宋慧萍 曾祥銓

[摘要] 目的 研究慢性乙型肝炎患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群變化及其臨床意義。 方法 對(duì)200例慢性乙型肝炎患者和80例健康者，采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)T淋巴細(xì)胞亞群的改變。 結(jié)果 HBeAg陰性慢性乙肝患者CD4+、CD8+、CD4+/CD8+顯著高于HBeAg陽(yáng)性患者，分別為（36.70±3.58）、（32.16±4.51）、（1.72±0.37）和（31.21±4.25）、（28.72±3.23）、（1.54±0.45）（P＜0.05）。慢性乙型肝炎患者輕度組、中度組、重度組CD4+ T分別為（40.21±5.26）、（36.25±4.53）、（27.51±4.36），組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），CD8+ T分別為（31.25±4.55）、（27.19±3.38）、（15.27±2.63），CD4+/CD8+分別為（1.63±0.42）、（1.29±0.32）、（0.75±0.23），組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。 結(jié)論 慢性乙型肝炎患者機(jī)體T淋巴細(xì)胞功能有不同程度降低，HBeAg陰性的慢性乙肝患者具有相對(duì)較強(qiáng)的細(xì)胞免疫狀態(tài)，隨病情程度加重，細(xì)胞免疫功能狀態(tài)亦逐級(jí)下降。

[關(guān)鍵詞] 慢性乙型肝炎；細(xì)胞免疫；T淋巴細(xì)胞亞群

[中圖分類號(hào)] R512.6+2???[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A???[文章編號(hào)] 2095-0616（2012）15-16-03

Anaysis of the cellular immune status in chronic hepatitis B patients

SONG?Huiping??ZENG?Xiangquan

Department of Infectious Diseases, Sanming First Hospital Affiliated Fujian Medical University,Sanming 365000,China

[Abstract] Objective To study the possible cause of the difference in cellular immue status in patiens chronic hepatitis B. Methods 200 patients with hepatitis B hospitalized from 2010 to 2011 and 80 cases of healthy subjects were investigated and peripheral T lymphocybe subsets were examined by flow cytometry. Results The quantity of CD4+T、CD8+T、CD4+/CD8+ in HbeAg-negative group was higher than that in HBeAg-positive group,their values were (36.70±3.58)、(32.16±4.51)、(1.72±0.37) and (31.21±4.25)、(28.72±3.23)、(1.54±0.45)(P＜0.05)，the counts of CD4+、CD8+ and the ratio of CD4+/CD8+ were reduced by in patients with chronic hepatitis B in light group,meidium group and serious group.There was significant difference between the three groups. Conclusion The celllular immune was lower than that in the healthy subjects,cellular immune status was stronger than that in patients with HBeAg-positive,with the worsening of illness,cellular immune status was lower and lower.

[Key words] Chronic hepatitis B;Cellular immunity;T lymphocybe subsets

慢性乙型肝炎（HBV）感染的自然病程分為免疫耐受期、免疫清除期、非活動(dòng)或低復(fù)制期三個(gè)階段，在免疫清除階段出現(xiàn)慢性乙型肝炎臨床表現(xiàn)，如乏力、納差、嘔吐、黃疸等及ALT升高、HBV-DNA滴度下降、肝組織的壞死炎癥。慢性乙型肝炎患者的細(xì)胞免疫反應(yīng)在清除病毒的同時(shí)，亦可導(dǎo)致肝細(xì)胞損傷，而患者機(jī)體免疫反應(yīng)的不同導(dǎo)致不同的臨床表現(xiàn)。筆者應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)慢性乙型肝炎患者T淋巴細(xì)胞亞群水平，研究其臨床意義。

1?資料與方法

1.1?一般資料

患者來(lái)源于2010年4月～2011年5月福建醫(yī)科大學(xué)附屬三明第一醫(yī)院感染科住院的200例慢性乙肝患者，其中慢性輕度組60例，中度組80例，重度組60例；男140例，女60例；年齡16～72歲，平均（42.5±4.3）歲。正常對(duì)照組80例為同一醫(yī)院健康體檢者，肝功能正常，甲、乙、丙、戊病毒性肝炎血清標(biāo)志物為陰性。

