李行諾，翟文豐，周孟宇，沈培強，葛志偉，顏繼忠

（1.浙江工業(yè)大學 藥學院，浙江 杭州310032；2.正大青春寶藥業(yè)有限公司，浙江 杭州310023；3.浙江大學 藥學院，浙江 杭州310058）

黃柏為蕓香科植物黃皮樹PhellodendronchineseSchneid的干燥樹皮，性苦、寒，具有清熱燥濕、瀉火除蒸和解毒療瘡的功效［1］.現代藥理學表明黃柏具有較強的廣譜抗菌性，對葡萄球菌有較強的抑制作用，同時具有抗?jié)?、降壓、抗心律失常等作用?］.為進一步研究其化學成分，現利用硅膠柱色譜，反相中壓制備色譜儀，制備液相色譜等分離手段，從黃柏中分離得到6個化合物，通過波譜數據鑒定了其結構，分別為異闊果蕓香堿（Ⅰ），γ－花椒堿（Ⅱ），茵芋堿（Ⅲ），鐵屎米酮（Ⅳ），阿魏酸（Ⅴ），5－O－阿魏?；鼘幩幔á觯?

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

美國Agilent 1100制備型高效液相色譜儀（色譜柱為ZORBAX SB－C18，21.2×250mm，7μm），HP chemstations處理軟件（安捷倫科技有限公司，美國）；Waters 2695分析型高效液相色譜儀；BRUKER AVANCE－III型磁共振波譜儀（TMS為內標，瑞士 Bruker公司）；Mill－Q 超純水器（Mllipore公司）；柱色譜硅膠（100—200目）和薄層色譜硅膠均為青島海洋化工廠產品.甲醇為色譜純，購自德國Merck公司，其他溶劑均為分析純.黃柏藥材取自杭州正大青春寶藥業(yè)有限公司，由楚楚博士鑒定為PhellodendronchineseSchneid，留樣保存于浙江工業(yè)大學藥學院.

1.2 提取與分離

黃柏干燥樹皮4.0kg，經70%的乙醇溶液回流提取兩次，每次2h，合并提取液，減壓濃縮得稠浸膏.所得浸膏用去離子水溶解，過濾，分別用石油醚，乙酸乙酯，正丁醇萃取.各部分分別經硅膠柱色譜層析，再經過高效制備液相色譜純化，流速8mL／min，甲醇－水梯度洗脫.乙酸乙酯部分以石油醚－乙酸乙酯（20∶1～1∶1）洗脫，濃縮洗液，經制備高效液相色譜（甲醇－水為流動相）分離、純化得化合物化合物Ⅳ（20mg），Ⅴ（132mg）.正丁醇部分以二氯甲烷－甲醇（30∶1～1∶1）洗脫，濃縮洗脫液，經制備高效液相色譜（甲醇－水為流動相）分離、純化得化合物Ⅰ（50mg），化合物Ⅱ（20mg），化合物Ⅲ（22mg），化合物Ⅵ（45mg）.化合物Ⅰ－Ⅵ結構為

2 結構鑒定

化合物Ⅰ淡黃色固體.1H－NMR（CDCl3，500 MHz）δ：8.35（1H，br.d，J＝7.5Hz，H－5），7.53（1H，br.t，J＝7.5Hz，H－7），7.30（1H，br.t，J＝7.5Hz，H－6），7.26（1H，br.t，J＝7.5Hz，H－8），4.81（1H，t，J＝8.5Hz，H－11），3.65（3H，s，N－C H—3），3.22（2H，d，J＝8.5Hz，H－10），1.35（3H，s，H－14），1.26（3H，s，H－13）；13C－NMR （CDCl3，125MHz）δ：173.6（C－4），161.6（C－2），138.6（C－1），131.0（C－7），126.4（C－9），126.2（C－6），123.2（C－5），114.1（C－8），99.6（C－3），92.0（C－11），71.5（C－12），31.3（N－C—H3），27.6（C－10），25.6（C－13），24.5（C－14）.其波譜數據與文獻報道的異闊果蕓香堿［3－4］一致，故鑒定該化合物為異闊果蕓香堿.

化合物Ⅱ無色晶體.1H－NMR（CD3OD，500 MHz）δ：7.66（1H，d，J＝2.5Hz，H－2），7.58（1H，dd，J＝1.0，8.5Hz，H－5），7.20（1H，dd，J＝7.5，8.5Hz，H－6），7.11（1H，d，J＝2.5Hz，H－3），7.00（1H，br.d，J＝7.5Hz，H－7），4.31（3H，s，4－OC H—3），3.95（3H，s，8－OC H—3）；13C－NMR（CD3OD，125 MHz）δ：164.3（C－1a），158.4（C－4），155.2（C－8），144.9（C－2），137.9（C－8a），124.5（C－6），120.5（C－4a），115.1（C－5），109.1（C－7），106.1（C－3），104.8（C－3a），59.8（C4－O C—H3），56.2（C8－O C—H3）.其波譜數據與文獻報道的γ－花椒堿［5－6］基本一致，故鑒定該化合物為γ－花椒堿.

化合物Ⅲ淺黃色晶體.1H－NMR（CD3OD，500MHz）δ：8.02（1H，d，J＝9.0Hz，H－5），7.74（1H，d，J＝2.5Hz，H－2），7.35（1H，d，J＝9.0Hz，H－6），7.30（1H，d，J＝2.5Hz，H－3），4.46（3H，s，4－O C—H3），4.00（3H，s，8－O C—H3），3.92（3H，s，7－O C—H3）；13C－NMR（CD3OD，125MHz）δ：166.1（C－1a），159.2（C－4），153.8（C－7），144.4（C－2），143.2（C－2），142.0（C－8），141.6（C－8a），119.6（C－5），115.9（C－4a），113.5（C－6），106.3（C－3），105.7（C－4a），103.4（C－3a），60.3（C8－O C—H3），58.7（C4－O C—H3），55.8（C7－O C—H3）.其波譜數據與文獻報道的茵芋堿［5－6］一致，故鑒定該化合物為茵芋堿.

