吳穎穎，葉琇錦 綜述

(浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院骨髓移植中心，浙江杭州310003)

微泡(microvesicles)是廣泛存在于正常細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞的胞外細(xì)胞器樣結(jié)構(gòu)，目前研究發(fā)現(xiàn)，其能運(yùn)載多種特異性蛋白、微小RNA及DNA片段，是細(xì)胞間信號(hào)傳遞的新途徑。微泡與腫瘤的免疫逃避、微環(huán)境建立等密切相關(guān)，對(duì)研究腫瘤進(jìn)展意義深遠(yuǎn)。但限于目前對(duì)微泡結(jié)構(gòu)認(rèn)識(shí)的不完善和分離技術(shù)的不成熟，微泡的研究尚在起步階段。

1 微泡的性狀和功能

1.1 微泡的性狀 微泡最早于1981年提出，當(dāng)時(shí)認(rèn)為微泡是細(xì)胞凋亡產(chǎn)物或是溶酶體的變異，是由腫瘤細(xì)胞分泌的含核苷酸酶活性物質(zhì)的一種微小囊泡結(jié)構(gòu)［1］。直至1996年Raposo等發(fā)現(xiàn)，EB病毒感染的B細(xì)胞能分泌內(nèi)源性微泡結(jié)構(gòu)，該微泡結(jié)構(gòu)是一種抗原遞呈載體［2］，并把這種功能性微泡命名為外泌體(exosome)。近十幾年來，對(duì)于微泡的研究已涵蓋炎癥、凝血機(jī)制、腫瘤等多個(gè)領(lǐng)域。微泡可能含有多種亞型，其中對(duì)外泌體的研究最早、也最為深入。外泌體大小一般在50～100 nm之間，密度為1.13～1.19 g/ml，膜脂富含膽固醇、鞘磷脂和神經(jīng)酰胺，含有豐富的脂質(zhì)筏結(jié)構(gòu)。外泌體是細(xì)胞多泡體(multivesicular body，MVB)的延續(xù)，為MVB與細(xì)胞質(zhì)膜融合向胞外釋放的產(chǎn)物。無論是結(jié)構(gòu)和膜成分都與內(nèi)體(endosomes)有較大相似性。其膜上含有GPI鉚定蛋白、CD63、TNFR1，神經(jīng)酰胺為其分泌必需，分泌主要依靠轉(zhuǎn)運(yùn)必需內(nèi)吞體分選復(fù)合物(endosomal sorting complex required for transport，ESCRT)，多 數(shù) 為 持 續(xù) 性 釋 放［3］。Racchetti等最近提出微泡新的族群——脫落小泡(shedding vesicles，SV)，其與外泌體存在較多方面的差異，SV一般大于200 nm，甚至超過1 μm，無規(guī)則形狀，含有收縮蛋白、金屬蛋白酶及整合素，脂類成分以膽固醇為主，一般不會(huì)持續(xù)釋放［4］。從分泌原理上，外泌體是細(xì)胞內(nèi)體與細(xì)胞膜融合，向外界釋放的胞吐產(chǎn)物，而SV是由細(xì)胞膜特殊部位凸起形成的微小出泡結(jié)構(gòu)，通過膜蛋白介導(dǎo)的收縮運(yùn)動(dòng)脫離母細(xì)胞，SV常于各種刺激作用后產(chǎn)生，存在功能性膜結(jié)構(gòu)重排和特異蛋白及受體的濃聚［5］。

1.2 微泡的物質(zhì)組成 微泡膜主要由磷脂雙分子層、膜蛋白、骨架蛋白和伴侶蛋白等基本成分組成，而特異性膜蛋白成分，可能介導(dǎo)了不同細(xì)胞來源的微泡的特殊功能。如中性粒細(xì)胞和腫瘤來源的微泡富含金屬蛋白酶和蛋白水解酶，作用于細(xì)胞基質(zhì)，參與炎癥擴(kuò)散及腫瘤轉(zhuǎn)移。巨噬細(xì)胞的微泡膜有協(xié)助其與血小板綁定的P選擇性糖蛋白配體1(PSGL1)［6］，中性粒細(xì)胞釋放的微泡含有強(qiáng)活性的整合素而易于和血小板粘附［7］。