1.2?診斷標(biāo)準(zhǔn)

慢性乙型肝炎的診斷符合2000年中華醫(yī)學(xué)會(huì)傳染病與寄生蟲病學(xué)分會(huì)、肝病學(xué)分會(huì)聯(lián)合修訂的《病毒性肝炎防治方案》標(biāo)準(zhǔn)，HBeAg陰性、陽(yáng)性慢性乙型肝炎的診斷及慢性乙型肝炎輕度、中度、重度診斷根據(jù)2005年我國(guó)《慢性乙型肝炎防治指南》標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行。

HBeAg陰性慢性乙型肝炎：即患者血清HBsAg和HBV DNA陽(yáng)性，HBeAg持續(xù)陰性，抗-HBe陽(yáng)性或陰性，血清丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶ALT持續(xù)或反復(fù)異常或肝組織學(xué)檢查有肝炎病變。輕度：病情較輕，可反復(fù)出現(xiàn)乏力、頭暈、食欲減退、厭油、尿黃、肝區(qū)不適、睡眠欠佳、肝稍大有輕觸痛，可有輕度脾大。部分癥狀、體征缺如。肝功能指標(biāo)僅1或2項(xiàng)輕度異常。中度：癥狀、體征、實(shí)驗(yàn)室檢查介于輕度和重度之間。重度：有明顯或持續(xù)的肝炎癥狀，如乏力納差、腹脹、尿黃、便溏等，伴有肝病面容、肝掌、蜘蛛痣、脾大、ALT和（或）AST反復(fù)或持續(xù)升高，白蛋白降低、丙種球蛋白明顯升高。

1.3?研究方法

所有檢測(cè)對(duì)象均在入院次日清晨空腹肘靜脈采血3 mL，其中1 mL EDTA.K2抗凝作為T淋巴細(xì)胞亞群測(cè)定。使用美國(guó)Coulter公司制造BECKmancoulter EP2cs XL/FC500/Altra的流式細(xì)胞分析儀，BECKmancoulter公司生產(chǎn)的原裝試劑對(duì)所取標(biāo)本作T淋巴細(xì)胞亞群的檢測(cè),同一標(biāo)本重復(fù)操作2次，記錄結(jié)果后取平均值。

1.4?統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

數(shù)據(jù)使用PEMS 3.1統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以（）表示，各組間變量比較采用單因素方差分析，多個(gè)均數(shù)間兩兩比較采用q檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2?結(jié)果

2.1?HBeAg陰、陽(yáng)性兩組慢性乙肝患者的T細(xì)胞亞群及CD4計(jì)數(shù)分類比較

HBeAg陰、陽(yáng)性組的總T、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、CD4絕對(duì)計(jì)數(shù)、CD8絕對(duì)計(jì)數(shù)與正常對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。組間比較，HBeAg陰性組較HBeAg陽(yáng)性組具有更高的CD4+、CD8+、CD4+/CD8+比例和CD4+、CD8+計(jì)數(shù)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

2.2?慢性乙型肝炎患者輕度、中度、重度T細(xì)胞亞群及CD4計(jì)數(shù)分類比較

慢性乙型肝炎患者輕度組、中度組、重度組CD4+、CD8+、CD4+/CD8+比例和CD4+、CD8+計(jì)數(shù)均低于正常對(duì)照組（P＜0.05），組間比較，輕度組、中度組、重度組CD4+、CD8+、CD4+/CD8+比例和CD4+、CD8+計(jì)數(shù)逐級(jí)下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表2。