化合物Ⅳ淺黃色晶體.1H－NMR（DMSO－d6，500MHz）δ：8.83（1H，d，J＝5.0Hz，H－2），8.51（1H，d，J＝8.0Hz，H－8），8.38（1H，br.d，J＝7.5Hz，H－11），8.30（1H，d，J＝5.0Hz，H－1），8.14（1H，d，J＝9.5Hz，H－5），7.77（1H，br.dd，J＝7.5，8.0Hz，H－9），7.60（1H，br.t，J＝7.5Hz，H－10），7.00（1H，d，J＝9.5Hz，H－4）；13C－NMR（DMSO－d6，125MHz）δ：159.5（C－6），146.4（C－2），140.4（C－4），139.2（C－7a），136.2（C－3a），131.9（C－11c），131.4（C－9），129.9（C－11b），129.1（C－5），126.2（C－10），124.6（C－11a），124.1（C－11），117.8（C－8），116.7（C－1）其波譜數據與文獻報道的鐵屎米酮［7］一致，故鑒定該化合物為鐵屎米酮.

化合物Ⅴ白色粉末狀晶體.1H－NMR（CD3OD，500MHz）δ：7.58（1H，d，J＝15.5Hz，H－7），7.16（1H，d，J＝2.0Hz，H－2），7.06（1H，dd，J＝2.0，8.0Hz，H－6），6.81（1H，d，J＝8.0Hz，H－5），6.30（1H，d，J＝15.5Hz，H－8），3.88（3H，s，3－O C—H3）；13C－NMR（CD3OD，125MHz）δ：170.9（C－9），150.4（C－3），149.3（C－4），146.9（C－7），127.8（C－1），123.9（C－6），116.4（C－5），115.9（C－8），111.7（C－2），56.5（－O C—H3）），其波譜數據與文獻報道的阿魏酸［8］一致，故鑒定該化合物為阿魏酸.

化合物Ⅵ黃色晶體.1H－NMR （CD3OD，500MHz）δ：7.59（1H，d，J＝15.9Hz，H－7），7.12（1H，d，J＝1.6Hz，H－2），7.03（1H，dd，J＝1.6，8.2Hz，H－6），6.82（1H，d，J＝8.2Hz，H－5），6.36（1H，d，J＝15.9Hz，H－8），5.38（1H，m，H－10），4.16（1H，m，H－14），3.84（3H，s，3－O C—H3），3.73（1H，dd，J＝3.0，9.8Hz，H－15），1.95～2.05（4H，m，H－11，13）；13C－NMR（CD3OD，125MHz）δ：180.3（C12－C—OOH），168.8（C－9），150.3（C－3），149.1（C－4），146.5（C－7），127.5（C－1），123.9（C－6），116.5（C－5），115.7（C－8），111.7（C－2），77.5（C－12），74.7（C－15），72.7（C－14），72.5（C－10），56.6（C3－O C—H3），40.3（C－11），38.8（C－13）.其波譜數據與文獻報道的5－O－阿魏?；鼘幩幔?］一致，故鑒定該化合物為5－O－阿魏?；鼘幩?

3 結 論

研究了黃柏乙醇提取物中的化學成分，采用硅膠柱色譜，結合反相中壓色譜和制備液相從提取物中分離得到了6個化合物，通過NMR光譜數據鑒定其結構，這6個化合物分別為異闊果蕓香堿，γ－花椒堿，茵芋堿，鐵屎米酮，阿魏酸，5－O－阿魏?；鼘幩?，其中異闊果蕓香堿是首次從該屬植物中分離得到，為完善黃柏化學組分信息庫和藥效研究提供物質基礎.

［1］國家藥典委員會.中國藥典：一部［M］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010.

［2］王浴生，鄧文龍，薛春生.中藥藥理與應用［M］.北京：北京人民衛(wèi)生出版社，2002.

［3］BROW N，GRUNDON M，HARRISON D，et al.The13CNMR spectra of hemiterpenoid quinoline alkaloids and related prenylquinolines［J］.Tetrahedron，1980，36（25）：3579－3584.

［4］馮熙，王鳴，董云發(fā)，等.臭常山喹啉生物堿成分［J］.中草藥，2004，35（12）：1336－1338.

［5］祝丹，陳玉，鄭桐，等.野花椒化學成分研究［J］.華中師范大學學報，2009，43 （3）：424－427.

［6］韋瑀龍，張翠仙，林朝展，等.蜆殼花椒中生物堿成分的研究［J］.中藥新藥與臨床藥理，2009，20（5）：471－474.

［7］YONG D M，HAK C K，MIN C Y，et al.Isolation of limonoids and alkaloids fromPhellodendronamurenseand their multidrug resistance（MDR）reversal activity［J］.Arch Pharm Res，2007，30（1）：58－63.

［8］王希，張焜，陳優(yōu)生.仙鶴草降糖活性成分的提取分離［J］.中國實驗方劑學雜志，2010，16（6）：85－87.

［9］SMARRITO C，MUNARI C，ROBERT F，et al.A novel efficient and versatile route to the synthesis of 5－O－feruloylquinic acids［J］.Org Biomol Chem，2008，6 （6）：986－987.