曾 斌，孫中海，何科佳，李健權(quán)，楊水芝

（1.湖南省園藝研究所，湖南 長(zhǎng)沙 410125；2.國(guó)家農(nóng)業(yè)部華中地區(qū)果樹科學(xué)觀測(cè)試驗(yàn)站，湖南 長(zhǎng)沙 410125；3.長(zhǎng)沙時(shí)鮮水果工程技術(shù)中心，湖南 長(zhǎng)沙 410125；4.湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院果樹茶葉研究所，湖北 武漢 430209）

柑橘是我國(guó)南方重要的果樹之一，最適宜生長(zhǎng)溫度是22～30℃，但隨著全球天氣變暖也面臨著溫度脅迫，產(chǎn)區(qū)的低高溫（如冰凍害可達(dá) －10℃；夏季高溫可達(dá)42℃）使得柑橘落花落果嚴(yán)重，產(chǎn)量降低，來(lái)年樹勢(shì)削弱，因此提高柑橘的耐溫度脅迫能力具有非常重要的意義[1]。枳殼在柑橘生產(chǎn)中作為砧木有著廣泛的應(yīng)用，枳殼在自然環(huán)境中依靠與土生真菌——叢枝菌根真菌（arbuscular mycorrhizal fungi，簡(jiǎn)稱AM真菌或AMF）形成共生聯(lián)合體，大大提高了枳殼的抗脅迫能力，因此菌根化枳殼研究對(duì)柑橘生理生態(tài)方面的研究具有重要作用[2-3]。試驗(yàn)針對(duì)我國(guó)柑橘帶產(chǎn)區(qū)出現(xiàn)的產(chǎn)區(qū)溫度脅迫問(wèn)題，研究不同溫度下AMF對(duì)枳殼實(shí)生苗葉片抗氧化系統(tǒng)等的影響，旨在為柑橘菌根化育苗中高效優(yōu)良菌種（株）的篩選提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

供試植物選用枳殼健康生長(zhǎng)一致無(wú)病菌幼苗；供試叢枝菌根真菌菌種共4個(gè)，原種分別為珠狀巨孢囊霉（Gigspora margarita），由國(guó)際AMF保藏中心Morton博士提供；摩西球囊霉（Glomus mosseae）和地表球囊霉（Glomus versiforme）由萊陽(yáng)農(nóng)學(xué)院劉潤(rùn)進(jìn)教授提供。菌根接種劑是以白三葉草（Trifolium repense L.）為宿主，經(jīng)盆栽將原種擴(kuò)大繁殖的含有宿主植物根段、相應(yīng)菌根真菌孢子及根外菌絲體的根際土壤；供試基質(zhì)為播種枳種子土壤，采自菜園土，菜園土∶珍珠巖∶蛭石按 2∶1∶1 的比例混合。溫度試驗(yàn)用土壤理化性質(zhì)測(cè)定為：pH值（水浸提，水土比為1∶1）5.91；速效P含量為0.35 mg/kg。土壤過(guò)篩，經(jīng)121℃高壓濕熱滅菌2 h后晾干。

1.2 試驗(yàn)方法

試驗(yàn)容器為塑料盆，接種處理每盆接種含有真菌孢子100個(gè)的根際土壤（其中含有相應(yīng)的植物根段和根外菌絲體），對(duì)照處理加等量滅菌菌劑。在生長(zhǎng)45 d后的枳苗中挑選生長(zhǎng)狀況一致、根系相當(dāng)?shù)倪M(jìn)行盆栽，盆隨機(jī)排列。試驗(yàn)分5個(gè)處理，分別為接種 Glomus versiforme（S＋Gl.ver）、Glomus mosseae（S＋Gl.mos）、Gigspora margarita（S+Gi.mar）、Glomus versiforme＋Glomus mosseae＋Gigspora margarita（S+G.vmm）和不接種（S-AMF）處理。試驗(yàn)于5月1日進(jìn)行接種，置于溫室中生長(zhǎng)至9月15日。生長(zhǎng)期間每隔兩個(gè)星期澆一次1/4強(qiáng)度Hoagland營(yíng)養(yǎng)液（P含量為其1/10），其它按溫室常規(guī)管理。9月15日分別測(cè)定其生物產(chǎn)量和菌根侵染率。再分別把各處理枳實(shí)生苗平均置于 25℃/25℃（day/night）、30℃/30℃、43～48℃/35～38℃控溫溫室內(nèi)進(jìn)行溫度處理，定期澆水，保持其土壤濕潤(rùn)。分別于溫度處理第30 d取植株進(jìn)行相關(guān)生理生化指標(biāo)的測(cè)定。