微泡內(nèi)含有RNA物質(zhì)、DNA片段，特別是microRNA。microRNA最早由Valadi研究組從人和鼠的肥大細(xì)胞的微泡中分離到［8］，之后有較多的研究驗(yàn)證了microRNA可能為功能性物質(zhì)。Hunter等發(fā)現(xiàn)，微泡中的microRNA可以調(diào)節(jié)血液細(xì)胞的分化、代謝及免疫功能［9］。Hadi等研究骨髓來源的小鼠肥大細(xì)胞，其分泌的微泡包含1 300余種mRNA和100余種microRNA;體外的轉(zhuǎn)錄發(fā)現(xiàn)，其中部分mRNA具備生物學(xué)功能性，可在受體細(xì)胞表達(dá)［10］。

1.3 與受體細(xì)胞的交互作用 微泡是細(xì)胞間信號(hào)傳遞的良好平臺(tái)，比起離子擴(kuò)散和蛋白運(yùn)載，微泡能將載體運(yùn)送到更遠(yuǎn)的距離，且保證載物的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，達(dá)到供體細(xì)胞和受體細(xì)胞的特異性匹配;更重要的是，微泡可實(shí)現(xiàn)細(xì)胞間基因水平的信號(hào)交流，能更加高效地調(diào)控細(xì)胞功能。

最近，對(duì)微泡與受體細(xì)胞的交互作用有了進(jìn)一步了解。首先，微泡通過受體配體結(jié)合與受體細(xì)胞粘附，如成熟樹突狀細(xì)胞(DCs)微泡上的細(xì)胞粘附分子1(ICAM1)可與淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原(LFA1)結(jié)合，后者常在CD8+DCs和活化T細(xì)胞上表達(dá)［11］。各種細(xì)胞膜上相應(yīng)受體的差異，決定了受體細(xì)胞對(duì)微泡俘獲的特異性。微泡攜帶的microRNA可修飾細(xì)胞表型，調(diào)控膜上的受體表達(dá)，增減對(duì)微泡的俘獲能力。然后，在表面受體下游分子的級(jí)聯(lián)作用下觸發(fā)受體細(xì)胞內(nèi)吞微泡，微泡可直接與細(xì)胞膜融合，釋放出內(nèi)容物及特異性膜成分，也可以進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部或與內(nèi)體融合，繼續(xù)后續(xù)的細(xì)胞內(nèi)作用。

2 腫瘤細(xì)胞分泌的微泡(tumor-derived membrane microvesicles，TMV)

與正常細(xì)胞一樣，腫瘤細(xì)胞也能分泌微泡，Khalid等在電鏡下拍攝到神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的微泡從分泌到脫落的圖像，證實(shí)了這一過程的存在［12］。早期的體內(nèi)及體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，微泡分泌量與腫瘤侵襲性相關(guān)，推測(cè)TMV介導(dǎo)腫瘤進(jìn)展;目前研究發(fā)現(xiàn)，TMV除了參與腫瘤微環(huán)境的調(diào)節(jié)，在腫瘤血管生成、細(xì)胞外基質(zhì)降解、免疫逃避、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等方面都有重要意義，TMV運(yùn)載的可溶性蛋白、核酸物質(zhì)、功能性跨膜蛋白、酪氨酸激酶受體等多種物質(zhì)為腫瘤進(jìn)展提供了物質(zhì)基礎(chǔ)。

2.1 TMV與腫瘤微環(huán)境 腫瘤細(xì)胞的存活和轉(zhuǎn)移需要適宜微環(huán)境為其提供營養(yǎng)支持及免疫庇護(hù)。TMV可能是腫瘤細(xì)胞與周圍環(huán)境的交互中介。在TMV中已被分離出多種粘附蛋白及其受體、細(xì)胞外基質(zhì)蛋白酶和促血管生長因子，如 MMPs、VEGF、HGF、CD44 和 β-1 整合素等［13］。這些物質(zhì)在基質(zhì)釋放時(shí)能增強(qiáng)腫瘤的粘附能力及其對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)的分解能力，使病灶轉(zhuǎn)移成為可能。新生血管是腫瘤存活和生長的關(guān)鍵，TMV刺激基質(zhì)成纖維細(xì)胞分泌血管生成前體物質(zhì)，同時(shí)將蓄集的活化EGFR(A431、A549、DLD-1)傳遞給周圍的成纖維細(xì)胞［14］，MMPs、膜脂與 EGFR互相協(xié)同，其中 MMP2、MMP9、MT1-MMP能刺激內(nèi)皮深入基質(zhì)膠體，脂質(zhì)則影響內(nèi)皮細(xì)胞遷移［15］。TMV運(yùn)載的組織因子(tissue factor，TF)還能擾亂凝血功能，誘發(fā)血栓形成，破壞正常組織器官的結(jié)構(gòu)和功能［16］。

