王克迪 劉志忠 王瑞珉 康熙雄*

(1.首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京友誼醫(yī)院臨床檢驗中心，北京 100050;2.首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京天壇醫(yī)院實驗診斷中心，北京 100050)

動脈粥樣硬化不僅僅是脂質(zhì)的堆積，而是一種炎性反應(yīng)性疾病。趨化因子(chemokine)與炎性反應(yīng)細(xì)胞表面受體相互作用，在炎性反應(yīng)細(xì)胞定向遷移至炎性反應(yīng)部位中發(fā)揮了關(guān)鍵作用。趨化因子CXC配體16(CXC ligand 16，CXCL16)是2000年發(fā)現(xiàn)的一種趨化因子［1-3］，能激活其唯一受體CXCR6，從而介導(dǎo)T細(xì)胞活化，同時，作為清道夫受體，具有結(jié)合氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein，Ox-LDL)和磷脂酰絲氨酸的作用。頸動脈粥樣硬化是全身血管硬化的一個反映，同時與缺血性腦卒中的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)［4-5］。本研究對急性動脈粥樣硬化性腦卒中患者行頸部血管超聲檢查，用頸動脈內(nèi)-中膜厚度(intimamedian thickness，IMT)、斑塊穩(wěn)定性和斑塊面積(carotid plaque area，CPA)評價頸動脈硬化情況，探討血清CXCL16濃度與頸動脈粥樣硬化的相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1 研究對象

自2008年9月到2009年4月在首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京天壇醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科住院的患者，共135名，其中男性85例，女性50例，年齡在40～70歲之間，平均年齡(58.90±10.40)歲。診斷標(biāo)準(zhǔn)參照中華醫(yī)學(xué)會第四屆腦血管病會議修訂的各類腦血管疾病診斷要點［6］，均經(jīng)臨床和影像學(xué)(CT和/或MRI)、超聲等輔助檢查確診，符合動脈粥樣硬化性腦卒中。排除患有其他原因所致的各類腦梗死、既往有腦出血病史者，無嚴(yán)重心、肺、腦疾病、惡性腫瘤及炎性反應(yīng)性疾病。

1.2 方法

1)標(biāo)本采集:取入組者晨起空腹靜脈血2～3 mL，離心分離血清，采用生物化學(xué)法測定血糖、血脂和肝腎功能。

2)血清CXCL16濃度測定:采用美國R＆D公司生產(chǎn)的人CXCL16定量測定試劑盒，操作嚴(yán)格按照試劑盒說明進行。

3)頸部血管超聲:受檢者取仰臥位，頸下墊薄枕，頭部偏向檢查對側(cè)，充分暴露頸部，依次檢查右側(cè)和左側(cè)頸動脈，記錄頸動脈長軸和短軸圖像，觀察頸動脈內(nèi)膜是否光滑、有無增厚、斑塊部位、斑塊大小和回聲特點。測量指標(biāo)包括IMT、斑塊穩(wěn)定性和CPA。本實驗中IMT為左右兩側(cè)頸總動脈IMT中的較大值，以1.0 mm作為臨界值，IMT＞1.0 mm者為IMT增厚組，IMT≤1.0 mm者為IMT正常組。斑塊穩(wěn)定性評價參照美國心臟病協(xié)會 (American Heart Association，AHA)標(biāo)準(zhǔn)［7］，分為無斑塊組、穩(wěn)定斑塊組和不穩(wěn)定斑塊組。CPA定義為頸動脈(包括頸總動脈、頸內(nèi)動脈、頸外動脈和球部)所有斑塊的橫截面積之和，依CPA四分位數(shù)間距值分為4組。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 13.0軟件進行數(shù)據(jù)分析。應(yīng)用onesample Kolmgorov-Smirnov檢驗所有計量數(shù)據(jù)是否服從正態(tài)性分布，服從正態(tài)性分布者，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，兩均數(shù)的比較采用t檢驗分析，多組均數(shù)比較采用one-way ANOVA;不服從正態(tài)分布者，采用中位數(shù)(四分位數(shù)間距)［M(Q)］表示。計數(shù)資料采用χ2檢驗。以Logistic進行相關(guān)性分析。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 研究對象臨床資料

