陸奕宇 蘇式兵

上海中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)復(fù)雜系統(tǒng)研究中心，上海 201203

乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌（IDC），是一種常見(jiàn)、多發(fā)、嚴(yán)重威脅女性健康的惡性腫瘤。近年來(lái)發(fā)病率有明顯的上升趨勢(shì)，腫瘤的發(fā)生、發(fā)展是多因素、多步驟的復(fù)雜過(guò)程，在其發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中伴隨多種基因和蛋白的改變。相關(guān)研究表明，ER、PR、HER-2等生物分子標(biāo)志物在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮作用，對(duì)判斷腫瘤的預(yù)后及指導(dǎo)內(nèi)分泌治療有重要的臨床意義[1]。通過(guò)對(duì)生物標(biāo)志物的研究，可以更深入地認(rèn)識(shí)乳腺癌的生物學(xué)行為。

PAR-2屬于PAR家族，為典型的七次跨膜G蛋白耦聯(lián)受體。PAR-2是胰酶受體，可被體內(nèi)多種內(nèi)源性激活劑激活[2]。PAR-2在胃腸道、胰腺、腎臟、肝臟、前列腺等器官?gòu)V泛表達(dá)[3]，同時(shí)在多種惡性癌癥中[4-5]高表達(dá)。近年來(lái)的研究提示，PAR-2與腫瘤細(xì)胞的侵襲、轉(zhuǎn)移關(guān)系密切。

P53基因是抑癌基因，分為野生型和突變型，野生型P53的半衰期很短，濃度很低，難以測(cè)出。突變型P53蛋白則半衰期延長(zhǎng)，濃度增加，可用免疫組織化學(xué)方法測(cè)出。因此，一般測(cè)出的P53是突變型，P53陽(yáng)性者預(yù)后較差。有50%的腫瘤帶有P53基因突變，P53突變是乳腺癌發(fā)生的早期信號(hào)，并貫穿于乳腺癌的發(fā)展演變過(guò)程。

原癌基因HER-2也稱為CerBb-2或Her-2/neu，是人類表皮生長(zhǎng)因子受體（EGFR）家族的第2個(gè)成員。HER-2過(guò)表達(dá)會(huì)激活癌基因，促進(jìn)腫瘤發(fā)生。HER-2通過(guò)與不同的EGFR配體作用后，表達(dá)水平及其活性發(fā)生變化，增加了腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移。目前HER-2已被公認(rèn)為是與乳腺癌發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)的原癌基因。

筆者采用組織芯片的免疫組化染色法檢測(cè)PAR-2、P53、HER-2在乳腺癌組織的表達(dá)，并分析它們與臨床資料的關(guān)系，探討其在乳腺癌發(fā)生、發(fā)展中的作用。

1 材料與方法

1.1 材料

組織芯片（Od-CT-RpBre01）購(gòu)自上海生物芯片公司。芯片具有76例乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌患者的手術(shù)組織樣本。所有乳腺癌病例均經(jīng)HE染色病理檢查確診，患者均為女性，年齡31～80歲，中位年齡55歲。所有病例術(shù)前未接受化療和放療。

PAR-2鼠抗人單克隆抗體（SAM-11），Santa Cruz公司；P53 鼠抗人多克隆抗體（E-5），Santa Cruz公司；HER-2 兔抗人單克隆抗體（2242），Cell Signaling Technology公司；免疫組化試劑盒，DAKO公司。

1.2 方法

1.2.1 免疫組化方法 采用免疫組織化學(xué)抗原熱修復(fù)技術(shù)檢測(cè)各蛋白表達(dá)。嚴(yán)格按照試劑盒操作說(shuō)明進(jìn)行，DAB顯色。用枸櫞酸高溫高壓法進(jìn)行抗原修復(fù)。

1.2.2 免疫組化結(jié)果判斷 染色結(jié)果判定參照Fromowitz等[6]的評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)，無(wú)著色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；陽(yáng)性范圍＜5%為0分，5%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，＞75%為4分；以上兩項(xiàng)結(jié)果相加，分值≥2分判定免疫組化染色為陽(yáng)性（+）。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 13.0對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料以率表示，采用χ2檢驗(yàn)或Fisher精確概率法。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 PAR-2、P53、HER-2在浸潤(rùn)性乳腺癌組織的表達(dá)

