劉 峰，崔紹華，付國妮

（1.東華工程科技股份有限公司，安徽 合肥 230024；2.安徽農(nóng)業(yè)大學(xué) 理學(xué)院，安徽 合肥 230036）

不同產(chǎn)地西紅柿中總黃酮的提取條件研究及含量測(cè)量

劉 峰1，崔紹華2，付國妮2

（1.東華工程科技股份有限公司，安徽 合肥 230024；2.安徽農(nóng)業(yè)大學(xué) 理學(xué)院，安徽 合肥 230036）

本文以西紅柿作為研究對(duì)象，以蘆丁作為標(biāo)準(zhǔn)品，研究了提取劑乙醇濃度、提取時(shí)間、提取溫度等因素對(duì)西紅柿中總黃酮提取量的影響.在最佳條件下，采用分光光度法對(duì)兩種不同產(chǎn)地西紅柿中的總黃酮含量進(jìn)行了測(cè)定，該法設(shè)備簡單、操作方便、準(zhǔn)確性高.

西紅柿；總黃酮；提取條件

黃酮類化合物是存在于許多綠色植物中的一類重要的天然有機(jī)化合物，廣泛應(yīng)用于食品添加劑、抗氧化劑、天然色素等，作為新藥開發(fā)的資源也特別值得重視.西紅柿中含有大量的黃酮類化合物[1].因此，西紅柿中黃酮類化合物的提取及含量測(cè)定具有一定的現(xiàn)實(shí)意義.

目前，國內(nèi)外應(yīng)用最廣泛的黃酮類化合物的提取方法為溶劑提取法.在測(cè)定植物中總黃酮的眾多方法中，可見分光光度法具有簡便、快速、準(zhǔn)確的特點(diǎn)，已普遍應(yīng)用于植物中總黃酮含量的測(cè)定[2,3].測(cè)定植物中總黃酮的可見分光光度法中常采用硝酸鋁-亞硝酸鈉顯色法，該法價(jià)廉、操作簡單、快速準(zhǔn)確，可用于總黃酮的定性及定量分析[4,5].因此，本實(shí)驗(yàn)以溶劑提取法提取黃酮類化合物，采用硝酸鋁-亞硝酸鈉體系顯色，對(duì)西紅柿中總黃酮的提取條件進(jìn)行研究，以可見分光光度法測(cè)定不同產(chǎn)地西紅柿中的總黃酮含量.

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

西紅柿，購于家樂福超市.

蘆丁、氫氧化鈉、硝酸鋁、亞硝酸鈉、無水乙醇、石油醚均為分析純.

1.2 分析方法

1.2.1 硝酸鋁-亞硝酸鈉顯色法

準(zhǔn)確移取一定體積的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液或待測(cè)液至10mL容量瓶中，加入0.3mL5%的NaNO2，靜置五分鐘后加入0.3mL10%的Al(NO3)3，再靜置五分鐘加入3mL5%的NaOH，定容，搖勻.

1.2.2 最大吸收波長的選擇

圖1 標(biāo)準(zhǔn)曲線

0.06000mg·mL-1的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液以硝酸鋁-亞硝酸鈉體系顯色，在440~560nm波長范圍內(nèi)每隔10nm測(cè)定其吸光度值，作光吸收曲線.

1.2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

選取六種濃度分別為 0.0000、0.01200、0.02400、0.03600、0.04800、0.06000mg·mL-1的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液，以硝酸鋁-亞硝酸鈉體系顯色，在最大吸收波長處測(cè)其吸光度值，作標(biāo)準(zhǔn)曲線.

1.3 樣品處理

將新鮮的西紅柿洗凈、擦干、切碎，于70℃進(jìn)行充分干燥，干燥后取出粉碎，過60目篩，將樣品放入250mL的帶塞錐形瓶中備用.用索氏提取法進(jìn)行脫脂，然后通過回流提取總黃酮.

2 結(jié)果與分析

2.1 最大吸收波長的選擇

以0.00mL蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液為空白對(duì)照，按照1.2.2方法進(jìn)行分析，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，最大吸收波長為510nm.

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

在510nm波長處，按照1.2.3方法進(jìn)行分析，標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖1所示.線性回歸方程為y=12.419x+0.0087（y為吸光度、x表示蘆丁的濃度（mg·mL-1），相關(guān)系數(shù)r2=0.9994，說明在0.0000-0.06000mg·mL-1濃度范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系.

2.3 西紅柿中總黃酮的提取條件研究

采用單變量法研究了提取劑乙醇濃度、提取時(shí)間和提取溫度對(duì)西紅柿中總黃酮提取量的影響.

