馬揚(yáng) 梁麗

熱休克蛋白(heat shock protein，HSPs)是一組高度保守且廣泛表達(dá)的蛋白質(zhì)分子家族，因其可隨多種應(yīng)激反應(yīng)如高溫、感染等而快速上調(diào)，亦被稱為應(yīng)激蛋白(stress protein)。HSP60是其中的一個(gè)大家族，近來已成為研究的熱點(diǎn)，研究認(rèn)為HSP60有致動(dòng)脈粥樣硬化作用，并能促進(jìn)炎癥反應(yīng)釋放各種細(xì)胞因子從而引起粥樣斑塊不穩(wěn)定［1，2］。本文通過測(cè)定血清HSP60水平，探討HSP60水平與冠狀動(dòng)脈病變的發(fā)生及嚴(yán)重程度的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2010年12月～20011年5月在我院住院的冠心病患者78例(冠心病組)，所選病例均符合WHO關(guān)于缺血性心臟病的診斷標(biāo)準(zhǔn)。其中男45例，女33例;平均年齡(59±6)歲;其中急性心肌梗死(AMI)31例，不穩(wěn)定型心絞痛(UAP)30例，穩(wěn)定型心絞痛(SAP)17例，排除：(1)嚴(yán)重或活動(dòng)性感染性疾病;(2)嚴(yán)重血液性疾病;(3)肝腎功能不全;(4)骨髓移植術(shù);(5)風(fēng)濕瓣膜性心臟病;(6)嚴(yán)重創(chuàng)傷或腫瘤;(7)近期使用抗氧化、非甾體類消炎鎮(zhèn)痛藥等;(8)免疫性疾病。選取本院健康體檢者70例為對(duì)照組，男40例，女30例;平均年齡(51±9)歲。組間年齡、性別比、體重指數(shù)、吸煙史、家族史差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 方法 所有受檢者禁食水8 h以上，于清晨抽取空腹靜脈血2 ml，4 000 r/min離心15 min分離血清，-80℃保存血清以備集中測(cè)定HSP60抗體。實(shí)驗(yàn)時(shí)吸取上層血清100μl，應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)測(cè)定血清中可溶性HSP60水平，試劑盒由上海西唐生物科技有限公司提供，嚴(yán)格按照試劑盒操作，靈敏度為1.0μg/L。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料以±s表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)，多組樣本均數(shù)采用單因素方差分析(ANOVA)，組間比較采用dunnett-t檢驗(yàn)或q檢驗(yàn)，P ＜0.05為差異統(tǒng)計(jì)學(xué)有意義。

2 結(jié)果

2.1 冠心病組患者血清HSP60水平為(3 198±1 215)pg/ml，健康對(duì)照者為(396±201)pg/ml，2組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見表1。

2.2 冠心病組各亞型間AMI與UAP組血清HSP60較SAP組明顯升高，AMI患者血清HSP60水平亦高于UAP組(P＜0.05)。見表1。

3 討論

HSP60在進(jìn)化中高度保守，其主要定位于細(xì)胞線粒體內(nèi)，作為分子伴侶生理狀態(tài)下，參與新生蛋白質(zhì)多肽鏈的正確折疊及裝配，并可使未折疊、錯(cuò)折疊失活的多肽鏈重新折疊產(chǎn)生生物活性，提高細(xì)胞對(duì)熱及其他刺激的耐受性。在應(yīng)激狀態(tài)下如冷熱、缺血缺氧、糖分損失、組織創(chuàng)傷、游離自由基的作用、微生物感染以及有機(jī)毒物、重金屬、砷、福等環(huán)境因素，都可誘導(dǎo)HSP過度表達(dá)或異位表達(dá)，作為一種自身抗原被免疫系統(tǒng)識(shí)別，激發(fā)機(jī)體免疫應(yīng)答或作為一種信號(hào)分子在信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中起作用。

