姚艷敏，王希柱，宋巧鳳，覃 泱，李會(huì)菊，徐彤彤，張立杰，朱艷輝

（1.唐山市人民醫(yī)院心內(nèi)科；2.唐山市人民醫(yī)院CT室，河北 唐山 063001；3.桂林醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院內(nèi)科學(xué)教研室；4.桂林醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院特需病區(qū)，廣西 桂林 541001）

急性肺栓塞（APE）是由于內(nèi)源性或外源性栓子阻塞肺動(dòng)脈主干或分支引起循環(huán)障礙的臨床和病理生理綜合征，是一種常見的肺血管疾病[1]。文獻(xiàn)報(bào)道促炎性因子如血清腫瘤壞死因子-α（TNF-α）和白細(xì)胞介素-8（IL-8），廣泛地參與了肺栓塞后肺組織損傷等病理過程[2]。要想保護(hù)損傷的肺組織，機(jī)理在于有效地調(diào)控促炎癥因子。瘦素的作用機(jī)制目前國內(nèi)外研究逐漸深入，發(fā)現(xiàn)它在組織損傷發(fā)生、發(fā)展過程中與一些炎癥因子密切相關(guān)[3]。本研究通過給予不同劑量的外源性瘦素，來干預(yù)栓塞后血清炎性因子的變化，試圖找到一種降低肺組織損傷的方法。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物及分組

健康新西蘭兔30只，雄性, 兔齡4～6個(gè)月, 體質(zhì)量210～250 kg，由北京醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室提供。隨機(jī)分為5組，對(duì)照組、生理鹽水（NS）對(duì)照組、低劑量瘦素組，中等劑量瘦素組，高劑量瘦素組，每組6只。

1.2 模型的制備及各組的處理

1.2.1 血栓制備：首先碘酒酒精消毒, 自兔耳緣靜脈取血2 mL，加入EP管中，離心1500 r/min后取上清液，加入凝血酶20 U，之后再將其放入70℃溫箱里水浴10 min，使血栓更牢固, 將其制成直徑1～2 mm，長4～5 mm的血栓備用。

1.2.2 動(dòng)物模型的制備：首先將實(shí)驗(yàn)兔子麻醉，經(jīng)腹腔緩慢推注10 %水合氯醛溶液，劑量為3 mL/kg。麻醉成功后，頸部剪毛，先用碘酒、酒精局部消毒, 再行一長約3 cm的縱向切口。并分離右側(cè)頸靜脈, 經(jīng)右頸靜脈插入一無活瓣靜脈鞘，深度約直至右心房, 供血栓注入, 右股動(dòng)脈固定留置套管針，用于采血。將制備好的血栓經(jīng)右頸靜脈分2 次注入，每隔3 min重復(fù)注入，每次注入血栓后快速推注NS 3～5 mL以防血栓滯留于導(dǎo)管或頸靜脈內(nèi)。所有動(dòng)物模型均按上述方法復(fù)制，麻醉意外或中途死亡兔均剔除本實(shí)驗(yàn)。模型組對(duì)照組同期以相同的方式輸入等量NS。正常對(duì)照組麻醉，插管后經(jīng)右頸靜脈以相同方式給予等量NS。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

5組分別于栓塞前0 h抽取靜脈血2 mL，對(duì)照組設(shè)為A組，行頸靜脈穿刺后，注射NS 2 mL，另外造模成功后，隨機(jī)分為B、C、D、E 4組，B組作為模型對(duì)照，經(jīng)頸內(nèi)靜脈注入行頸靜脈穿刺后，注射NS 2 mL；C組為低劑量組，給予外源性重組瘦素，劑量為20 μg/kg；D組為中等劑量組，給予外源性瘦素，劑量為50 μg/kg；E組為高等劑量組，給予外源性瘦素，劑量為100 μg/kg，之后于4 h各組分別取靜脈血2 mL，用4℃低溫離心機(jī)以3 000 r/min離心（離心10 min），收集上清液。各種因子檢測(cè)采用ELISA測(cè)定法檢測(cè)，具體按說明書操作。

1.4 炎性細(xì)胞因子的檢測(cè)