2.2 TMV與免疫抑制 腫瘤細(xì)胞可通過TMV擴(kuò)大免疫抑制，使異常增殖的腫瘤細(xì)胞不被機(jī)體識(shí)別和攻擊，TMV參與免疫抑制體現(xiàn)在兩個(gè)方面。首先，TMV通過傳遞特異性配體與免疫細(xì)胞結(jié)合，調(diào)節(jié)各型免疫細(xì)胞的增殖和分化。Valenti等研究發(fā)現(xiàn)，TMV能阻礙單個(gè)核細(xì)胞向DCs分化并促進(jìn)骨髓分化為介導(dǎo)免疫抑制的細(xì)胞系。從正常人群體內(nèi)獲得的CD14+單核細(xì)胞在含有IL-4和集落刺激因子的TMV的作用下，分化成HLA-DR(-/low)的族群，其缺乏共刺激因子如CD80和CD86，還伴隨其它細(xì)胞因子如 IL-6、TNF-α 和 TGF-β［17］分泌的改變。TMV也可將TGF-β遞呈給CD4+調(diào)節(jié)T細(xì)胞(Treg)促進(jìn)免疫抑制作用［18］。Clayton發(fā)現(xiàn)，TMV抑制外周血中淋巴細(xì)胞對(duì)IL-2的反應(yīng)。TMV一方面抑制IL-2以減弱NK細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞的抗腫瘤反應(yīng)，另一方面通過TGF-β增強(qiáng)CD4+/25+/foxp3+調(diào)節(jié) T細(xì)胞的免疫抑制作用［19］。其次，TMV介導(dǎo)T細(xì)胞凋亡，TMV可通過FASL(CD95L)與CD4+T細(xì)胞上的相應(yīng)受體結(jié)合促進(jìn)細(xì)胞凋亡，TMV遞呈的半乳凝集素-9(Galectin 9)與TIM3受體結(jié)合也同樣可導(dǎo)致 T 細(xì)胞的凋亡［20］。

2.3 TMV改變腫瘤侵襲相關(guān)表型 體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，侵襲性膠質(zhì)瘤細(xì)胞通過TMV向非侵襲性腫瘤細(xì)胞群轉(zhuǎn)運(yùn)突變受體EGFRvIII，隨后受體細(xì)胞出現(xiàn)MAPK和Akt信號(hào)通路的活躍，其上的 EGFRIII調(diào)節(jié)基因如 VEGF、Bcl-XL、p27 發(fā)生表型改變。相反，用EGFRvIII激酶抑制劑作用于TMV，則明顯減少了受體細(xì)胞的相關(guān)信號(hào)反應(yīng)，證實(shí)TMV運(yùn)載的EGFRvIII與受體細(xì)胞級(jí)聯(lián)反應(yīng)的相關(guān)性［21］。肺癌和乳腺癌細(xì)胞可攝取血小板來源微泡，獲得血小板相關(guān)的粘附分子，從而增加粘附和轉(zhuǎn)移潛能［22］。Skog等發(fā)現(xiàn)，腦微血管上皮細(xì)胞可攝取惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞分泌的含有 mRNA、microRNA 的微泡［23］，推測(cè)腫瘤細(xì)胞可通過microRNA改變普通細(xì)胞表型，從而改變細(xì)胞功能，有利于腫瘤的生存和擴(kuò)增。

最近報(bào)道，在神經(jīng)母細(xì)胞瘤活性細(xì)胞中分離出高含量的外源性DNA(exoDNA)，伴隨CMyc致瘤基因的高表達(dá)，推測(cè)TMV可能參與逆轉(zhuǎn)錄，逆轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座子的異常啟動(dòng)和互補(bǔ)DNA的插入可介導(dǎo)基因突變、重排及缺失［24］，腫瘤細(xì)胞通過TMV干擾周圍或遠(yuǎn)處細(xì)胞的基因穩(wěn)定性，破壞正常組織器官的結(jié)構(gòu)和功能。