動(dòng)脈粥樣硬化(AS)被認(rèn)為是一種免疫炎性疾病，眾多研究表明炎癥標(biāo)記物如CRP以及感染肺炎衣原體、巨細(xì)胞病毒抗體均AS的發(fā)生明確相關(guān)，免疫炎性反應(yīng)是動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成的始動(dòng)因素，同時(shí)也是斑塊不穩(wěn)定重要原因之一［3］。研究表明HSP60、LPS、ox2LDL等自身抗原可誘發(fā)機(jī)體自身免疫反應(yīng)，其中HSP60是近來最為重視的抗原，由于人類與原核生物HSP60基因序列70%的同源性，應(yīng)激狀態(tài)下的血管內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞HSP60表達(dá)增多，通過TLR受體信號(hào)通路誘導(dǎo)大量的細(xì)胞因子如 IL-6、IL-10、TNF-α、E-選擇素、ICAM-1、VCAM等，促進(jìn)炎癥反應(yīng)加速了粥樣斑塊形成［4］。同時(shí)外源HSP60與內(nèi)源HSP60表位發(fā)生交叉反應(yīng)，機(jī)體抗HSP60免疫反應(yīng)增強(qiáng)，進(jìn)一步導(dǎo)致血管損傷。

本研究中，冠心病患者較正常對(duì)照人群血清HSP60水平明顯增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。且不穩(wěn)定的冠心病患者(AMI，UAP)中，血清HSP60較對(duì)照組及SAP者均明顯升高。此外，心肌梗死患者血清HSP60亦高于不穩(wěn)定型心絞痛患者。由此可見，HSP60水平與動(dòng)脈粥樣硬化病變的嚴(yán)重程度成正比，HSP60水平上升可能預(yù)測(cè)斑塊的不穩(wěn)定性，這與國內(nèi)外學(xué)者研究一致。Zhang等［5］研究發(fā)現(xiàn)Hsp60水平升高導(dǎo)致冠心病風(fēng)險(xiǎn)增加，且急性心肌梗塞可導(dǎo)致Hsp60釋放。Xiao等［6］的5年隨訪研究顯示高水平的HSP60與早期頸動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)，其可能為早期血管炎癥的促發(fā)因素。因此檢測(cè)血清HSP60水平將有助于冠心病的診斷，HSP60有望成為CHD的一個(gè)新的獨(dú)立危險(xiǎn)因子。

表1 冠心病組與對(duì)照組間血清HSP60水平表達(dá)情況±s

表1 冠心病組與對(duì)照組間血清HSP60水平表達(dá)情況±s

注：與對(duì)照組比較，*P ＜0.05;與AMI比較，#P ＜0.05;與UAP比較，△P ＜0.05

AMI(n=31) 4 556±925 UAP(n=30) 2 914±492#SAP(n=17) 1 223±396#△

1 Xu Q，Schet G，Perschinka H，et al.serum soluble heat shock protein 60 is elevated in subjcets with atheroscleors is in a genera1 population.Circulation，2000，102：14-20.

2 Hasan A，Sadoh D，Palmer R，et al.The immune responses to human and microbial heat shock proteins in periodontal disease with and without coronary heart disease.Clin Exp Immunol，2005，142：585-594.

3 Wick G，Knoflach M，Xu Q.Autoimmune and inflammatory mechanisms in atherosclerosis.Annu Rev Immunol，2004，22：361-403.

4 Mandal K，Afzal AR，Brecker SJ，et al.Association of serum soluble heat shock protein 60 with toll-like receptor 4 polymorphism and severity of coronary artery disease.Heart，2006，92：683-685.

5 Zhang X，He M，Cheng L，et al.Elevated heat shock protein 60 levels are associated with higher risk of coronary heart disease in Chinese.Circulation，2008，118：2687-2693.

6 Xiao Q，Mandal K，Schett G，et al.Association of serum-soluble heat shock protein 60 with carotid atherosclerosis：clinical significance determined in a follow-up study.Stroke，2005，36：2571-2576.