研究對象的年齡、性別，有無高血壓、糖尿病、吸煙、飲酒史等及生化測量指標(biāo)如血糖、血脂等資料，詳見表1。

表1 研究對象臨床資料Tab.1 Clinical characteristics of the study population

2.2 IMT、頸動脈斑塊穩(wěn)定性和CPA與血清 CXCL16濃度的相關(guān)性

與正常IMT組相比較，IMT增高組血清CXCL16濃度顯著升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);不穩(wěn)定斑塊組中血清CXCL16濃度顯著高于穩(wěn)定斑塊組和無斑塊組;依據(jù) CPA四分位數(shù)間距分為4組:0.00 ～0.140 cm2(n=34)，0.141 ～ 0.512 cm2(n=33)，0.513 ～1.126 cm2(n=35)和 1.127 ～5.148 cm2(n=33)。4 組中 M(Q)值分別為 0(0)，0.337(0.245)，0.736(0.301)和 1.671(1.177)cm2，血清CXCL16水平與CPA密切相關(guān)，詳見表2。

2.3 血清CXCL16濃度與頸動脈粥樣硬化危險因素的相關(guān)性

以IMT、斑塊穩(wěn)定性和CPA分別作為因變量，年齡、性別、三酰甘油(triglyceride，TG)、總膽固醇(total cholesterol，TC)、低密度脂蛋白膽固醇(low density lipoprotein cholesterol，LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(high density lipoprotein cholesterol，HDL-C)、空腹血糖、高血壓病史、2型糖尿病病史、吸煙史和飲酒史作為自變量，進行Logistic回歸分析，結(jié)果顯示高水平CXCL16是高IMT、不穩(wěn)定性斑塊和高CPA的獨立危險因素，詳見表3。

3 討論

本研究結(jié)果表明，高水平CXCL16是高IMT、不穩(wěn)定斑塊和高CPA的獨立危險因素，其與腦卒中患者頸動脈粥樣硬化程度密切相關(guān)。

目前，關(guān)于血清CXCL16濃度與頸動脈粥樣硬化相關(guān)性研究報道甚少，但有研究［8-9］表明CXCL16及其受體CXCR6基因表達濃度與頸動脈粥樣硬化密切相關(guān)，應(yīng)用定量rt-PCR檢測到頸動脈硬化斑塊中CXCL16 mRNA大量表達，而肉眼觀察未見病變的血管顯示CXCL16的低轉(zhuǎn)錄，免疫組化染色顯示CXCL16和CXCR6蛋白存在于單核細(xì)胞、T細(xì)胞富集區(qū)及平滑肌細(xì)胞，與本實驗結(jié)果一致，提示CXCL16與動脈粥樣硬化密切相關(guān)。

表2 IMT、頸動脈斑塊穩(wěn)定性和CPA與血清CXCL16濃度的相關(guān)性Tab.2 Relationship of the stability of carotid plaque，IMT，carotid plaque area and serum CXCL16 concentration

表3 血清CXCL16濃度與頸動脈粥樣硬化危險因素的相關(guān)性Tab.3 The relationship between serum CXCL16 concentration and carotid atherosclerosis risk factors

然而，Aslanian和Charo應(yīng)用雙重標(biāo)記免疫組織化學(xué)方法研究LDL受體缺陷(LDLR－/－)和cxcl16基因敲除(CXCL16－/－)小鼠，發(fā)現(xiàn)與單純LDLR－/－的小鼠相比，CXCL16－/－LDLR－/－的小鼠主動脈弓部及根部有更大的動脈粥樣硬化斑塊，且斑塊區(qū)凋亡細(xì)胞數(shù)量增加，伴有CD68、CCL2、γ-干擾素 mRNA表達增加，CXCR6+細(xì)胞數(shù)有減少趨勢。可見，cxcl16基因缺陷并沒有減輕As，反而伴有As的加重。此外一項研究［10］表明，單核細(xì)胞結(jié)合和攝取OxLDL的能力在CXCL16表達缺陷的小鼠較野生型下降，上述研究進一步表明了CXCL16的動脈硬化保護作用，推測可能與CXCL16作為清道夫受體，可以從血管壁清除有害物質(zhì)，起到血管保護作用相關(guān)。當(dāng)然，上述研究僅提示膜結(jié)合型CXCL16可能的動脈粥樣硬化保護作用，而分泌型CXCL16與膜結(jié)合型CXCL16的功能不完全一致，因此，與本實驗結(jié)果并不矛盾。