1.3 測(cè)定方法

葉片可溶性糖、可溶性淀粉、可溶性蛋白質(zhì)、超氧化物歧化酶(SOD)、過(guò)氧化物酶(POD)和過(guò)氧化氫酶 (CAT)分別采用蒽酮比色法、G-250法、氮藍(lán)四唑(NBT)法、愈創(chuàng)木酚法和分光光度法測(cè)定。

1.4 數(shù)據(jù)處理

所有試驗(yàn)數(shù)據(jù)運(yùn)用SAS軟件ANOVA進(jìn)行處理間差異顯著性測(cè)驗(yàn)，采用DUNCAN法作差異顯著性比較分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同AM真菌對(duì)枳實(shí)生苗的侵染

從圖1中可以看出，未接種AM真菌的枳實(shí)生苗沒(méi)有菌根的侵染，所有接種AM真菌的處理植株在根系中均可觀察到菌根的侵染，在S+G.vmm和S+Gi.mar處理中還可見(jiàn)到泡囊。從侵染的實(shí)際效果來(lái)看，以Gi.mar處理對(duì)枳實(shí)生苗的侵染率最高，達(dá)到86%，S+G.vmm的處理次之，這兩者差異性不顯著。S+Gl.mos處理的浸染率達(dá)到了62%，S+Gl.ver約為21%。從單個(gè)菌根侵染率的效果來(lái)看，以S+Gi.mar處理的侵染率稍高，這說(shuō)明Gigspora margarita與枳實(shí)生苗有很好的親和力。李曉林和馮固認(rèn)為，一般以混合菌株的效果較好，因?yàn)樵谧匀唤缤寥乐胁⒉皇菃我环NAM真菌對(duì)植物起作用，而是各種不同的菌株相互的影響，試驗(yàn)也反映了這一點(diǎn)；同時(shí)可以初步判定在試驗(yàn)中Gigspora margarita是枳實(shí)生苗親和力的高效菌株。

2.2 不同溫度下叢枝菌根對(duì)枳實(shí)生苗根系活力的影響

根的生長(zhǎng)情況和活力水平直接影響地上部的營(yíng)養(yǎng)狀況及產(chǎn)量水平。從圖2中可以看出，不同菌株對(duì)根系活力的提高效果明顯不同：在同一溫度下，根系活力以S+G.lmos處理最高，S+Gi.mar處理次之，尤其當(dāng)處理達(dá)到40℃時(shí)更為明顯；同一溫度下，接種AM真菌能夠提高植株的根系活力，尤以S+G.lmos處理效果最好。相同菌株不同溫度下，以40℃處理下根系活力較高，這與高溫對(duì)植株產(chǎn)生了不良影響，從而使AM真菌通過(guò)提高根系活力吸取更多的養(yǎng)分和水分來(lái)抵抗有關(guān)。這都說(shuō)明AM真菌能顯著提高植株根系的活力來(lái)增加植物對(duì)外界條件的影響，根系活力越高，植株對(duì)不良條件的抵抗能力越強(qiáng)。

