卜范文 ，何科佳 ，賈德翠 ，鐘彩虹 ，王仁才

（1.湖南省園藝研究所，湖南 長(zhǎng)沙 410125；2.國(guó)家農(nóng)業(yè)部華中地區(qū)果樹科學(xué)觀測(cè)實(shí)驗(yàn)站，湖南 長(zhǎng)沙 410125；3.長(zhǎng)沙時(shí)鮮水果工程技術(shù)研究中心，湖南 長(zhǎng)沙 410125；4.吉首市農(nóng)業(yè)局，湖南 吉首 416000；5.中國(guó)科學(xué)院武漢植物園，湖北 武漢 430074；6.湖南省農(nóng)業(yè)大學(xué)，湖南 長(zhǎng)沙 410128）

獼猴桃在植物分類學(xué)上屬獼猴桃科（Actinidiaceae）獼猴桃屬（Actinidia Lindl）植物，其果實(shí)味道鮮美，營(yíng)養(yǎng)豐富，有“果中珍品”、“Vc 之王”、“長(zhǎng)壽之果”、“食療佳品”之美稱[1－3]。獼猴桃特別是獼猴桃籽油的保健價(jià)值正逐漸被人們發(fā)現(xiàn)和認(rèn)可。經(jīng)測(cè)定，獼猴桃籽粒中含油率平均為28.85%，其中不飽和脂肪酸含量高達(dá)90.37%，而亞油酸、亞麻酸含量平均占不飽和脂肪酸的74.83%[4－5]?！懊琢家惶?hào)”獼猴桃的含油率為28.3%，氣相色譜測(cè)定其脂肪酸組成，α-亞麻酸含量高達(dá)63.99%，在迄今發(fā)現(xiàn)的所有含α-亞麻酸的植物中名列前茅，可作為補(bǔ)充n-3不飽和脂肪酸的重要保健油資源加以開發(fā)利用[6－8]。研究還發(fā)現(xiàn)某些種類的獼猴桃籽油中含有角鯊烯。隨著獼猴桃籽油保健功能及其相關(guān)產(chǎn)品的研發(fā)，對(duì)影響獼猴桃籽油含量和成分影響因子的研究也日漸深入，卜范文[9]等研究發(fā)現(xiàn)不同種類獼猴桃的籽油含量和成分差異較大，其中大籽獼猴桃種子出油率達(dá)30.57%，果實(shí)出油率為1.02%；闊葉獼猴桃出籽率達(dá)5.02%，種子出油率為14.97%；漓江獼猴桃角鯊烯含量高達(dá)0.52%，都極具開發(fā)價(jià)值。該研究以4個(gè)栽培品種（豐悅、翠玉、沁香、米良1號(hào)）為母本，以4個(gè)不同的授粉品種為父本，研究了不同授粉品種對(duì)不同獼猴桃品種籽油含量及成份的影響，旨在為通過(guò)栽培手段提高鮮食獼猴桃保健價(jià)值提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試品種 獼猴桃不同品種采自湖南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院園藝研究所獼猴桃品種資源圃。授粉試驗(yàn)采用的雄性品種為楚源M1（中華獼猴桃）、楚源M3（中華獼猴桃）、楚源M5（美味獼猴桃）、幫增1號(hào)（美味獼猴桃），雌性品種為豐悅、翠玉、沁香、米良1號(hào)。

1.1.2 儀器與試劑 試驗(yàn)主要儀器有旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀RE-52AA（上海亞榮生化儀器廠）、高速萬(wàn)能粉碎機(jī)FW-100型（江西紅星機(jī)械有限責(zé)任公司）、電子數(shù)顯游標(biāo)卡尺（安微通和量具廠）、低溫冷卻液循環(huán)泵DLSB型（北京比朗實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）、北京醫(yī)用離心機(jī)LDZ4－0.8（北京京立離心機(jī)有限公司）、循環(huán)水真空泵SHZ-Ⅲ（上海亞榮生化儀器廠）、數(shù)控超聲波清洗器KQ－250DE型（昆山市超聲儀器有限公司）、恒溫水浴鍋DK-S24（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）、電熱恒溫干燥箱DHG-9246A（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）、分析天平AY-220（日本島津）。主要試劑為石油醚（沸程60～90℃）、三氟化硼、無(wú)水乙醚、正己烷、甲醇、KOH等，均為分析純。