2.4 TMV與腫瘤耐藥 耐藥腫瘤細(xì)胞普遍存在藥物外排運(yùn)載體P-gp的高表達(dá)，Bebawy等將耐藥腫瘤細(xì)胞的微泡與藥物敏感腫瘤細(xì)胞共培養(yǎng)，通過免疫示蹤技術(shù)發(fā)現(xiàn)了微泡與藥敏腫瘤細(xì)胞發(fā)生結(jié)合，后者細(xì)胞膜會(huì)表達(dá)P-gp并出現(xiàn)對(duì)蒽環(huán)類抗生素的耐藥現(xiàn)象［25］。腫瘤通過微泡在細(xì)胞間迅速傳遞P-gp，獲得多藥耐藥(MDR)生物學(xué)特性［20］，這可能是一種新型的細(xì)胞耐藥現(xiàn)象形成模式，但其如何調(diào)節(jié)相關(guān)蛋白轉(zhuǎn)錄，是否涉及microRNA的參與還未見報(bào)道。此外，類似實(shí)驗(yàn)還觀察到腫瘤細(xì)胞可將抗腫瘤藥物蓄積在TMV中泵出胞外［21］，在順鉑不敏感的腫瘤細(xì)胞的微泡內(nèi)，順鉑含量為敏感腫瘤的2.6倍［26］。K562紅白血病細(xì)胞的TMV內(nèi)有膜攻擊復(fù)合體(MAC)的聚集，通過出泡清除這些復(fù)合體而免受機(jī)體免疫攻擊［27］。

3 TMV臨床應(yīng)用前景

3.1 腫瘤疫苗 腫瘤疫苗的基本原理是利用微泡能遞呈腫瘤抗原的特點(diǎn)，增強(qiáng)機(jī)體T細(xì)胞抗腫瘤免疫的能力。目前多個(gè)腫瘤疫苗已進(jìn)入臨床Ⅰ期試驗(yàn)，其中，AEX(ascitic cell-derived exosomes)疫苗是將結(jié)腸癌患者腹水提取的微泡與患者血清提取的單個(gè)核細(xì)胞共培養(yǎng)，將產(chǎn)生的致敏DCs回輸患者體內(nèi)，誘導(dǎo)強(qiáng)烈的T細(xì)胞抗腫瘤作用;試驗(yàn)表明75%患者發(fā)生了特異性 T細(xì)胞反應(yīng)，無明顯毒副反應(yīng)［28］。DEX(dendritic cell-derived exosomes)疫苗則為人工合成的微泡，先從患者DCs上獲得臨床安全等級(jí)的微泡，模擬體內(nèi)抗原遞呈過程將腫瘤肽鏈連接于微泡膜上的MHC1和MHC2分子上，洗滌白細(xì)胞抗原，注射入患者體內(nèi);研究證明至少4次注射后可在患者體內(nèi)獲得足量微泡。而肽鏈的鏈接在一半的黑色素瘤患者及1/3的肺癌患者穩(wěn)定，約1/3受試患者產(chǎn)生了預(yù)期免疫反應(yīng)［29］。另外，一個(gè)正在開展的Ⅱ期臨床試驗(yàn)，用IFN-γ處理的DCs產(chǎn)生的微泡抑制Treg細(xì)胞作用，用于化療后病情穩(wěn)定的非小細(xì)胞肺癌患者［30］。

此外，不少研究致力于腫瘤疫苗制作工藝的改進(jìn)，微泡和其它技術(shù)聯(lián)合，如添加DCs催熟劑，抑制Treg細(xì)胞作用，添加熱休克蛋白及改變腫瘤細(xì)胞表面的細(xì)胞因子，以及添加某些促進(jìn)擴(kuò)散的活性物質(zhì)。有研究將超抗原葡萄球菌腸毒素A(SEA)修飾微泡，并添加防水性跨膜域(transmembrane domain)，以增強(qiáng)抗腫瘤作用［31］。