2.3 不同溫度下叢枝菌根對(duì)枳實(shí)生苗葉片可溶性糖和可溶性蛋白含量的影響

接種叢枝菌根真菌之后，可以顯著提高高溫脅迫下枳殼幼苗葉片的可溶性糖的含量。圖3表明，在同一溫度下接種不同菌株均可提高枳實(shí)生苗葉片中可溶性糖的含量。不同處理增加的程度各異，按照處理為 S+Gl.ver、S+Gl.mos、S+Gi.mar和 S+G.vmm依次向上遞增。與對(duì)照相比，各菌株處理的可溶性糖含量差異顯著，以S+G.vmm處理最高。從相同菌株不同溫度的可溶性糖含量來(lái)看，相比之下溫度越高可溶性糖含量越高，尤其當(dāng)溫度達(dá)到40℃時(shí)。這不僅說(shuō)明接種叢枝菌根真菌能夠增加葉片的可溶性糖含量，也說(shuō)明叢枝菌根真菌能夠通過(guò)直接或間接的作用來(lái)調(diào)節(jié)植株體內(nèi)的可溶性糖等滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)來(lái)抵抗高溫對(duì)其產(chǎn)生的影響。

植物可溶性蛋白的含量與植物的耐熱性有關(guān)[4]。從圖4中可以看出，枳實(shí)生苗葉片在不同菌株不同溫度的處理下表現(xiàn)不同。與對(duì)照相比，可溶性蛋白的含量以S+G.vmm處理最高，S+Gi.mar處理次之，接著是S+Gl.mos處理，S+Gl.ver處理最差，但都顯著地增加了枳實(shí)生苗葉片的可溶性蛋白含量。除對(duì)照外，接種同種菌株不同溫度下枳實(shí)生苗葉片可溶性蛋白含量隨著溫度的提高而增大；不接種AM真菌的對(duì)照在不同溫度下可溶性蛋白的含量幾乎不變，而其他菌株均能有效地提高枳實(shí)生苗葉片可溶性蛋白的含量，以S+G.vmm處理最高。

2.4 不同溫度下叢枝菌根對(duì)枳實(shí)生苗葉片質(zhì)膜透性、MDA含量和脯氨酸含量的影響

從圖5中可以看出，不同溫度下接種不同叢枝菌根均能顯著降低枳實(shí)生苗葉片的質(zhì)膜透性。從相對(duì)電導(dǎo)率來(lái)看，以S+G.vmm能夠最大程度地減小葉片質(zhì)膜透性，S+Gl.ver處理最差。尤其在溫度為40℃時(shí)，各菌株能夠顯著降低質(zhì)膜透性，抵抗高溫對(duì)植株的傷害。從相同菌株不同溫度來(lái)看，即使在25、30℃下并沒(méi)有使枳實(shí)生苗進(jìn)入逆境，但還是能降低葉片的質(zhì)膜透性，增強(qiáng)枳實(shí)生苗的抵抗力。

MDA含量是反映細(xì)胞膜脂過(guò)氧化的重要指標(biāo)，細(xì)胞受傷害越重，MDA的含量就越高[5]。試驗(yàn)證明：接種叢枝菌根真菌可以顯著地降低高溫脅迫時(shí)枳實(shí)生苗葉片的MDA含量。從圖6中可以看出，與對(duì)照相比，在各溫度下接種不同AM真菌對(duì)枳實(shí)生苗葉片MDA含量都有不同程度的下降。在溫度為40℃時(shí)，各處理與對(duì)照的差異較大，急劇地降低了葉片MDA的含量；在30℃時(shí)與對(duì)照相比，S+G.vmm處理的MDA含量最小。

如圖7所示，枳實(shí)生苗在不同溫度不同菌株處理中，S+Gl.ver處理與對(duì)照無(wú)差異，而其他3個(gè)處理都能夠使枳實(shí)生苗葉片脯氨酸含量維持在較低的水平上，與對(duì)照差異性顯著，尤其在40℃的處理下；但這3種不同溫度處理之間無(wú)顯著差異。在這一點(diǎn)上，Gi.margarita并沒(méi)有表現(xiàn)出優(yōu)勢(shì)菌株的特點(diǎn)。