2.3.1 提取劑乙醇濃度的選擇

分別選用30%、50%、60%、70%、80%的乙醇溶液為提取劑，精確稱取西紅柿粉末1.0000g，按1：30的料液比，在70℃條件下加熱回流1h提取黃酮類化合物，冷卻后過濾，將濾液定容于100mL容量瓶中，然后吸取2.00mL待測(cè)液于10mL的容量瓶中，加入1mL無水乙醇，然后以硝酸鋁-亞硝酸鈉體系顯色，在510nm波長處測(cè)其吸光度值，結(jié)果如圖2所示.

圖2 提取劑乙醇濃度的影響

由圖2可以看到，當(dāng)乙醇濃度在30%時(shí)其吸光度值較小，說明此時(shí)提取并不完全，隨著乙醇濃度的增大，吸光度值隨之增大，當(dāng)乙醇濃度為70%，吸光度值最大.當(dāng)乙醇濃度繼續(xù)增大時(shí)，吸光度值減小，可能是由于乙醇濃度過高時(shí)，脂溶性物質(zhì)的溶出量增加，從而導(dǎo)致黃酮類化合物浸出率下降.因此，選擇70%乙醇為最佳提取劑.

2.3.2 提取時(shí)間的選擇

固定70%乙醇為提取劑、70℃為提取溫度，分別選取 40、60、80、100、120min 五個(gè)提取時(shí)間，按照2.3.1中方法進(jìn)行分析

結(jié)果見圖3.

圖3 提取時(shí)間的影響

由圖3可以看到，當(dāng)提取時(shí)間為40min時(shí)其吸光度值較小，說明此時(shí)提取并不完全，隨著提取時(shí)間的加長，吸光度值隨著增大，當(dāng)提取時(shí)間增大到60min時(shí)，吸光度值最大.當(dāng)提取時(shí)間繼續(xù)增加時(shí)，吸光度值基本趨于穩(wěn)定.因此，選擇60min為最佳提取時(shí)間.

2.3.3 提取溫度的選擇

固定70%乙醇為提取劑、60min為提取時(shí)間，分別選取 30、50、60、70、80℃五個(gè)提取溫度，按照2.3.1中方法進(jìn)行分析

結(jié)果見圖4.

圖4 提取溫度的影響

由圖4可以看出，當(dāng)提取溫度在30℃時(shí)其吸光度值較小，說明此時(shí)提取并不完全，隨著溫度的升高，吸光度值隨之增大.當(dāng)提取溫度增大到70℃，吸光度值最大.因此，選擇70℃為最佳提取溫度.

綜上所述，最佳提取條件為：提取劑為70%乙醇、提取時(shí)間為60min、提取溫度為70℃.

2.4 不同產(chǎn)地西紅柿中總黃酮含量的測(cè)定

在最佳實(shí)驗(yàn)條件下對(duì)家樂福超市購買的兩種不同產(chǎn)地西紅柿中的總黃酮類化合物進(jìn)行定量分析，本地西紅柿中總黃酮含量為3.95mg·g-1，而ST西紅柿則為3.75mg·g-1.

3 結(jié)論

本文以單變量法對(duì)西紅柿中總黃酮的提取條件-提取劑乙醇濃度、提取時(shí)間、提取溫度等影響因素進(jìn)行了研究.實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，最佳提取條件為：提取劑乙醇濃度為70%、提取時(shí)間為60min、提取溫度為70℃.在最佳條件下對(duì)兩種不同產(chǎn)地西紅柿中的總黃酮含量進(jìn)行了測(cè)定，該法快速、簡便、準(zhǔn)確.

〔1〕高金燕,宋永剛,毛江華.果蔬中黃酮類物質(zhì)的測(cè)定.中國食品添加劑,2007(2):211-213.

〔2〕何書美,劉敬蘭.茶葉中總黃酮含量測(cè)定方法的研究[J].分析化學(xué),2007,35(9)：1365-1368.

〔3〕Liu J C,Zhou R Q.Improved meansuration for general flavone of bamboo leaves extract[J].Food Sci.Tech.,2005,7:76-79.

〔4〕Lee K G,Shibamoto T,Takeoka,et a1.Inhibitory efects of plant-derived flavonoids and phenolic acids on malonaldehyde formationfrom efiyl arachidonate [J].J Agric.Food Chem.,2003,51(24):7203-7207.

〔5〕侯麗麗,張守勤,梁清.槐花黃酮提取方法的比較[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2011,39(7):3971-3972.

O652.7

A

1673-260X（2012）07-0001-02

2012年安徽省高等學(xué)校省級(jí)優(yōu)秀青年人才基金項(xiàng)目（2012SQRL066）；2011年安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)校青年基金重點(diǎn)項(xiàng)目；安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)穩(wěn)定和引進(jìn)人才科研資助項(xiàng)目