趨勢(shì)。因此，對(duì)UC病理機(jī)制和治療方法的研究成為近年來(lái)的研究熱點(diǎn)。惡唑酮模型以制作簡(jiǎn)單，重復(fù)性好，誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)迅速，組織學(xué)特征、部位和細(xì)胞因子增殖情況均類(lèi)似于人類(lèi)UC等[12]而成為當(dāng)前制造UC模型的首選。本實(shí)驗(yàn)用3g/100mL的惡唑酮皮膚致敏后用1g/100mL造模，其實(shí)驗(yàn)結(jié)果與Heller等[13]研究結(jié)果一致，小鼠出現(xiàn)嚴(yán)重腹瀉、體質(zhì)量下降，結(jié)腸(特別是在遠(yuǎn)端結(jié)腸)出現(xiàn)明顯的糜爛、潰瘍、黏膜下層被大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，并且大體形態(tài)損傷得分及組織學(xué)評(píng)分與正常對(duì)照組相比均明顯升高，說(shuō)明1%的惡唑酮導(dǎo)致了嚴(yán)重的結(jié)腸黏膜損傷和炎癥，其造模是成功的。

近年來(lái)國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)IBD進(jìn)行了大量的研究，腸黏膜上皮細(xì)胞相互連接是腸黏膜屏障的重要組成部分，它即可以限制抗原(如食物、共生有機(jī)體等)滲透到黏膜免疫系統(tǒng)形成口服免疫耐受又可以使宿主對(duì)致病菌做出應(yīng)答[14]。Iwamoto等[15]用TUNEL、免疫組化等多種凋亡檢測(cè)手段檢測(cè)到UC和正常結(jié)腸凋亡的程度和范圍，發(fā)現(xiàn)活動(dòng)性UC病變區(qū)域上皮細(xì)胞凋亡發(fā)生的程度和范圍都高于正常組織。Sun等[16]證實(shí)細(xì)胞凋亡在腸黏膜屏障功能紊亂中起著重要的作用，由此可以推出在IBD中腸黏膜細(xì)胞凋亡是屏障被破壞的主要原因之一。Schulzke等[17]研究表明，腸黏膜細(xì)胞凋亡導(dǎo)致了離子的流失和水分進(jìn)入腸腔，引起了腹瀉和小分子抗原(分子質(zhì)量＜4000D)進(jìn)入腸黏膜，從而產(chǎn)生永久性炎癥應(yīng)答。以上研究結(jié)果表明細(xì)胞凋亡是IBD形成的主要原因之一，阻止病變結(jié)腸細(xì)胞過(guò)度凋亡可能是IBD治療的有效方法之一。賈玉臣等[18]研究表明CGMP可保持較完整的上皮細(xì)胞，從而有助于維持結(jié)腸組織形態(tài)的完整。本實(shí)驗(yàn)中設(shè)計(jì)CGMP 3個(gè)劑量組(低、中、高)和藥物治療組分別灌胃UC小鼠發(fā)現(xiàn)對(duì)病變結(jié)腸細(xì)胞過(guò)度凋亡均有一定的干預(yù)作用，尤其是中劑量組和藥物治療組相比，對(duì)病變結(jié)腸細(xì)胞凋亡無(wú)顯著性差異。說(shuō)明中劑量組的CGMP在UC結(jié)腸細(xì)胞凋亡中起到了和藥物組相似的作用。CGMP作為乳源生物活性多肽，用于UC及相關(guān)疾病的治療對(duì)人類(lèi)不會(huì)產(chǎn)生任何副作用。目前國(guó)內(nèi)外對(duì)CGMP治療炎癥性腸病的研究還很少，只有Requena等[19]研究表明牛乳來(lái)源糖巨肽(bovine glycomacropeptide，BGMP)在治療由三硝基苯磺酸誘導(dǎo)的CD的回腸炎中起到了與5-氨基水楊酸相似的作用，在葡聚糖硫酸鈉(dextran sodium sulphate，DSS)誘導(dǎo)的結(jié)腸炎中也起到了明顯的抗炎作用[20]。

