劉焱 劉霖 呂曉梅

近半個(gè)世紀(jì)以來(lái)，傳統(tǒng)體液細(xì)胞學(xué)檢查在腫瘤防治工作中起到了重要作用?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)漿膜腔積液細(xì)胞學(xué)診斷提出了更高要求，僅憑借細(xì)胞涂片常規(guī)HE染色判斷良惡性是不夠的，還需盡可能找出轉(zhuǎn)移性腫瘤的原發(fā)灶。我們收集65例漿膜腔積液中轉(zhuǎn)移性腺癌病例，用細(xì)胞塊免疫化學(xué)染色方法，探討甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子-1(TTF-1)在肺腺癌細(xì)胞中的表達(dá)，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集我院2009至2011年臨床科室送檢漿膜腔積液轉(zhuǎn)移性腺癌65例(胸水49例、腹水15例、心包積液1例)，其中男41例，女24例。臨床資料及活檢證實(shí)肺腺癌45例，乳腺癌9例，卵巢癌4例，結(jié)腸癌4例，胃癌2例，胰腺癌1例。見(jiàn)表1。

表1 漿膜腔積液中的轉(zhuǎn)移性腺癌 例

1.2 試劑 選用北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司免疫組化試劑鼠抗人單克隆抗體甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子-1(TTF-1)，按說(shuō)明書(shū)的實(shí)驗(yàn)步驟操作。

1.3 方法 全部標(biāo)本用一次性膜式細(xì)胞采集器制作普通細(xì)胞涂片，95%乙醇固定，常規(guī)HE染色，顯微鏡下觀察。診斷為腺癌的標(biāo)本，用市售10 ml塑料試管重新收集，離心機(jī)2 000 r/min離心10 min，棄去上清液，在該試管中重新加入標(biāo)本，重復(fù)上述步驟，直到得到足夠的沉渣為止。取沉渣加入10%的中性緩沖甲醛固定、振蕩、再次離心，棄去上清液，沉淀物用棉紙包裹，10%的中性緩沖甲醛固定4 h，常規(guī)全自動(dòng)標(biāo)本脫水處理機(jī)脫水、透明、浸蠟后包埋，制成4 μm厚的細(xì)胞塊石蠟切片，選用北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司免疫組化試劑鼠抗人單克隆抗體TTF-1染色，按說(shuō)明書(shū)的實(shí)驗(yàn)步驟操作，由高年資醫(yī)師結(jié)合臨床資料閱片診斷。

1.4 判斷標(biāo)準(zhǔn)的設(shè)定 免疫組化染色：細(xì)胞核出現(xiàn)彌漫的棕黑色顆粒認(rèn)為是陽(yáng)性，5%以上的靶細(xì)胞出現(xiàn)定位清楚的棕黃色顆粒為陽(yáng)性表達(dá)，完全不著色的為陰性表達(dá)，介于二者之間的為不確定表達(dá)。根據(jù)陽(yáng)性信號(hào)出現(xiàn)的強(qiáng)度分為弱、中、強(qiáng)三級(jí);根據(jù)陽(yáng)性信號(hào)出現(xiàn)的范圍分為-(少于5%的癌細(xì)胞顯示陽(yáng)性)、+(6% ～25%的癌細(xì)胞顯示陽(yáng)性)、++(26% ～50%的癌細(xì)胞顯示陽(yáng)性)、+++(超過(guò)50%的癌細(xì)胞顯示陽(yáng)性)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.01為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HE染色觀察 漿膜腔積液中的腺癌細(xì)胞有明顯異型性，核漿比大，其胞核為圓形或卵圓形，核偏位或居中，核膜清晰并增厚，可規(guī)整或輕度不規(guī)整，核仁清晰并增大，核染色質(zhì)粗顆粒狀分布不均，胞質(zhì)內(nèi)有透亮區(qū)。細(xì)胞團(tuán)呈三維立體團(tuán)結(jié)構(gòu)，呈腺管狀、乳頭狀、小梁狀、球形等外觀(常規(guī)細(xì)胞學(xué)涂片與細(xì)胞塊切片的三維立體結(jié)構(gòu)很相似，細(xì)胞塊切片中，中空的腺樣結(jié)構(gòu)、囊泡狀結(jié)構(gòu)、乳頭狀結(jié)構(gòu)更多見(jiàn)。)細(xì)胞之間連接緊密或松散。

