北京市東城區(qū)藥品檢驗所（100027）尤立華 趙希賢

基層藥檢所的工作是按照藥品的質量標準對轄區(qū)的抽驗藥品進行檢驗，在對不合格藥品的判定過程中，除嚴格執(zhí)行標準外，還要對各種影響因素進行試驗分析，從而得出正確的判定結果。近期一份抽驗檢品正天丸的檢測過程表明，僅僅依靠標準有時不能得出正確的結論，因為各種試劑、各種條件經(jīng)常會發(fā)生變化，所以要求我們檢驗人員要具備各種檢驗標準的分析研究能力，才能得出一份合格的檢驗報告。

正天丸[1]是由鉤藤、白芍、川芎、當歸 、地黃、白芷等十五味中藥組成，具有疏風活血、養(yǎng)血平肝、通絡止痛的功效，用于外感風邪、瘀血阻絡、血虛失養(yǎng)、肝陽上亢引起的偏頭痛，緊張性頭痛，神經(jīng)性頭痛，頸椎病型頭痛，經(jīng)前頭痛。質量標準為國家藥品標準[2]WS3-B-3169-98-（2006）。

按照質量標準進行含量測定，芍藥苷含量測定值很低，且測定時樣品間的重現(xiàn)性不好，為了得出正確的判定結果，對供試品制備過程進行分析，發(fā)現(xiàn)不同批號的氧化鋁可嚴重影響檢測的結果，因此在檢驗中，當發(fā)生不合格等情況時要求我們認真查找測定過程中的影響因素，從而得出正確的判定結論。我們以對正天丸含量測定的具體情況為例，進行具體闡述，內容如下：

1 儀器與試藥

1.1 儀器 島津LC2010液相色譜儀。

1.2 試藥 芍藥苷對照品(批號：110736-201035)（由中國藥品生物制品鑒定所提供）；層析用中性氧化鋁（100～200目）（批號：F20080305，F(xiàn)20090804，F(xiàn)20110124)（國藥集團化學試劑有限公司生產(chǎn)）；正天丸（批號：110515H）（華潤三九醫(yī)藥股份有限公司生產(chǎn)）；試劑為分析純，乙腈為色譜純。

2 方法

2.1 正天丸質量標準含量測定方法

2.1.1 色譜條件

色譜柱：WAT045905C18（150mm×4.6mm，5μm）；流動相為乙腈-水（15：85）；檢測波長為230nm；溫度：30℃；流速：1.0ml/min。

2.1.2 對照品溶液制備

取芍藥苷對照品，精密稱定，置50ml的容量瓶中，加甲醇40ml后超聲處理10分鐘使其充分溶解，加甲醇至刻度，搖勻，精密量取1ml，將其置于10ml的容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，制成每1ml含39.94μg的溶液，即得所需的對照品溶液。

2.1.3 供試品溶液制備

取本品30g，研細，取約1g，精密稱定，加50%乙醇15ml，超聲處理（功率200W，頻率59KHZ）30分鐘，用適量的50%乙醇洗滌容器和殘渣，洗液并入濾液中，蒸干，殘渣中加入80%甲醇5ml使之溶解，加在中性氧化鋁柱（內徑0.9cm，100～200目中性氧化鋁4.5g）上，用80%甲醇80ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇溶解，轉移至25ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液即得。

2.1.4 測定法 精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀中進行測定，即得。

2.1.5 系統(tǒng)適應性試驗

在上述色譜條件下，取對照品溶液，連續(xù)進樣5次，其峰面積測量值的RSD值為1.56%。理論板數(shù)均大于5000。樣品中芍藥苷峰附近未見干擾峰。

2.2 本批樣品含量測定結果

根據(jù)標準規(guī)定，測定結果應不少于0.5mg/g，但樣品測定結果為0.06mg/g 和0.09mg/g ，結果表明兩份樣品含量低于標準限值近8倍，且樣品間平行性不好。由于系統(tǒng)適應性試驗符合要求，復測時對照品重現(xiàn)性良好，故排除儀器設備的影響；又因芍藥苷含量測定多采用超聲提取的方法[3][4]，未發(fā)現(xiàn)超聲提取對芍藥苷測定有重大影響，因此考慮針對氧化鋁柱層析過程進行試驗，以找到檢測過程中芍藥苷含量測定結果的影響因素。

2.3 氧化鋁柱層析洗脫速度不同時樣品的測定結果

一般試驗時，氧化鋁柱層析的洗脫速度會對含量測定結果產(chǎn)生影響，因此設計試驗，分別采用不同的洗脫速度，層析氧化鋁用量為2g進行實驗，測定結果（見附表1）。