由于參與微泡的試驗(yàn)對(duì)象多為晚期癌癥或治療效果不佳的患者，其臨床療效往往受到低估，微泡的治療意義，在于腫瘤早期加強(qiáng)體內(nèi)抗腫瘤反應(yīng)，預(yù)防腫瘤轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)，延長手術(shù)和放化療后患者無病生存期，對(duì)于難治晚期患者的治療意義并不大。不能忽視的是，微泡也同時(shí)介導(dǎo)免疫抑制作用，當(dāng)缺少DCs遞呈時(shí)，微泡在人和鼠類的實(shí)驗(yàn)中都表現(xiàn)對(duì)NK細(xì)胞的抑制，故反而促進(jìn)了腫瘤生長［32］。微泡也可能影響CD4+T細(xì)胞的功能，腫瘤疫苗進(jìn)入廣泛的臨床應(yīng)用尚存在一定風(fēng)險(xiǎn)。

3.2 腫瘤標(biāo)志物 微泡內(nèi)microRNA發(fā)現(xiàn)為腫瘤標(biāo)志物的研發(fā)提供了新思路。microRNAs是由21～25個(gè)核苷酸組成的內(nèi)源性非編碼小RNA分子，可靶向1個(gè)或多個(gè)mRNA-UTR，通過翻譯水平的抑制或斷裂靶mRNAs達(dá)到調(diào)節(jié)基因的目的。近年有研究在循環(huán)系統(tǒng)測(cè)到microRNA。陳曦等用Solexa法篩查出血清中近百種microRNA，這些microRNA對(duì)RNA酶穩(wěn)定，且在血清小RNA中占主要成分。在非小細(xì)胞肺癌和結(jié)腸癌患者的血清中，發(fā)現(xiàn)腫瘤相關(guān)性microRNA顯著高于對(duì)照組［10］。而且部分microRNA與腫瘤發(fā)生和進(jìn)展的關(guān)系已有較為深入的研究，如microRNA-221預(yù)示著早期肝癌和神經(jīng)母細(xì)胞瘤［33］。Enders等回顧性研究發(fā)現(xiàn)，結(jié)腸癌患者miR-92特異性增高，其對(duì)診斷具有89%的敏感性和70%的特異性［34］。因此，微泡運(yùn)載microRNA或許是其穩(wěn)定存在循環(huán)中的一種形式，且微泡往往包含多種microRNA，其來自細(xì)胞內(nèi)的精密篩選還是隨機(jī)組合目前尚無相關(guān)報(bào)道。

不可否認(rèn)，microRNA作為腫瘤標(biāo)志物有廣闊前景，具有非侵入性、取材方便及檢測(cè)迅速的特點(diǎn)，有望在發(fā)現(xiàn)早期腫瘤及監(jiān)測(cè)腫瘤轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)方面有所突破［35］。另外，最近報(bào)道血清分離到的TMV內(nèi)含有DNA片段，這為無創(chuàng)分析患者腫瘤基因型和表型提供了途徑，而且DNA結(jié)構(gòu)比RNA穩(wěn)定，更適合作為腫瘤檢測(cè)的標(biāo)志物［24］。

4 展望

微泡的研究為細(xì)胞間信號(hào)交流提供了新途徑，小RNA及DNA片段的發(fā)現(xiàn)，為細(xì)胞間遺傳物質(zhì)的傳遞提供依據(jù)，但是這些RNA及DNA的作用機(jī)制需要進(jìn)一步研究，尤其是微泡內(nèi)microRNA的濃聚來自精密篩選還是隨機(jī)截取，對(duì)研究microRNA運(yùn)輸、傳遞和調(diào)節(jié)功能有一定意義。TMV在免疫學(xué)的研究，為解釋腫瘤的免疫抑制及逃脫細(xì)胞凋亡提供新思路;同時(shí)，為更多臨床應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)，如基于腫瘤免疫抑制的原理，開展免疫藥物的研發(fā)，人工制備微泡用于體內(nèi)靶向治療等。