3?討論

人體成熟T細(xì)胞按表型不同可分為CD3+ CD4+和CD3+ CD8+ T細(xì)胞, 這兩類細(xì)胞又簡(jiǎn)稱CD4+ T細(xì)胞和CD8+ T細(xì)胞；按功能不同可分為輔助性T細(xì)胞（Th）、細(xì)胞毒T細(xì)胞（Tc）、介導(dǎo)遲發(fā)型超敏反應(yīng)T細(xì)胞（TDTH）及抑制性T淋巴細(xì)胞（Ts）。其中CD4+ T細(xì)胞主要是Th細(xì)胞，而CD8+ T細(xì)胞主要是Tc細(xì)胞，因此CD4+/CD8+的比值常被臨床上作為評(píng)估機(jī)體免疫狀態(tài)的指標(biāo)[1]。

HBV感染者的細(xì)胞免疫狀態(tài)在其病情發(fā)展中發(fā)揮著重要作用，不同的免疫狀態(tài)造成不同的臨床表現(xiàn)及病理類型。當(dāng)機(jī)體細(xì)胞免疫功能正常時(shí)，可徹底清除病毒；多表現(xiàn)為急性肝炎，當(dāng)機(jī)體細(xì)胞免疫功能低下時(shí)，病毒不能完全清除，導(dǎo)致慢性肝炎；當(dāng)機(jī)體細(xì)胞免疫處于超敏狀態(tài)時(shí)，導(dǎo)致大量肝細(xì)胞壞死，發(fā)生重型肝炎。T細(xì)胞分類與機(jī)體的細(xì)胞免疫狀態(tài)有密切聯(lián)系，研究表明[2-3]，如果CD4+ T細(xì)胞的分化以Th2亞群為主，將促進(jìn)體液免疫反應(yīng)，并抑制細(xì)胞免疫反應(yīng)，減弱CD8+ T細(xì)胞的活性，抗病毒反應(yīng)被弱化，這是造成乙肝病毒感染慢性化的主要原因。進(jìn)一步的研究表明[4-5]，在慢性乙型肝炎患者中，機(jī)體的免疫狀態(tài)特別是細(xì)胞免疫水平，和HBV復(fù)制活躍程度密切相關(guān)。

筆者研究發(fā)現(xiàn)，HBeAg陰性患者、HBeAg陽(yáng)性患者與健康對(duì)照組比較均有不同程度的細(xì)胞免疫功能下降，而前兩者在CD4+細(xì)胞比例、絕對(duì)數(shù)及CD4+/CD8+比例上比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表現(xiàn)為HBeAg陰性患者具有更高的CD4+T細(xì)胞活性，且HBeAg陰性患者比HBeAg陽(yáng)性患者具有更高的CD4+/CD8+ T淋巴細(xì)胞活性。因此，臨床上表現(xiàn)為HBeAg陰性患者病毒清除能力較強(qiáng)、病毒復(fù)制水平比HBeAg陽(yáng)性患者明顯減弱。有研究發(fā)現(xiàn)[6-7]，在慢性乙型肝炎患者中，HBeAg具有特殊的免疫耐受性，它的存在是宿主對(duì)乙肝病毒形成免疫耐受的重要因素。HBeAg能誘導(dǎo)相關(guān)免疫細(xì)胞凋亡下調(diào)Th1細(xì)胞活性，同時(shí)激活Th2細(xì)胞反應(yīng)，導(dǎo)致機(jī)體的細(xì)胞免疫功能下降，從而削弱宿主對(duì)HBV的抗病毒應(yīng)答，影響HBV復(fù)制水平。因此筆者推測(cè)，HBeAg陰性患者可能由于缺乏免疫耐受因子HBeAg，從而誘導(dǎo)了相對(duì)較高的細(xì)胞免疫狀態(tài)，使得HBV DNA復(fù)制活動(dòng)受到抑制。