1.2 方法

1.2.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 授粉試驗(yàn)在湖南省園藝研究所獼猴桃栽培園完成。以湖南省園藝研究所獼猴桃栽培園豐悅、翠玉、沁香、米良1號(hào)為試材，每個(gè)雌性品種分別用不同雄性品種花粉進(jìn)行授粉。4個(gè)雄性品種分別為楚源M1、楚源M3、楚源M5，以及對(duì)照幫增1號(hào)。用以上4種花粉分別給4個(gè)試材品種雌株授粉（開花之前應(yīng)套袋），每處理授粉100朵花，重復(fù)3次。授完粉后立即套袋以避免其他花粉的污染，3 d后摘除袋子（均已經(jīng)授粉成功）。

1.2.2 獼猴桃種子性狀及籽油含量測(cè)定 在果實(shí)充分成熟期（可溶性固形物在6.5%~7.5%），收集上述處理的獼猴桃果實(shí)各約5 kg，測(cè)定果實(shí)大小。待果實(shí)軟熟后，洗出種子，分別測(cè)定種子的性狀，包括大小、千粒重、出籽率及單果種子數(shù)量。采用超聲波+溶劑提取法提取獼猴桃籽油[10－12]，每處理重復(fù)4次，測(cè)定果實(shí)籽油含量。（1）果實(shí)、種子大小測(cè)定：用千分之一電子分析天平測(cè)定果實(shí)的單果重及種子千粒重；用0～150 mm電子數(shù)顯游標(biāo)卡尺分別測(cè)定果實(shí)與種子縱、橫徑。（2）出籽率：出籽率（%）=種子重量（g）/果實(shí)重量（g）。（3）籽油含量測(cè)定：用高速萬(wàn)能粉碎機(jī)粉碎已干燥去雜的獼猴桃種子（30~40目），每次稱取5 g，裝入三角瓶中并加入40 mL石油醚溶液（料液比8∶1），用數(shù)控超聲波清洗器進(jìn)行萃取，30℃、200 w萃取20 min，再4 000 r/m離心3.5 min。離心后的溶液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸餾濃縮，回收溶劑，將提取的獼猴桃籽油放入干燥箱中（95℃）恒溫鼓風(fēng)干燥，直到恒重。籽油含量=（樣品籽油重量／樣品種子重量）×100%。（4）單位果重含油量：?jiǎn)挝还睾土浚?）=出籽率×籽油含量。

1.2.3 籽油成分的氣相色譜-質(zhì)譜分析（GC-MS）籽油甲酯化后采用GC-MS分析籽油成分與含量，比較品種間及同一品種用不同授粉品種獲得的種子出油率的差異。（1）樣品甲酯化：取0.1 g籽油加入乙醚與正己烷混合液（混合比為2∶1）1 mL，再加入甲醇1 mL，皂化液（0.5 mol/L KOH—甲醇）1 mL，混勻。于60℃水浴皂化至油珠消失，冷卻后加入甲醇醋化液（14%二氟化硼—甲醇）1 mL，靜置10 min，加入純凈水至10 mL，振蕩，取上清液進(jìn)行色譜分析。（2）色譜柱：Rtx-5ms，0.25 μm×0.25 mm×30 m；升溫程序：初溫170℃，保持3 min，升溫速率17℃/min，終溫 200℃，保持 17 min；進(jìn)樣口：250℃；分流比：1∶30；柱流速：1.0；離子源溫度 200℃；接口溫度：220℃；質(zhì)核比掃描范圍：40~500 m/z。（3）相對(duì)含量由其峰面積歸一化法計(jì)算。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同授粉品種對(duì)單果重及出籽率的影響

在獼猴桃不同雌性品種間采用不同雄性品種授粉，對(duì)果實(shí)大小、重量影響較大（圖1）。采用中華獼猴桃雄株授粉，果實(shí)重量降低；采用美味獼猴桃雄株授粉，果實(shí)重量增加。其中，楚源M5授粉于米良1號(hào)時(shí)果實(shí)最大，平均單果重達(dá)119.9 g，楚源M1授粉于豐悅時(shí)果實(shí)最小，平均單果重僅65.4 g。不同授粉品種對(duì)果實(shí)出籽率影響較小（圖2），僅楚源M1具有降低出籽率的趨勢(shì)。

2.2 不同授粉品種對(duì)種子性狀的影響

不同授粉品種間種子千粒重差異較?。▓D3），楚源M1授粉于翠玉、沁香、米良1號(hào)時(shí)與其他處理具有明顯差異。而楚源M3、楚源M5、幫增1號(hào)授粉時(shí)各品種間無(wú)顯著差異。其中，楚源M1授粉于豐悅時(shí)，種子千粒重最小，為1.34 g，楚源M5和幫增1號(hào)分別授粉于沁香和米良1號(hào)時(shí)，種子千粒重最大，達(dá) 1.87 g。