實驗結果表明：洗脫速度對芍藥苷含量測定結果有一定影響，但洗脫速度不同，測定結果的差別不大，不會對檢測結果產(chǎn)生本質性的影響。

2.4 不同用量氧化鋁的樣品測定

氧化鋁用量不同，對成分的吸附和保留程度也不同，因此采用不同用量氧化鋁處理樣品，比較芍藥苷的測定結果，層析氧化鋁的用量分別為0g，2g和4g，測定結果（見附表2）。

實驗結果表明：氧化鋁用量不同時，對芍藥苷的測定結果有很大影響，不進行氧化鋁柱層析洗脫樣品即氧化鋁用量為0g時，測定結果為合格。

2.5 不同批號及不同用量氧化鋁樣品測定結果

樣品采用氧化鋁柱層析的方法測定結果為不合格，而不進行氧化鋁柱層析則合格，是標準有錯誤嗎？但本藥品已研發(fā)多年，且其它藥品的芍藥苷測定過程也有采用氧化鋁柱層析的。如果本次檢驗不采用氧化鋁處理，那么檢驗結果不合法，由此可見，氧化鋁就成為影響含量測定結果的關鍵因素?？紤]到是否是氧化鋁本身存在差異，因此我們考察了不同批號的氧化鋁對芍藥苷測定結果的影響，測定結果見附表3。

實驗結果表明，當采用11批號層析用氧化鋁測定時，使用不同用量的氧化鋁處理后的樣品，含量測定結果差別不大，且均符合標準規(guī)定，即含量測定值為合格。因此采用不同批號的氧化鋁測定時，芍藥苷的含量測定結果有很大差異，此差異可導致檢測判定結果的不同。

2.6 不同批號及不同用量氧化鋁對芍藥苷對照品測定結果

由于樣品中含有其它成分，為排除其它成分可能對氧化鋁柱層析吸附作用的干擾，同時也為了驗證不同批號氧化鋁對芍藥苷含量測定結果的影響，設計實驗，采用芍藥苷對照品溶液進行氧化鋁柱層析，以驗證不同批號不同用量層析用氧化鋁對芍藥苷含量測定的影響。

精密吸取對照品溶液3ml（3ml芍藥苷的含量為1.198mg），加在中性氧化鋁柱（內徑0.9cm，100～200目中性氧化鋁）上，其余按照供試品制備項下操作，測定結果見附表4。

實驗結果表明：進行氧化鋁柱層析后，和實際芍藥苷含量1.198mg比較，芍藥苷含量均下降，且證實了三種批號層析用氧化鋁處理芍藥苷后，測定結果均不相同。

附表1 不同洗脫速度樣品測定結果（n=2）

附表2 氧化鋁不同用量樣品測定結果（n=2）

附表3 不同批號及不同用量氧化鋁樣品測定結果（n=2）

附表4 不同批號及不同用量氧化鋁對照品測定結果（n=2）（mg）

3 討論

3.1 在過氧化鋁柱層析時，相同用量的氧化鋁，洗脫速度不同，對芍藥苷的吸附多少不同，結果不同，應適當控制洗脫速度。

3.2 在過氧化鋁柱層析時，氧化鋁用量不同，也會對芍藥苷含量測定的結果產(chǎn)生影響，但按照標準操作應能達到要求。

3.3 不同批號的柱層析氧化鋁對芍藥苷含量測定的結果有重要影響，可導致判定結果的錯誤。

在方法制定時，使用氧化鋁柱層析，不僅要考慮氧化鋁用量、洗脫速度、洗脫液體積，還應充分考慮到氧化鋁有可能發(fā)生變化，對芍藥苷測定結果產(chǎn)生的影響；有時一些問題如氧化鋁的吸附能力、各種變化不可能完全與制定標準時一致，這就有賴于藥品生產(chǎn)企業(yè)、檢驗部門及藥品質量研究部門等及時發(fā)現(xiàn)問題、解決問題，以避免誤判的發(fā)生，影響藥品含量測定的結果。

3.4 在質量標準使用過程中，我們要隨著各種條件的變化，針對有些原來不重要的細節(jié)要逐漸變?yōu)樾枋芸氐臈l件，例如本次實驗中采用了三種批號的氧化鋁，結果發(fā)現(xiàn)它們對芍藥苷均有吸附作用，且吸附大小不同，這些變化了的細節(jié)作為生產(chǎn)廠家應該最為熟悉。

當我們每發(fā)出一份不合格報告時，為保證不錯判，對于方法中容易存在問題的地方我們會與企業(yè)進行溝通，以避免誤判。因此，我們也希望企業(yè)能真正對自己的藥品負責，及時發(fā)現(xiàn)質量標準中逐漸成為判定結果影響因素的那些細節(jié)，并對標準提出修改，以便能更好地控制藥品的質量。