2.5 不同溫度下叢枝菌根對(duì)枳實(shí)生苗葉片抗氧化系統(tǒng)的影響

接種叢枝菌根真菌能夠顯著提高溫度脅迫下枳實(shí)生苗葉片SOD活性。試驗(yàn)結(jié)果表明（圖8），不同溫度下不同菌株之間的SOD活性差異顯著。相同溫度下，與對(duì)照相比，以S+G.vmm處理最高，S+Gi.mar、S+Gl.mos處理次之，S+Gl.ver處理最小。而接種相同菌株在不同溫度下SOD活性差異性不大。

接種不同叢枝菌根真菌顯著提高了高溫逆境下枳實(shí)生苗葉片POD活性。如圖9所示，與對(duì)照相比，不同溫度下菌根化枳實(shí)生苗葉片POD活性顯著提高，以S+G.vmm處理為最佳，這證明AM真菌能夠提高植株體內(nèi)POD的活性。尤其在40℃時(shí)，與對(duì)照相比，接種AM真菌處理更能顯著地提高植株P(guān)OD活性，且S+G.vmm處理的效果最為顯著。

3 小 結(jié)

研究發(fā)現(xiàn)，接種叢枝菌根真菌能夠增強(qiáng)枳實(shí)生苗對(duì)高溫脅迫的抵抗力，減輕高溫對(duì)枳實(shí)生苗的傷害。S+G.vmm處理與對(duì)照的差異最大，其次是S+Gi.mar處理。由此可見(jiàn)，S+G.vmm處理能最大地提高枳實(shí)生苗耐高溫能力，這跟自然狀態(tài)下土壤中是多種菌株存在相符合。從單獨(dú)效果來(lái)看，珠狀巨孢囊霉則是枳實(shí)生苗的優(yōu)良高效菌株。試驗(yàn)表明，叢枝菌根能有效提高枳實(shí)生苗的耐高溫脅迫，但試驗(yàn)中大多數(shù)指標(biāo)是間接反映植株對(duì)高溫脅迫的反應(yīng)，而根系活力則不同，它直接反映了叢枝菌根真菌與植物根系形成共生關(guān)系，并通過(guò)對(duì)根系的直接作用使植株減小高溫脅迫帶來(lái)的負(fù)面影響。推測(cè)叢枝菌根真菌提高寄主植物的抗高溫脅迫可能與叢枝菌根真菌提高了寄主植物的根系活力有關(guān)。至于叢枝菌根真菌是怎樣提高根系的活力、根系活力提高后如何增強(qiáng)植株耐高溫的能力，仍需要深入研究。

[1]吳強(qiáng)盛，夏仁學(xué)，胡利明.土壤未滅菌條件下叢枝菌根對(duì)枳實(shí)生苗生長(zhǎng)和抗旱性的影響[J].果樹學(xué)報(bào)，2004，21（4）：315-318.

[2]吳強(qiáng)盛.園藝植物叢枝菌根的研究與應(yīng)用[M].北京：科學(xué)出版社，2010.

[3]楊曉紅，曾 斌，李新國(guó)，等.AM真菌種間差異對(duì)枳殼生長(zhǎng)及耐熱性效應(yīng)的研究[J].菌物學(xué)報(bào)，2005,24（4）：582-589.

[4]李思龍，張玉剛，陳丹明.叢枝菌根對(duì)高溫脅迫下牡丹生理生化的影響[J].中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)，2009，25（7）：154-157.

[5]韓 冰，賀超興，閆 妍，等.AMF對(duì)低溫脅迫下黃瓜幼苗生長(zhǎng)和葉片抗氧化系統(tǒng)的影響[J].中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011，44（8）：1646-1653.