另一方面微泡亞型的研究需要進(jìn)一步細(xì)化，各種文獻(xiàn)報(bào)道的微泡類似物尚存在著概念的混雜，除外泌體、脫落小泡外，其它類似的命名還有分泌性微泡(secreted microvesicle)、膜顆粒(membrane particles)、外泌體樣小泡(exosome-like vesicles)等，這些命名是否存在概念的重合尚不明確。微泡亞型的劃分一方面需要對(duì)微泡結(jié)構(gòu)、分泌方式和受體細(xì)胞交互作用的進(jìn)一步研究，另一方面依賴對(duì)微泡分離技術(shù)的提高。目前的實(shí)驗(yàn)技術(shù)主要依靠離心速率來分離各類微泡，但物理作用能導(dǎo)致微泡結(jié)構(gòu)及大小的改變。流式細(xì)胞儀可以同時(shí)檢測(cè)物質(zhì)的大小和密度，但300 nm以下的囊泡無法被測(cè)到。相信，隨著對(duì)微泡研究的深入，今后一定能發(fā)現(xiàn)免疫學(xué)特異性標(biāo)志物用于微泡的鑒定及亞型的鑒別。

［1］TRAMS E G，LAUTER C J，SALEM N Jr，et al.Exfoliation of membrane ecto-enzymes in the form of micro-vesicles［J］.Biochim Biophys Acta，1981，645(1):63-70.

［2］RAPOSO G，NIJMAN HW，STOORVOGEL W，et al.Blymphocytes secrete antigen-presenting vesicles［J］.J Exp Med，1996，183(3):1161-1172.

［3］THéRY C，OSTROWSKI M，SEGURA E，et al.Membrane vesicles as conveyors of immune responses［J］.Nat Rev Immunol，2009，9(8):581-593.

［4］COCUCCI E，RACCHETTI G，MELDOLESI J，et al.Shedding microvesicles:artefacts no more ［J］.Trends Cell Biol，2009，19(2):43-51.

［5］TRAJKOVIC K，HSU C，CHIANTIA S，et al.Ceramide triggers budding of exosome vesicles into multivesicular endosomes ［J］.Science，2008，319(5867):1244-1247.

［6］DEL CONDE I，SHRIMPTON CN，THIAGARAJAN P，et al.Tissue-factor-bearing microvesicles arise from lipid rafts and fuse with activated platelets to initiate coagulation ［J］.Blood，2005，106(5):1604-1611.

［7］FLAUMENHAFT R，DILKS JR，RICHARDSON J，et al.Megakaryocyte-derived microparticles:direct visualization and distinction from platelet-derived microparticles［J］.Blood，2009，113(5):1112-1121.

［8］VALADI H，EKSTR M K，BOSSIOS A，et al.Exosome-mediated transfer of mRNAs and microRNAsisa novelmechanism ofgenetic exchange between cells［J］.Nature Cell Biology，2007，9(6):654-659.

［9］HUNTER M P，ISMAIL N，ZHANG X，et al.Detection ofmicroRNA expression in human peripheral blood microvesicles［J］.PLoS ONE，2008，3(11):1-11.

［10］CHEN X，BA Y，MA L，et al.Characterization of microRNAs in serum:a novel class of biomarkers for diagnosis of cancer and other diseases［J］.Cell Res，2008，18(10):997-1006.

［11］NOLTE-THOEN，E.N.，BUSCHOW，etal.Activated T-cells recruit exosomes secreted by dendritic cells via LFA-1 ［J］.Blood，2009，113(9):1977-1981.

［12］AL-NEDAWI K，MEEHAN B，MICALLEF J，et al.Intercellular transfer of the oncogenic receptor EGFRvIII by microvesicles derived from tumour cells［J］.Nat Cell Biol，2008，10(5):619-624.

［13］KIM C W，LEE H M，LEE T H，et al.Extracellularmembrane vesicles from tumorcells promote angiogenesis via sphingomyelin ［J］.Cancer Res，2002，62(21):6312-6317.

［14］MURALIDHARAN-CHARI V，CLANCYJW，SEDGWICK A，et al.Microvesicles:mediators of extracellular communication during cancer progression ［J］.J Cell Sci，2010，123(10):1603-1611.

［15］TARABOLETTI G，D＇ASCENZO S，BORSOTTI P，et al.Shedding of the matrix metalloproteinases MMP-2，MMP-9，and MT1-MMP as membrane vesicle-associated components by endothelial cells［J］.Am J Pathol，2002，160(2):673-680.

［16］ZWICKER J I，LIEBMAN H A，NEUBERG D，et al.Tumor-derived tissue factor-bearing microparticles are associated with venous thromboembolic events in malignancy［J］.Clin Cancer Res，2009，15(22):6830-6840.