腫瘤壞死因子-a（TNF-α）,白細(xì)胞介素-8（IL-8），檢測(cè)均按照ELISA試劑盒說明書檢測(cè)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 10.0統(tǒng)計(jì)軟件行單因素方差分析，有顯著差異后, 兩兩比較采用Q檢驗(yàn)，組間數(shù)據(jù)比較采用t檢驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用“±s”表示。

2 結(jié)果

2.1 各組炎癥因子的變化

各實(shí)驗(yàn)組血清炎性細(xì)胞因子TNF-α，IL-8的變化，模型對(duì)照組在栓塞后4 h明顯升高；低劑量瘦素干預(yù)組TNF-α、IL-8 亦有下降；中劑量瘦素干預(yù)組，TNF-α，IL-8明顯下降；高劑量瘦素組，TNF-α，IL-8與模型對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)果見表1。

表1 各組實(shí)驗(yàn)血清炎性細(xì)胞因子TNF-α、IL-8的結(jié)果（±s，n=6）

表1 各組實(shí)驗(yàn)血清炎性細(xì)胞因子TNF-α、IL-8的結(jié)果（±s，n=6）

組別 IL-8 TNF-α 0 h 4 h 0 h 4 h NS對(duì)照組 0.28±0.80 2.79 ±0.11* 1.29 ±0.41 3.52 ±0.42模型對(duì)照組 0.29±0.10 12.32±0.13* 1.28 ±0.42 21.29±0.36*低劑量瘦素組 0.29±0.11 9.32±0.11* 1.29 ±0.49 17.21±0.34*中劑量瘦素組 0.27±0.12 4.32±0.12* 1.28 ±0.43 7.29±0.26*高劑量瘦素組 0.28±0.11 13.32±0.13* 1.27 ±0.49 23.21±0.21*

2.2 病理檢查結(jié)果

模型組（NS組）病理檢查顯示：肺葉膨脹不全和肺不張，同時(shí)可見血栓及散在出血灶。顯微鏡下可見血栓, 血栓表面不光滑、著色深淺不一，管壁變薄，肺泡壁和間質(zhì)增厚，血管內(nèi)可見大量白細(xì)胞侵潤和炎性滲出；瘦素干預(yù)組，肺內(nèi)炎性細(xì)胞侵潤明顯減輕。

3 討論

瘦素由體內(nèi)白色脂肪分泌，它廣泛存在人體的組織中，有著多種生理作用[4]。隨著對(duì)瘦素認(rèn)識(shí)的深入，發(fā)現(xiàn)它在組織損傷發(fā)生、發(fā)展過程中與一些炎癥因子密切相關(guān)[5]。由本實(shí)驗(yàn)可見，NS模型組，TNF-α、IL-8，4 h明顯升高，與正常對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；經(jīng)中等劑量瘦素預(yù)處理后，炎性因子4 h監(jiān)測(cè)指標(biāo)明顯下降，與NS模型組比較明顯下降，差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。從病理可見，經(jīng)中等劑量的瘦素干預(yù)后的肺組織炎性反應(yīng)明顯減輕，我們認(rèn)為可能外源性瘦素通過降低中性粒細(xì)胞的聚集與浸潤，減輕脂質(zhì)過氧化和自由基損傷，從而達(dá)到對(duì)肺組織的保護(hù)作用，具體機(jī)制有待于進(jìn)一步研究。

[1]程顯聲.進(jìn)一步提高肺動(dòng)脈栓塞診斷與處理水平[J].中華結(jié)核和呼吸雜志,2000,23(9):517-518.

[2]谷國強(qiáng),崔 煒.急性肺栓塞患者危險(xiǎn)分層的生物學(xué)指標(biāo)[J].國際心血管病雜志,2006,33(2):110-113.

[3]BellmeyerA,Martino JM,ChandelNS,et al.Leptin resistance protects mice from hyperoxia induced acute lung injury[J].Am J Res Crit CareMed,2007,175(6):587-594.

[4]徐彤彤,陳蒙華.心肌缺血再灌注損傷的瘦素機(jī)制研究進(jìn)展[J].中國急救醫(yī)學(xué),2010,30(6):548-551.

[5]張蓓蓓,張紅菊,遲鴻冰.單純性舒張功能障礙高血壓患者發(fā)生肺動(dòng)脈高壓的相關(guān)因素分析[J].中國醫(yī)藥,2012,7(10):1201-1203.