2.2 免疫細(xì)胞化學(xué)染色 漿膜腔積液普通涂片篩選出轉(zhuǎn)移性腺癌65例，收集沉渣制成4 μm厚的細(xì)胞塊石蠟切片，選用北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司免疫組化試劑鼠抗人單克隆抗體甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子-1(TTF-1)染色。45例肺腺癌中有39例TTF-1陽(yáng)性表達(dá)，敏感性(86.67%)，20例肺外腺癌有1例TTF-1陽(yáng)性表達(dá)，特異性為(95%)。差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。見(jiàn)表2。

表2 TTF-1在漿膜腔積液肺腺癌及肺外腺癌中的表達(dá) 例

3 討論

轉(zhuǎn)移性腺癌是漿膜腔積液中最常見(jiàn)的惡性腫瘤，胸腔積液、腹腔積液及心包積液中，以肺腺癌、乳腺癌、胃癌、腸癌、卵巢癌的癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移多見(jiàn)，其中以肺腺癌最為常見(jiàn)［1-3］。傳統(tǒng)體液細(xì)胞學(xué)檢查在腫瘤防治工作中起了重要作用。但多年來(lái)，漿膜腔積液的細(xì)胞學(xué)診斷停留在“找到瘤細(xì)胞”和“未找到瘤細(xì)胞”的水平?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)診斷和治療學(xué)發(fā)展的需要，要求我們對(duì)漿膜腔積液的診斷更為明確，既要定良惡性，還要分類(lèi)、分型，甚至對(duì)于臨床表現(xiàn)只有漿膜腔積液而未發(fā)現(xiàn)原發(fā)灶的患者，還要求通過(guò)細(xì)胞學(xué)診斷判定腫瘤的來(lái)源。器官特異性抗體的出現(xiàn)為確定原發(fā)灶提供了可能。

TTF-1是最近才認(rèn)識(shí)的一種器官特異性抗體，它是一種分子量為38kDa的核蛋白，是NK×2轉(zhuǎn)錄因子家族中的一員，表達(dá)于肺和甲狀腺的上皮細(xì)胞、甲狀腺濾泡旁C細(xì)胞、胚胎大腦的某些區(qū)域［4，5］。其它部位的上皮細(xì)胞如肝細(xì)胞，胃腸道上皮細(xì)胞，乳腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞，腎和前列腺的上皮細(xì)胞均不表達(dá)，間皮源性細(xì)胞也不表達(dá)，因此TTF-1可以用于鑒別轉(zhuǎn)移性腺癌細(xì)胞和間皮源性細(xì)胞，還有助于確定腺癌細(xì)胞的來(lái)源。組織學(xué)研究發(fā)現(xiàn)TTF-1在肺腺癌、甲狀腺癌(包括濾泡性癌和髓樣癌)中的敏感性和特異性都很高［6-9］，本組試驗(yàn)數(shù)據(jù)表明TTF-1在漿膜腔積液轉(zhuǎn)移性肺腺癌細(xì)胞具有較高的敏感性和特異性，所以在排除甲狀腺癌的可能性后，TTF-1陽(yáng)性表達(dá)很大程度上提示腺癌細(xì)胞原發(fā)于肺。

細(xì)胞塊免疫細(xì)胞化學(xué)染色操作簡(jiǎn)便，所需費(fèi)用少。TTF-1表現(xiàn)為核陽(yáng)性，背景清晰，陽(yáng)性結(jié)果容易判斷。有些研究報(bào)導(dǎo)，TTF-1在肺和肺外其他器官的小細(xì)胞癌、肺硬化性血管瘤也有很高敏感性和特異性［10］，有待于進(jìn)一步研究。

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