76例病例中PAR-2陽(yáng)性率為84.2%（64/76），P53陽(yáng)性率為 43.4%（33/76），HER-2陽(yáng)性率為 55.3%（42/76）。PAR-2、P53、HER-2在浸潤(rùn)性乳腺癌組織的表達(dá)見(jiàn)圖1。

2.2 PAR-2、P53、HER-2與組織病理指標(biāo)的關(guān)系

PAR-2、HER-2的表達(dá)與年齡、臨床分期無(wú)關(guān)；P53的表達(dá)與臨床分期有關(guān)（P=0.03）；PAR-2、P53的表達(dá)與組織學(xué)分級(jí)無(wú)關(guān)；HER-2的表達(dá)與組織學(xué)分級(jí)有關(guān)（P=0.034），陽(yáng)性表達(dá)率越高者，越趨于腫瘤低分化；PAR-2、P53、HER-2的表達(dá)與腫瘤直徑均無(wú)關(guān)；PAR-2的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P=0.022）。 見(jiàn)表1。

圖1 PAR-2、P53、HER-2在浸潤(rùn)性乳腺癌組織的表達(dá)（×400）

表1 PAR-2、P53、HER-2與組織病理指標(biāo)的分析結(jié)果

2.3 PAR-2與P53或HER-2聯(lián)合與組織病理學(xué)指標(biāo)的關(guān)系

PAR-2與P53同時(shí)表達(dá)為陽(yáng)性的病例數(shù)占全部病例數(shù)的39.5%（30/76），且其陽(yáng)性表達(dá)率與乳腺癌組織病理學(xué)分級(jí)顯著相關(guān)（P=0.046）；PAR-2與HER-2表達(dá)為陽(yáng)性的病例數(shù)占全部病例數(shù)的 53.9%（41/76），PAR-2（+）且 HER-2（+）病例組的陽(yáng)性表達(dá)率與組織病理學(xué)分級(jí)有關(guān)（P=0.005），陽(yáng)性表達(dá)率越高者，越趨于腫瘤低分化。PAR-2（+）且P53（+）病例組的陽(yáng)性表達(dá)率與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移雖然沒(méi)有顯著性差異，但仍有相關(guān)的趨勢(shì)。見(jiàn)表2。

表2 PAR-2與P53或HER-2聯(lián)合與組織病理學(xué)指標(biāo)的關(guān)系

2.4 PAR-2與P53或HER-2表達(dá)的關(guān)系

在64例PAR-2陽(yáng)性表達(dá)的乳腺癌患者中，P53陽(yáng)性為30例；12例PAR-2陰性表達(dá)中，P53陰性為9例。在64例PAR-2陽(yáng)性表達(dá)的乳腺癌患者中，HER-2陽(yáng)性為41例；在12例PAR-2陰性表達(dá)中，HER-2陰性為11例。PAR-2與HER-2表達(dá)有關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.001）。見(jiàn)表3。

表3 PAR-2表達(dá)與P53或HER-2的關(guān)系

3 討論

PAR-2與腫瘤細(xì)胞的侵襲、轉(zhuǎn)移關(guān)系密切，但其引起腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的具體機(jī)制尚不明確，可能與腫瘤細(xì)胞中存在大量活化的胰蛋白酶、基質(zhì)金屬蛋白酶、組織因子（tissue factor，TF）及表皮生長(zhǎng)因子受體等相互作用有關(guān)。目前對(duì)其在腫瘤中的功能研究已有相關(guān)報(bào)道，如Su等[7]的研究表明PAR-2可能通過(guò)Gαi-c-Src-JNK-paxillin信號(hào)通路激活乳腺癌細(xì)胞并實(shí)現(xiàn)一系列功能。Fujimoto等[8]研究顯示，PAR-2在胃癌中過(guò)表達(dá)，并且與腫瘤的淋巴結(jié)浸潤(rùn)相關(guān)，提示PAR-2與胃癌的進(jìn)展有關(guān)。Jahan等[5]發(fā)現(xiàn)PAR-2在子宮頸癌中高表達(dá)，且生存率降低。關(guān)于PAR2和腫瘤轉(zhuǎn)移，目前雖也有一定的研究，但認(rèn)識(shí)不多。PAR-2在乳腺癌方面的研究目前國(guó)內(nèi)尚無(wú)相關(guān)報(bào)道，國(guó)外亦僅有少量文獻(xiàn)報(bào)道。