不同授粉品種間種子籽油含量無(wú)顯著性差異（圖4）。不同雌性品種間種子千粒重和籽油含量差異顯著，但不同授粉品種間無(wú)顯著性差異，說(shuō)明雌性品種對(duì)種子性狀的影響高于授粉（雄性）品種。

2.3 不同授粉品種對(duì)籽油成分的影響

不同授粉品種授粉后，獼猴桃籽油中總不飽和脂肪酸的含量相對(duì)穩(wěn)定，各處理之間差異較小（圖5，圖6）。但各處理之間不飽和脂肪酸的含量不同，如各授粉處理間α-亞麻酸含量差異不明顯，而角鯊烯含量則差異極為明顯。楚源M1授粉于米良1號(hào)的種子油中角鯊烯含量最高，達(dá)1.2%，楚源M5授粉于米良1號(hào)時(shí)含量最低，僅微量存在。沁香品種不同處理時(shí)角鯊烯含量也具有較大差別。中華獼猴桃品種翠玉、豐悅的不同授粉品種獲得的種子油中未能檢測(cè)出角鯊烯存在。這表明采用不同種類的花粉對(duì)獼猴桃種子內(nèi)角鯊烯的形成和積累具有極大影響。

2.4 不同授粉品種對(duì)單位果重含油量的影響

不同授粉品種進(jìn)行授粉處理對(duì)單位果重含油量的影響在各雌性品種間反應(yīng)不同（圖7），不同授粉品種授粉于豐悅和沁香時(shí)單位果重含油量差別不明顯，而楚源M1授粉于翠玉和米良1號(hào)時(shí)，單位果重含油量明顯比其他3種處理要小。

3 小結(jié)

已有研究報(bào)道，采用不同授粉品種，對(duì)獼猴桃雌性品種的果實(shí)生長(zhǎng)發(fā)育都有較大影響。該研究以4個(gè)栽培品種豐悅、翠玉、沁香、米良1號(hào)為母本，以楚源M1、楚源M3、楚源M5、幫增1號(hào)為父本，即授粉品種，研究了不同授粉品種對(duì)不同獼猴桃品種籽油含量及成份的影響。研究結(jié)果表明，采用不同授粉品種，對(duì)獼猴桃雌性品種的果實(shí)生長(zhǎng)發(fā)育都有較大影響。雄性美味獼猴桃授粉可以增加出籽率、種子千粒重，但整體上對(duì)α-亞麻酸含量影響不大，對(duì)角鯊烯的積累也不利；楚源M1不利于提高種子大小等性狀，但對(duì)提高α-亞麻酸相對(duì)含量有一定作用，在增加角鯊烯含量方面效果顯著，在生產(chǎn)和育種上都可以加以利用。

[1]趙紅軍，馬旭峰，孔凡春，等.獼猴桃栽培及利用的研究進(jìn)展[J].落葉果樹，1998，（1）：51-52.

[2]任小林，羅廷紅.獼猴桃果實(shí)的食療價(jià)值[J].中國(guó)果菜，2000，（1）：45.

[3]左長(zhǎng)清.中華獼猴桃栽培與加工技術(shù)[M].北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，1996.

[4]黃倬偉，易明華.獼猴桃籽提煉優(yōu)質(zhì)食用油的研究[J].糧油食品科技，1992，（4）：11-12.

[5]Fournier G,Plat M.Fatty acid from seeds of different Kiwifruit[J].Plant Med Phytother,1988,22（1）：23-26.

[6]姚茂君，李加興，張永康.獼猴桃籽油的開發(fā)利用探討[J].食品與發(fā)酵工業(yè)，2001，27（12）：28-30.

[7]姚茂君，李嘉興，張永康.獼猴桃籽油理化特性及脂肪酸組成[J].無(wú)錫輕工大學(xué)學(xué)報(bào)，2002，2（3）：307-309.

[8]張永康，蔣劍波，陳莉華.獼猴桃果仁油脂肪酸的測(cè)定及其利用[J].吉首大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2001，22（4）：37-38，82.

[9]卜范文，王仁才，李先信，等.獼猴桃種間差異對(duì)其籽油含量及成分的影響[J].湖南農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011，（24）：18-19，23.

[10]王新剛，王鴻儒，胡小軍.獼猴桃籽油的提取與分析研究[J].中國(guó)油脂，2004，29（5）：58-60.

[11]張廣棟，羅倉(cāng)學(xué)，付 聰.均勻設(shè)計(jì)法優(yōu)化獼猴桃籽油超聲波提取工藝[J].糧油加工與食品機(jī)械，2005，（1）：54-55.

[12]張郁松，趙雁武.超聲波法提取稱猴桃籽油的工藝研究[J].中國(guó)糧油學(xué)報(bào)，2006，21（6）：116-118.