CD4+細(xì)胞的數(shù)量和功能下降，直接導(dǎo)致細(xì)胞免疫功能低下。CD8+細(xì)胞毒性T細(xì)胞對(duì)清除病毒感染有重要作用，其產(chǎn)生依賴CD4+淋巴細(xì)胞的存在，而且CD4+細(xì)胞中的Th1通過(guò)直接對(duì)肝細(xì)胞的溶解或通過(guò)細(xì)胞因子的產(chǎn)生而間接使病毒清除，同時(shí)使肝臟損傷加重。本組研究結(jié)果表明，慢性乙型肝炎患者外周血總CD3+、CD4+、CD8+細(xì)胞百分比、絕對(duì)計(jì)數(shù)和CD4+/CD8+比值均低于正常對(duì)照組，并且隨病情程度加重，以上指標(biāo)亦逐漸降低，提示慢性乙型肝炎患者均存在不同程度的細(xì)胞免疫功能低下，且慢性乙型肝炎患者輕度、中度、重度隨著病情程度逐漸加重，細(xì)胞免疫功能逐級(jí)下降，其中以慢性乙型肝炎（重度）下降最為顯著。有研究表明，慢性重型肝炎發(fā)病前均存在不同程度的免疫抑制，肝功能衰竭時(shí)，患者外周血T淋巴細(xì)胞發(fā)生T

細(xì)胞活化凋亡的數(shù)量明顯低于慢性乙型肝炎輕中度患者[8]，且CD8+細(xì)胞毒細(xì)胞過(guò)度活化，導(dǎo)致嚴(yán)重肝組織破壞。

總之，通過(guò)本研究表明T淋巴細(xì)胞亞群可反映慢性乙型患者免疫狀態(tài)，對(duì)指導(dǎo)免疫調(diào)節(jié)劑的使用有一定的參考價(jià)值。目前臨床上所使用的抗病毒藥物大多只能抑制病毒復(fù)制，清除病毒必須依賴機(jī)體正常免疫功能，因此消除慢性HBV感染后免疫耐受狀態(tài)，重建有效的T細(xì)胞免疫，是治療慢性乙型肝炎的關(guān)鍵。在對(duì)患者進(jìn)行抗病毒治療的同時(shí)，適時(shí)輔以積極有效的免疫調(diào)節(jié)治療,可能會(huì)提高抗病毒治療療效，并且減少停藥后的復(fù)發(fā)。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 邢同京，章廉，侯金林，等.慢性乙肝患者Th1/Th2應(yīng)答與乙肝病毒感染單個(gè)核細(xì)胞的關(guān)[J].第一軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2000，20（2）：117-119.

[2] Bertoletti A，Gehring AJ.The immune response during hepatitis B virus infection[J].J Gen Virol，2006， 87（Pt6）：1439-1449.

[3] Mizukoshi E，Sidney J，Livingston B，et al.Cellular immune responses to the hepatitis B virus polymerase [J].J Immunol，2004，173（9）：5863-5871.

[4] 金伯泉，李恩善，許輝，等.細(xì)胞和分子免疫學(xué)[M].北京：世界圖書出版社，1995：259-285.

[5] Schlaak JF，Tully G，Lohy HF，et al.HBV-specific immune defectin chronic hepatitisB（CHB）is correlated with dysregulation of pro-and anti-inflammatory cytokines[J].Clin Exp Immunol，1999，115（3）：508-514.

[6] Bozkaya H，Bozdayi M，Turkyilmaz R，et al.Cirulating IL-2，IL-10 and TNF-alpha in chronic hepatitis B: their relations to HBeAg status and the activity of liver disease[J].Hepagastroenterology，2000，47（36）：1675-1679.

[7] 邢漢前，辛紹杰，趙景民，等.HBV慢性感染患者免疫耐受期肝組織內(nèi)T、B淋巴細(xì)胞的變化[J].世界華人消化雜志， 2005，13（13）：1529-1534.

[8] 季偉，王慧芬，馮傳前，等.慢性乙型肝炎患者外周血淋巴細(xì)胞凋亡的檢測(cè)及臨床意義[J].中華肝臟病雜志，1997，7：77-79.

（收稿日期：2012-03-21）