目前國(guó)內(nèi)外對(duì)IBD細(xì)胞凋亡機(jī)制的研究報(bào)道不多，Vetuschi等[21]研究表明在DSS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎中，結(jié)腸細(xì)胞凋亡指數(shù)明顯高于正常對(duì)照組，并且細(xì)胞凋亡指數(shù)與Fas、FasL、p53表達(dá)量成正比，由于DSS誘導(dǎo)的IBD模型類(lèi)似于人類(lèi)的UC模型，從而可以推出在UC中可能是通過(guò)Fas通路和p53通路誘導(dǎo)結(jié)腸上皮細(xì)胞凋亡的。Strater等[22]研究認(rèn)為，導(dǎo)致結(jié)腸上皮細(xì)胞大量凋亡的原因是通過(guò)激活Fas/FasL信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑而實(shí)現(xiàn)的。A s s i等[23]研究表明在葡聚糖硫酸鈉(DDS)誘導(dǎo)的C57BL/6老鼠模型中，用JNK的抑制劑SP600125可以明顯的減少結(jié)腸上皮細(xì)胞的凋亡，說(shuō)明結(jié)腸上皮細(xì)胞的凋亡與MAPK家族中的JNK信號(hào)通路相關(guān)。Requena等[24]研究表明BGMP可以通過(guò)磷酸化IκB-α、p50和p65來(lái)激活NF-κB信號(hào)通路，并認(rèn)為牛乳來(lái)源的酪蛋白糖巨肽(BGMP)可以通過(guò)阻止微生物入侵腸道而起到抗炎的作用。而NF-κB是體內(nèi)普遍存在、能迅速對(duì)刺激產(chǎn)生反應(yīng)的重要核轉(zhuǎn)錄因子，參與細(xì)胞的凋亡、炎癥等生理?xiàng)l件下的基因調(diào)控。由此可以推測(cè)CGMP阻止結(jié)腸細(xì)胞凋亡的機(jī)制可能是通過(guò)NF-κB信號(hào)通路，其具體機(jī)制還有待于進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。

本研究結(jié)果表明，CGMP可以通過(guò)抑制結(jié)腸組織細(xì)胞的凋亡明顯改善惡唑酮誘導(dǎo)的UC小鼠結(jié)腸黏膜的損傷，CGMP作為一種生物活性物質(zhì)用于治療UC具有潛在的開(kāi)發(fā)前景。

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Milk-Derived Casein Glycomacropeptide Inhibits Ulcerative Colitis in Mice through Apoptosis Resistance

WANG Hua，CHEN Qing-sen*
(Tianjin Key Laboratory of Food Biotechnology, College of Biotechnology and Food Science,Tianjin University of Commerce, Tianjin 300134, China)

In order to explore the effect of casein glycomacropeptide (CGMP) on the apoptosis of colonic mucosal cells in mice with oxazolone-induced ulcerative colitis, the mice were treated respectively with CGMP at the doses of 5, 50 mg/(kg·d)and 500 mg/(kg·d) and sulfasalazine at the dose of 40 mg/(kg·d) by gavage for 4 consecutive days to establish high-, mediumand low-dose CGMP groups and positive control group. The same dose of ultra-pure water was once daily given to the normal control and model control groups. HE staining and TdT2-mediated dUTP nick end labeling (TUNEL) assay were used to evaluate morphological and histological damage as well as epithelial cell apoptosis in the colon of the mice with oxazoloneinduced ulcerative colitis. The results indicated that CGMP at each doses revealed obvious improvement on oxazolone-induced ulcerative colitis, and the improving effect at the dose of 50 mg/(kg·d) did not significantly differ from that of sulfasalazine.In conclusion, CGMP, a bioactive substance, has promising potential as a nutritional therapy for ulcerative colitis through apoptosis.

casein glycomacropeptide；apoptosis；mice；oxazolone；ulcerative colitis

TS201.2

A

1002-6630(2012)01-0230-05

2011-07-21

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(31071522)

王華(1985—)，女，碩士研究生，研究方向?yàn)樯锘钚晕镔|(zhì)的分離篩選。E-mail：wanghuawhwh@126.com

*通信作者：陳慶森(1957—)，男，教授，碩士，研究方向?yàn)榘l(fā)酵生物技術(shù)、蛋白資源開(kāi)發(fā)與應(yīng)用。E-mail：chenqs1689@163.com