張先廷，周俊麗，王迎進(jìn)

（1.忻州師范學(xué)院 ?？撇?，山西 忻州 034000；2.忻州師范學(xué)院 生化分析技術(shù)研究所，山西 忻州 034000）

引言：

地皮菜又稱地木耳、地軟、地耳、地衣等，為念珠藻屬植物，是藍(lán)藻科念珠藻屬的片狀藻類和真菌的復(fù)合體[1]，主要分布在石灰石區(qū)和碦斯特巖溶地帶?，F(xiàn)代研究表明地皮菜中含有豐富的蛋白質(zhì)、多糖、維生素、鈣、磷、鐵等元素[2]。據(jù)中國藥典記載，地皮菜對補充維生素、蛋白質(zhì)、清熱解毒、涼血明目、夜盲、皮疹赤熱等具有明顯滋補食療效果。目前，有關(guān)地皮菜多糖的報道主要研究了地皮菜多糖水熱浸提工藝、純化及其抑菌作用[3-4]。本文對超聲提取地皮菜多糖對3種自由基的清除作用及其還原能力做了一個較為全面系統(tǒng)的研究，旨在為廣泛地利用地皮菜提供一定的實驗依據(jù)。

1 材料

1.1 試劑

地皮菜（2011年5月購于山西忻州農(nóng)貿(mào)市場）；葡萄糖、濃硫酸、苯酚、石油醚、三氯甲烷、正丁醇、無水乙醇（均為分析純），實驗用水為二次蒸餾水。

1.2 儀器

752型紫外光柵分光光度計（上海精密科學(xué)儀器有限公司）；RE-52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海亞榮生化儀器廠）；JYD-650L超聲細(xì)胞粉碎機（上海之信儀器有限公司）；SHZ-D（III）型循環(huán)水式真空泵（河南豫華儀器有限公司）；HH-S型恒溫水浴鍋（陜西太康生物科技有限公司）。

2 實驗方法

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精密稱取在105℃干燥至恒重的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品10 mg，加水溶解，定容至100 mL容量瓶中，得0.1 mg/mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液。分別移取葡萄糖液0.10、0.20、0.30、0.40、0.50、0.60、0.70、0.80、0.90 mL 于10 mL比色管中,加水至2 mL，再加5%的苯酚溶液1 mL和濃硫酸5 mL，沸水浴15 min。冷卻后在490 nm下，以試劑空白為參比，測定吸光度A。以樣品濃度c對吸光度A作圖，得回歸方程：Y=52.767x-0.0095，R2=0.9994。

2.2 地皮菜多糖的提取及含量測定

將地皮菜洗凈、烘干、粉碎、過篩（60目）后得地皮菜粉。稱取地皮菜粉50 g于圓底燒瓶中，用石油醚500 mL（沸程60-90℃）回流脫脂2 h，抽濾，揮干。用95%乙醇500 mL回流2 h（以除去地皮菜中的小分子），干燥得地皮菜藥渣。準(zhǔn)確稱取脫脂后地皮菜粉20 g于燒杯中，加蒸餾水250 mL，在超聲功率為50%，提取溫度為80℃下，超聲提取30 min，過濾。濾渣重提兩次，合并濾液，濃縮至約100 mL，加入4倍體積的無水乙醇，4℃靜置24 h，離心，洗滌，蒸餾水復(fù)溶得地皮菜粗多糖試液。按標(biāo)準(zhǔn)曲線實驗方法測得地皮菜中粗多糖含量分別為3.76 mg/mL。

2.3 地皮菜多糖對自由基清除作用的測定

2.3.1 羥自由基清除作用按文獻(xiàn)[5]方法測定

2.3.2 超氧陰離子自由基清除作用按文獻(xiàn)[5]方法測定

2.3.3 DPPH·自由基清除作用按文獻(xiàn)[6]方法測定

2.3.4 還原能力按文獻(xiàn)[7]方法測定

3 結(jié)果與分析

3.1 地皮菜多糖對羥自由基的清除作用

羥自由基清除率是反映藥物抗氧化作用的重要指標(biāo)。地皮菜粗多糖對·OH的清除效果見圖1。由圖1可知，隨著濃度的增加，對·OH的清除作用逐漸增強。濃度在0-0.3 mg/mL范圍內(nèi)，多糖對·OH的清除作用急劇增加；當(dāng)濃度高于0.3 mg/mL時，地皮菜多糖對·OH的清除作用隨濃度的增加緩慢提高，最高達(dá)到54.4%。

圖1 地皮菜多糖對·OH的清除作用

3.2 地皮菜多糖對超氧陰離子自由基的清除作用

地皮菜多糖對·O2-清除效果見圖2。由圖2可知，隨著多糖濃度增加，對·O2-清除率逐漸升高。在反應(yīng)開始4 min，濃度為0.6 mg/mL時，地皮菜多糖和BHT對·O2-的清除率分別為67.60%和79.85%，說明地皮菜多糖具有較強清除·O2-能力。在濃度范圍為0-0.4 mg/mL時，地皮菜多糖的清除能力與BHT相當(dāng)。

圖2 地皮菜多糖對·O2-的清除作用

3.3 地皮菜多糖對DPPH·自由基的清除作用

地皮菜多糖對DPPH·的清除作用如圖3。由圖3可知，地皮菜多糖具有較強的DPPH·清除能力，當(dāng)濃度低于0.6 mg/mL時，清除能力隨濃度的增加急劇增大，濃度高于0.6 mg/mL時，其清除能力增加緩慢。

圖3 地皮菜多糖對DPPH·自由基的清除作用

圖4 地皮菜多糖的還原能力

3.4 地皮菜多糖還原能力的測定

地皮菜多糖的還原能力如圖4所示。由圖4可知，地皮菜多糖具有一定的還原能力，可作為電子供應(yīng)者，與自由基反應(yīng)，使之轉(zhuǎn)化為較穩(wěn)定的物質(zhì)，中斷自由基鏈?zhǔn)椒磻?yīng)。隨著濃度的增加，地皮菜多糖的還原能力不斷增強，但遠(yuǎn)低于對照物BHT。

3 結(jié)論

本文采用·OH、O2-·、DPPH·、和還原能力 4種方法研究了地皮菜多糖的體外抗氧化性，結(jié)果表明：地皮菜多糖具有明顯清除·OH、O2-·、DPPH·作用及還原能力。因而，地皮菜多糖是一種非常有效的天然抗氧化劑，具有廣泛的開發(fā)前景。

［1］黃曉波，索有瑞.地皮菜營養(yǎng)成分分析與評價［J］.青?？萍?，1999，6（3）：7-8.

［2］張?zhí)苽?，柳青海，李天?地木耳多糖的提取與純化研究［J］.中國野生植物資源，2011，30（3）：34-37.

［3］張?zhí)苽?，李天?地木耳多糖的提取工藝研究［J］.光譜實驗室，2011，28（1）：143-148.

［4］牛生洋，郝峰鴿，趙瑞香，等.地皮菜中多糖的抑菌特性研究［J］.廣東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011，（9）：93-94.

［5］蔡仲軍，陳仕江，伊定華，等.不同產(chǎn)地冬蟲夏草清除羥基自由基作用的研究［J］.中草藥，2004，35（1）：57-59.

［6］Y Lu，L Foo.Antioxidant and radical scavenging activities of polyphenols from apple pomace［J］.Food Chemistry，2000，68（1）：81-85.

［7］郝旭梅，鮑建才，楊智慧，等.無梗五加葉體外抗氧化活性研究［J］.包裝與食品機械，2011，29（4）：1-5.