頸動脈粥樣硬化是全身動脈粥樣硬化的可靠標(biāo)志，且與腦卒中的發(fā)生密切相關(guān)，多項臨床指南［11］已經(jīng)將高IMT和不穩(wěn)定斑塊作為腦卒中的危險因素。分泌型CXCL16在動脈粥樣硬化斑塊中高表達，可趨化炎性反應(yīng)細(xì)胞向斑塊遷移，加速前炎性反應(yīng)因子，如γ-干擾素的合成、分泌，而γ-干擾素是CXCL16最有效的誘導(dǎo)物，可以增加 CXCL16及其受體的表達［12-13］，如此形成一個正反饋調(diào)節(jié)，加劇斑塊的不穩(wěn)定性。此外，CXCL16作為血管生成因子［14］，誘導(dǎo)血管形成，而新生血管在斑塊破裂中是一個核心事件?？梢姡珻XCL16與動脈粥樣硬化斑塊的發(fā)生和不穩(wěn)定性密切相關(guān)。

本文也存在一定的局限性，樣本量較小，統(tǒng)計學(xué)效力不足，另外尚有一些動脈粥樣硬化相關(guān)因素未考慮，應(yīng)在進一步試驗中積極完善。

［1］Shimaoka T，Kume N，Minami M，et al.Molecular cloning of a novel scavenger receptor for oxidized low density lipoprotein，SR-PSOX，on macrophages［J］.J Biol Chem，2000，275(52):40663-40666.

［2］Matloubian M，David A，Engel S，et al.A transmembrane CXC chemokine is a ligand for HIV-coreceptor Bonzo［J］.Nat Immunol，2000，1(4):298-304.

［3］Wilbanks A，Zondlo S C，Murphy K，et al.Expression cloning of the STRL33/BONZO/TYMSTR ligand reveals elements of CC，CXC，and CX3C chemokines［J］.J Immunol，2001，166(8):5145-5154.

［4］Nowaczenko M，Sarzynska-Dlugosz I，Czlonkowska A.Prevalence of carotid arteries atherosclerotic changes in ischemic stroke patients［J］.Neurol Neurochir Pol，2003，37(1):27-36.

［5］李晶瑋，杜鳳和，徐秀英.老年高血壓患者頸動脈粥樣硬化與超敏C反應(yīng)蛋白的關(guān)系［J］.首都醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2010，31(2):268-271.

［6］陳清棠.腦卒中患者臨床神經(jīng)功能缺損程度評分標(biāo)準(zhǔn)(全國第四屆腦血管病學(xué)術(shù)會議通過)［J］.中華神經(jīng)科雜志，1996，29(6):381-383.

［7］Stary H C，Chandler A B，Dinsmore R E，et al.A definition of advanced types of atherosclerotic lesions and a histological classification of atherosclerosis:a report from the Committee on Vascular Lesions of the Council on Arteriosclerosis，American Heart Association［J］.Circulation，1995，15(9):1512-1531.

［8］呂永青，卜培莉.CXCL16與動脈粥樣硬化的關(guān)系研究［J］.中國實用醫(yī)藥，2009，4(9):60-62.

［9］Wuttge D M，Zhou X，Sheikine Y，et al.CXCL16/SRPSOX is an interferon-gamma-regulated chemokine and scavenger receptor expressed in atherosclerotic lesions［J］.Arterioscler Thromb Vasc Biol，2004，24(4):750-755.

［10］Aslanian A M，Charo I F.Targeted disruption of the scavenger receptor and chemokine CXCL16 accelerates atherosclerosis［J］.Circulation，2006，114(6):583-590.

［11］Blaser T，Hofmann K，Buerger T，et al.Risk of stroke，transient ischemic attack，and vessel occlusion before endarterectomy in patients with symptomatic severe carotid stenosis［J］.Stroke，2002，33(4):1057-1062.

［12］Chandrasekar B，Bysani S，Mummidi S.CXCL16 signals via Gi，phosphatidylinositol3-kinase，Akt，I kappaB kinase，and nuclear factor－kappa B and induces cell－cell adhesion and aortic smooth muscle cell proliferation［J］.J Biol Chem，2004，279(5):3188-3196.

［13］Ludwig A，Weber C.Transmembrane chemokines:versatile‘special agents’in vascular inflammation［J］.Thromb Haemost，2007，97(5):694-703.

［14］Zhuge X，Murayama T，Arai H，et al.CXCL16 is a novel angiogenic factor for human umbilical vein endothelial cells［J］.Biochem Biophys Res Commun，2005，331(4):1295-1300.