［17］VALENTI R，HUBER V，F(xiàn)ILIPAZZI P，et al.Human tumor-released microvesicles promote the differentiation of myeloid cells with transforming growth factor-beta-mediated suppressive activity on T lymphocytes［J］.Cancer Res，2006，66(18):9290-9298.

［18］CLAYTON A，MITCHELL J P，et al.Human tumor-derived exosomes selectively impair lymphocyte responses to interleukin-2 ［J］.Cancer Res，2007，67(15):7458-7466.

［19］FERNáNDEZ-MESSINA L， ASHIRU O.Differential mechanisms of shedding of the glycosylphosphatidylinositol (GPI)-anchored NKG2D ligands［J］.J Biol Chem，2010，285(12):8543-8551.

［20］KLIBI J，NIKI T，RIEDEL A，et al.Blood diffusion and Th1-suppressive effects of galectin-9-containing exosomes released by Epstein Barr virus-infected nasopharyngeal carcinoma cells［J］.Blood，2009，113(9):1957-1966.

［21］AL-NEDAWI K，MEEHAN B，MICALLEF J，et al.Intercellular transfer of the oncogenic receptor EGFRvIII by microvesicles derived from tumour cells［J］.Nat Cell Biol，2008，10(5):619-624.

［22］PAP E，PáLLINGER E，F(xiàn)ALUS A.The role of membrane vesicles in tumorigenesis［J］.Crit Rev Oncol Hematol，2010，17(9):77-80.

［23］SKOG J，WURDINGER T，VAN RIJN S，et al.Glioblastoma microvesiclestransportRNA and proteins that promote tumour growth and provide diagnostic biomarkers［J］.Nat Cell Biol，2008，10(12):1470-1476.

［24］BALAJ L，LESSARD R，DAI L，et al.Tumour microvesicles contain retrotransposon elements and amplified oncogene sequences ［J］.Nat Commun，2011，2(2):180.

［25］BEBAWY M，COMBES V，LEE E，et al.Membrane microparticles mediate transfer of P-glycoprotein to drug sensitive cancer cells［J］.Leukemia，2009，23(9):1643-1649.

［26］SAFAEI R，LARSON B J，CHENG T C，et al.Abnormallysosomaltrafficking and enhanced exosomal exportofcisplatin in drug-resistant human ovarian carcinoma cells［J］.Mol Cancer Ther，2005，4(10):1595-1604.

［27］PILZER D，F(xiàn)ISHELSON Z.Mortalin/GRP75 promotes release ofmembrane vesicles from immune attacked cells and protection from complement-mediated lysis ［J］.Int Immunol，2005，17(9):1239-1248.

［28］ANDRE F，SCHARTZ N E，MOVASSAGH M，et al.Malignant effusions and immunogenic tumourderived exosomes［J］.Lancet，2002，360(9329):295-305.

［29］ESCUDIER B，DORVAL T，CHAPUT N，et al.Vaccination of metastatic melanoma patients with autologous dendritic cell(DC)derivedexosomes:results of the first phase I clinical trial［J］.J Transl，2005，3(1):10.

［30］VIAUD S，TERMEM，F(xiàn)LAMENTC，etal.Dendritic cell-derived exosomes promote natural killer cell activation and proliferation:a role for NKG2D ligands and IL-15Rα ［J］.PLoS ONE，2009，4(3):1-12.

［31］XIU F，CAI Z，YANG Y，et al.Surface anchorage of superantigen SEA promotes induction of specific antitumorimmune response by tumor-derived exosomes［J］.J Mol Med，2007，85(5):511-521.

［32］LIU C，YU S，ZINN K，et al.Murine mammary carcinoma exosomes promote tumor growth by suppression of NK cell function ［J］.J Immunol，2006，176(3):1375-1385.

［33］PINEAU P，VOLINIA S，McJunkin K，et al.MiR-221 overexpression contributes to liver tumorigenesis［J］.Proc Natl Acad Sci USA，2010，107(1):264-269.

［34］NG E K，CHONG W W，JIN H，et al.Differential expression of microRNAs in plasma of patients with colorectal cancer:a potential marker for colorectal cancer screening ［J］.Gut，2009，58(10):1375-1381.

［35］BRASE J C，WUTTIG D，KUNER R，et al.Serum microRNAs as non-invasive biomarkers for cancer［J］.Mol Cancer，2010，9(9):306.