本研究中P53陽(yáng)性率與組織學(xué)分級(jí)、腫瘤直徑差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），而與臨床分期相關(guān)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。但國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)關(guān)于P53表達(dá)與臨床分期、組織學(xué)分級(jí)、腫瘤直徑及ER、PR的關(guān)系報(bào)道并不一致[9-10]。因此，P53可作為判斷其預(yù)后的一個(gè)指標(biāo)，但目前仍認(rèn)為其不是一個(gè)獨(dú)立判斷預(yù)后的指標(biāo)，其臨床意義需進(jìn)一步研究探討。

本實(shí)驗(yàn)研究顯示，HER-2在乳腺癌組織中陽(yáng)性表達(dá)率為55.3%，其陽(yáng)性表達(dá)與組織學(xué)分級(jí)，PR表達(dá)有關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），HER-2陽(yáng)性表達(dá)率越高者，越趨于腫瘤低分化。相關(guān)研究顯示，HER-2陽(yáng)性與腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床病理分期有關(guān)，其產(chǎn)物過(guò)度表達(dá)常提示惡性程度高、預(yù)后差[11]。

本研究中PAR-2的表達(dá)與臨床分期、組織學(xué)分級(jí)、腫瘤直徑無(wú)關(guān)，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞ 0.05），與 ER、P53、HER-2的表達(dá)及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均相關(guān)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），提示PAR-2與ER、P53、HER-2在乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中可能存在著某種聯(lián)系。已有文獻(xiàn)提及PAR-2的表達(dá)與ER表達(dá)之間存在聯(lián)系，Collier等[12]的研究中觀察到，雌激素刺激后的MCF-7細(xì)胞中，隨著ER表達(dá)的激活，PAR-2的表達(dá)也隨之增加。50%～70%的乳腺癌患者有突變P53蛋白的表達(dá)，是乳腺癌重要的預(yù)后因素，目前有體外實(shí)驗(yàn)報(bào)道[13]TF刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞后，細(xì)胞內(nèi)P53的表達(dá)增加，而TF能夠與細(xì)胞因子Ⅶ結(jié)合后激活PAR-2[14]，來(lái)介導(dǎo)細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。另有研究報(bào)道，P53可以直接調(diào)控PAR家族中的PAR-1，野生型P53能夠抑制PAR-1的活化，同時(shí)突變型的P53可以激活PR-1功能。PAR-1與PAR-2同屬PAR家族，它們?cè)谀[瘤轉(zhuǎn)移中都扮演了重要的角色，同時(shí)亦有研究發(fā)現(xiàn)PAR-1和PAR-2之間也存在信號(hào)傳導(dǎo)[15-16]，共同參與腫瘤的轉(zhuǎn)移。上述研究提示PAR-2與P53可能通過(guò)TF或PAR-1等來(lái)實(shí)現(xiàn)某些腫瘤細(xì)胞功能。本研究中，PAR-2與HER-2之間的表達(dá)有關(guān)，但目前尚未有關(guān)于PAR-2與HER-2之間關(guān)系的研究報(bào)道。

綜上，通過(guò)本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)PAR-2，P53，HER-2與乳腺癌某些臨床病理指標(biāo)之間具有相關(guān)性，但與以往文獻(xiàn)報(bào)道結(jié)果仍有諸多不一致，仍需大樣本前瞻性的臨床研究來(lái)進(jìn)一步證實(shí)它們?cè)谠\斷乳腺癌以及指導(dǎo)治療方面的臨床價(jià)值。同時(shí)PAR-2與P53，HER-2表達(dá)上的相關(guān)性也揭示PAR-2在浸潤(rùn)性乳腺癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中可能協(xié)同上述蛋白執(zhí)行某些腫瘤細(xì)胞的功能。PAR-2能否作為未來(lái)乳腺癌診斷及治療的靶標(biāo)，它在乳腺癌中究竟扮演了什么樣的角色?這些問(wèn)題將在今后的研究中加以探討。

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